Bioquímica Agrícola
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Item Estudo filogeográfico e análise comparativa dos modelos de classificação do Porcine circovirus-2 (PCV-2).(Universidade Federal de Viçosa, 2010-07-30) Vidigal, Pedro Marcus Pereira; Silva Júnior, Abelardo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4771645P8; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782432A8; Lamêgo, Márcia Rogéria de Almeida; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782197P4; http://lattes.cnpq.br/4423245295284314; Ramos, Humberto Josué de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/4037452920080174; Heinemann, Marcos Bryan; http://lattes.cnpq.br/2008760316007525Os agentes infecciosos de suínos têm recebido grande atenção desde a última década, quando muitos países produtores acumularam perdas econômicas significativas devido a patógenos como o Porcine circovirus-2 (PCV-2). O PCV-2 é um vírus classificado na família Circoviridae e está associado a um conjunto de diferentes síndromes em suínos denominado Porcine Circovirus Associated Diseases (PCVAD). Desde a sua identificação e caracterização, o PCV-2 alcançou uma distribuição mundial e a PCVAD tornou-se uma síndrome endêmica na maioria dos países produtores, sendo considerada a principal causa por perdas nas granjas. Neste trabalho, as nomenclaturas propostas para a classificação das linhagens virais foram comparadas e as vias de dispersão do PCV-2 entre os países suinocultores foram analisadas. Uma pesquisa por sequências genômicas do PCV-2 foi realizada no GenBank e 350 sequências de isolados virais foram aleatoriamente selecionadas. Os modelos de classificação do PCV-2 em genótipos, recomendado pelo Consórcio Europeu que estuda as Porcine circovirus diseases (PCVD) e definido por análises de mismatch distibution, e o modelo de classificação em subgrupos filogenéticos, modelo alternativo e definido por hipóteses filogenéticas, foram aplicados ao conjunto de sequências selecionado. Tanto nas análises de mismatch distribution quanto nas análises filogenéticas, os agrupamentos formados e as variações observadas foram muito semelhantes. Nessas análises, observou-se a sobreposição entre os agrupamentos em genótipos e em subgrupos filogenéticos. O genótipo PCV-2a foi correspondente ao Grupo 2 e reuniu os subgrupos 2A, 2B, 2C, 2D e 2E. O genótipo PCV-2b foi correspondente ao Grupo 1 e reuniu os subgrupos 1A, 1B e 1C. O genótipo PCV-2c reuniu apenas a sequência do isolado viral que o define. Esses resultados mostram que as subdivisões existentes nos genótipos PCV-2a e PCV-2b não devem ser desconsideradas para que a diversidade genética existente entre os isolados virais do PCV-2 não seja subestimada. No estudo filogeográfico, as vias de dispersão do PCV-2 foram preditas por meio de abordagens filogenéticas e filogeográficas. Nas análises filogenéticas, as árvores foram calculadas por inferência bayesiana e os isolados virais foram agrupados nos genótipos PCV-2a, PCV-2b e PCV-2c. Nas análises filogeográficas, uma rede de haplótipos foi calculada pelo algoritmo Median Joining, para o estabelecimento da genealogia entre os isolados virais, e as vias de dispersão entre os países foram preditas. Para dar suporte a essas análises, dois bancos de dados foram organizados. O primeiro banco de dados reuniu todas as informações disponíveis sobre os isolados do PCV-2 no GenBank e nas publicações relacionadas ao isolamento viral. O segundo banco de dados reuniu as estatísticas do comércio internacional de suínos vivos disponíveis no United Nations Commodity Trade Statistics Database DESA/UNSD e foi organizado para estabelecer um contexto econômico às vias preditas na rede de haplótipos. A partir dessas análises e desses bancos de dados, as seguintes vias de dispersão do PCV-2 entre os países produtores de suínos foram preditas: América do Norte → África, América do Norte → América do Sul, América do Norte → Caribe, Europa → América do Norte, Europa → América do Sul, Europa → Ásia, Oceania → Ásia e Oceania → América do Norte. Nessas vias de dispersão, os principais países de origem das vias são o Canadá, os Estados Unidos, a Dinamarca, a França e a Holanda, que são os principais exportadores de animais no mercado internacional de suínos vivos. As correlações observadas entre as vias de dispersão do PCV-2 preditas nas análises filogeográficas e as estatísticas do comércio internacional de suínos vivos mostram a importância do movimento de animais no rebanho mundial para a emergência de novos patógenos e a necessidade da criação de barreiras sanitárias cada vez mais eficazes no comércio de animais.Item Construção de cassetes de expressão para silenciamento de genes da biossíntese de ácidos graxos em soja via RNA de interferência(Universidade Federal de Viçosa, 2007-02-28) Sousa, Cassiana Severiano de; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Oliveira, Luiz Orlando de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781626T2; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/2126288732219018; Ribon, Andréa de Oliveira Barros; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727026E6; Lima, Andréia Barcelos Passos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4766019H4O óleo de soja é composto em sua maior parte por gordura insaturada, sendo que os ácidos graxos polinsaturados (ácidos linoléico e linolênico), monoinsaturado (ácido oléico) e saturados (ácido palmítico e esteárico) correspondem, em média, a 61%, 25% e 15%, respectivamente. Alterações nas proporções relativas destes ácidos graxos na fração óleo, podem ser obtidas pela modificação genética da expressão de enzimas-chave da biossíntese de ácidos graxos polinsaturados, através de transformação genética de plantas via silenciamento gênico. Dentre essas enzimas, destacam-se as dessaturases, as fosfotransferases e as aciltransferases. Através da modificação da expressão dessas enzimas, é possível a obtenção de linhagens de soja com óleos com menor conteúdo de ácido linolênico, maior conteúdo de ácido oléico e, conseqüentemente, maior estabilidade oxidativa. Os objetivos deste trabalho foram isolar os fragmentos dos genes da oleoil dessaturase, 1,2-diacilglicerol colinafosfotransferase e lisofosfatidilcolina aciltransferase e construir cassetes de expressão para o silenciamento, via RNA de interferência, para esses três genes em sementes de soja. Foi possível isolar os fragmentos dos três genes, subclonar os fragmentos sense e antisense no vetor pKANNIBAL e transferir as construções para o vetor binário pCAMBIA 3301. Foram obtidos quatro cassetes de expressão para silenciamento gênico. Destes, dois foram para o gene da oleoil dessaturase, um para o gene da 1,2-diacilglicerol colinafosfotransferase e o outro para o gene da lisofosfatidilcolina aciltransferase. Para os três genes foram obtidos cassetes de silenciamento dirigidos pelo promotor 35SCaMV, sendo que para a dessaturase também foi obtido o cassete com o promotor do gene da subunidade α da proteína de reserva de soja β-conglicinina.Item Seleção de genes candidatos, identificação e validação de marcadores SNPs para conteúdo de óleo em soja(Universidade Federal de Viçosa, 2013-02-21) Souza, Franciele Barros de; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Piovesan, Newton Deniz; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728400U5; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/5657135240353986; Soares, Taís Cristina Bastos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4768998Y9A soja é uma cultura agrícola amplamente distribuída por quase todas as regiões do mundo. É uma das principais oleaginosas produzidas e tornou-se uma espécie de grande interesse, devido aos teores elevados de proteína e óleo, à produtividade dos grãos e à possibilidade de sua adaptação a ambientes diversos. Tem sido muito visada como matéria prima renovável, principalmente na produção de biodiesel, sendo uma alternativa para diminuição da dependência dos derivados de petróleo. Diferentes marcadores moleculares são utilizados como ferramentas para a compreensão de herança, relações entre indivíduos e populações e para auxiliar no processo de seleção de caracteres quantitativos. Os marcadores SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) têm sido usados em estudos de associação baseados em genes candidatos. Para isto, tecnologias de genotipagem para identificação de SNPs, têm apresentado grandes avanços, como a análise de dissociação em alta resolução (High Resolution Melting analysis Analysis - HRMA), que é um método pós-PCR, para identificar alterações no DNA através da observação da distorção que ocorre na curva de dissociação das amostras. Baseado nestas descrições objetivou-se neste trabalho, selecionar genes candidatos para conteúdo de óleo em soja, identificar SNPs e validá-los em uma população de RILs (linhagens recombinantes endogâmicas), oriundas do cruzamento entre genótipos parentais Suprema e CD01RR8384. Foi possível selecionar 25 genes relacionados à biossíntese de lipídeos no soybase e, através do Northen eletrônico, pode-se observar que 14 destes genes foram expressos. Na análise de polimorfismos dos 14 genes, foram encontrados 52 SNPs, e com a genotipagem HRM na população de RILs, verificou-se o perfil de homozigoze e heterozigoze, havendo eficiência na identificação dos SNPs. Realizando-se a validação dos SNPs na população, observou-se que não foi possível associar os polimorfismos com as variações fenotípicas. Os SNPs distribuíram-se aleatoriamente, independente do conteúdo de óleo. Esta não correlação pode ser devido ao uso de uma população de RILs cultivada em um único ambiente e a possibilidade de ter sido selecionado QTLs de pequeno efeito.Item Perfil enzimático da α-amilase e da lipase e biometria de órgãos de codornas (Coturnix coturnix japonica) de um a 25 dias de idade(Universidade Federal de Viçosa, 2006-09-29) Müller, Elisa Sialino; Cecon, Paulo Roberto; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788114T5; Moraes, George Henrique Kling de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4721569T7; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4744723D8; Rodrigues, Ana Cláudia Peres; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4794298P7; Guimarães, Valéria Monteze; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4798758T3; Albino, Luiz Fernando Teixeira; http://lattes.cnpq.br/7930540518087267Foi realizado um experimento com o objetivo de determinar o perfil das enzimas α-amilase e lipase e a biometria de órgãos de codornas poedeiras (Coturnix coturnix japonica) de um a 25 dias de idade. Avaliou-se o peso vivo das aves, e os pesos do pâncreas, do coração, da moela e do fígado bem como a atividade enzimática da α-amilase e da lipase no pâncreas e no quimo. Foram utilizadas 90 codornas japonesas fêmeas com um dia de idade, sendo 30 codornas por boxe forrados com maravalha. As aves foram tratadas com rações balanceadas segundo as exigências nutricionais. Ração e água foram fornecidas à vontade. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com seis idades de avaliação e cinco repetições, sendo cada animal uma unidade experimental. Aos 1, 5, 10, 15, 20 e 25 dias de idade, cinco animais de cada idade foram sacrificados por deslocamento cervical. O pâncreas e o quimo foram coletados, pesados, congelados em nitrogênio líquido e acondicionados sob refrigeração a -20 ºC. Uma alíquota dos tecidos foi coletada, homogeneizada com água destilada para a determinação das atividades da α-amilase e da lipase no homogenato com kit colorimétrico. A concentração de proteína foi determinada pelo método de Lowry. O peso vivo apresentou-se de forma linear crescente com a idade, indicando que os níveis dos nutrientes da dieta foram adequados para o desempenho dos animais. A biometria dos órgãos apresentou tendência de crescimento linear, mas quando comparado ao peso vivo, houve um comportamento alométrico do crescimento do pâncreas, do primeiro ao quinto dia. Os perfis das enzimas amilase e lipase do pâncreas e do quimo foram estabelecidos por modelos que explicam o comportamento observado no período. A atividade da amilase pancreática foi responsiva ao estímulo da dieta, e a lipase pancreática demonstrou uma diminuição na atividade nos primeiros dias e se manteve em níveis mais baixos no decorrer das outras idades.Item Determinantes virais envolvidos na adaptabilidade diferencial de dois begomovírus em tomateiro e Nicotiana benthamiana(Universidade Federal de Viçosa, 2011-12-16) Antunes, Tathiana Ferreira Sá; Fontes, Elizabeth Pacheco Batista; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781848H2; Zerbini Júnior, Francisco Murilo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783743U5; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/1906798499649337; Zerbini, Poliane Alfenas; http://lattes.cnpq.br/8632328159533071Os begomovírus (família Geminiviridae) possuem genoma constituído por um ou dois componentes de DNA de fita simples circular, e infectam plantas dicotiledôneas. Os sintomas induzidos pelo begomovírus Tomato yellow spot virus (ToYSV) em tomateiro e Nicotiana benthamiana são mais severos e surgem mais cedo em comparação aos induzidos pelo Tomato rugose mosaic virus (ToRMV). Além disso, o ToYSV invade o mesofilo em N. benthamiana, enquanto o ToRMV é restrito ao floema nesse hospedeiro (ambos os vírus são restritos ao floema em tomateiro). Essas observações indicam uma adaptação diferencial de cada um desses vírus aos seus hospedeiros. Com o objetivo de mapear os determinantes genéticos virais responsáveis por essa adaptação diferencial, foram construídos três recombinantes com base na troca dos genes MP e NSP e da região BRi entre esses vírus, em diferentes combinações. Os experimentos com os recombinantes foram realizados para determinar o ganho ou a perda das seguintes características: intensidade de sintomas, acúmulo de DNA viral e tropismo de tecido. Os recombinantes recíprocos nos quais os genes MP e NSP foram trocados apresentaram sintomas de intensidade intermediária em comparação aos vírus parentais em ambos os hospedeiros, e o mesmo tropismo de tecido em N. benthamiana. Já o recombinante no qual a região BRi do ToYSV foi inserido no DNA-B do ToRMV foi capaz de infectar o mesofilo em N. benthamiana. Em conjunto, esses resultados sugerem que as proteínas MP e NSP e a região BRi estão envolvidas na adaptação do ToYSV em tomateiro e N. benthamiana, e que a região BRi é o determinante viral de tropismo de tecido em N. benthamiana. Outras proteínas e sequências regulatórias presentes no DNA-A também devem estar envolvidas na adaptação desses vírus, no entanto experimentos adicionais, incluindo a análise do recombinante no qual a região BRi do ToRMV esteja inserida no DNA-B do ToYSV, são necessários para a identificação precisa dessas regiões.Item Caracterização do perfil de ácidos graxos em leite de cabra por diferentes métodos de extração de gordura ou por metilação direta(Universidade Federal de Viçosa, 2011-07-04) Madureira, Plínio Magalhães; Detmann, Edenio; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4760013T1; Rodrigues, Marcelo Teixeira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788161Y5; Moraes, George Henrique Kling de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4721569T7; http://lattes.cnpq.br/1111892534834228; Silva, Márcia Maria Cândido da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4700519H2; Oliveira, Tânia Toledo de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787758J2; Queiroz, Augusto César de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783006P5Objetivou-se caracterizar o perfil de ácidos graxos em leite de cabra por quatro métodos distintos de extração da gordura do leite e um método de metilação direta com posterior análise por cromatografia gasosa. As amostras foram obtidas no tanque de armazenamento de leite no setor de Caprinocultura do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Viçosa, onde se encontram caprinos das raças Saanen e Alpina, os quais são mantidos em baias coletivas sob o sistema de estabulação livre e recebendo alimentação à base de silagem de milho, feno de Tifton e concentrado. As metodologias utilizavam processos de extração por solventes orgânicos, hexano (NOUROOZ-ZADEH & APPELQUIST, 1988) e clorofórmio (BLIGH & DYER, 1959); extração somente por processos físicos de centrifugação (FENG et al. 2004); extração por centrifugação associada à extração por solvente (HARA & RADIN, 1978) e extração e metilação realizadas conjuntamente a partir do leite liofilizado (CHRISTIE et al. 1982). As análises demonstraram que o tempo longo de manipulação da amostra durante a extração da gordura do leite nos métodos que não utilizavam o leite liofilizado provoca perda dos ácidos graxos mais voláteis, sendo que a metodologia de extração e metilação a partir do leite liofilizado preserva mais os teores dos ácidos graxos de cadeia curta e média do leite caprino. O método proposto por CHRISTIE et al. (1982) foi o que mais se destacou,notadamente em relação aos ácidos graxos butírico (C4), capróico (C6), caprílico (C8) e cáprico (C10), apresentando concentrações (g/100g de gordura) (P<0,05) maiores para esses AGs em relação aos demais métodos analíticos.Item Correlação entre a expressão dos genes da subunidade α da β-conglicinina e GmFAD2-1A durante o desenvolvimento da semente de soja(Universidade Federal de Viçosa, 2010-02-25) Cunha, Pricila da Silva; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/2712020388620043; Fietto, Juliana Lopes Rangel; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790238D0; Oliveira, Márcia Rodrigues Carvalho; http://lattes.cnpq.br/0568726713111558O aumento no conteúdo de ácido oléico e diminuição nos níveis dos ácidos graxos polinsaturados (linolênico e linoléico) na semente de soja pode ser alcançado pela redução da atividade da enzima ω-6 dessaturase microssomal através do silenciamento do gene GmFAD2-1A que codifica para essa enzima, resultando na produção de óleos com elevada estabilidade oxidativa. O silenciamento deve ocorrer especificamente na semente de forma a não alterar as características agronômicas da planta e não interferir negativamente no seu crescimento e desenvolvimento. Para isso, o transgene deve estar sob controle de um promotor semente-específico como o promotor do gene da subunidade α da β-conglicinina (promotor pBC). O principal objetivo desse trabalho foi correlacionar o padrão de expressão do gene que codifica a subunidade α da β-conglicinina (gene BC) com o padrão de expressão do gene GmFAD2-1A ao longo do desenvolvimento da semente de soja em cinco variedades que diferem quanto ao teor protéico ("normal" e "alto") e ao ciclo de vida (precoce e tardio). E, através dessa correlação, analisar se opromotor pBC apresenta potencial para ser usado em futuros experimentos de transformação genética de soja que tenha como objetivo silenciar o gene GmFAD2-1A. A análise do padrão de expressão dos genes BC e GmFAD2-1A foi feita por PCR em Tempo Real (qRT-PCR) utilizando dois controles endógenos (GAPDH e EF1b). A subunidade α da β-conglicinina foi quantificada por SDSPAGE/ densitometria durante o desenvolvimento da semente em todos os cinco cultivares. De modo geral, a concentração da subunidade α daβ-conglicinina foi inferior em estádios iniciais de desenvolvimento da semente, aumentando em estádios do meio para o final da maturação, indicando que ocorreu um acúmulo desse polipeptídeo ao longo do enchimento do grão, e apresentando uma concentração alta e significativa na semente madura. As variedades de teor protéico "normal" apresentaram concentrações superiores da subunidade α quando comparadas com suas respectivas isolinhas de maiores teores protéicos, o que ocorreu em estádios do meio para o final da maturação. Os dois genes endógenos (GAPDH e EF1b) normalizaram os dados de expressão dos genes BC e GmFAD2-1A de modo muito similar, com as principais diferenças ocorrendo nos perfis de expressão dos dois genes alvos em estádios do meio e final da maturação nas variedades de ciclo precoce. Entretanto, GAPDH foi melhor normalizador do que EF1b, mostrando expressão mais estável entre todos os tratamentos. De modo geral, o gene BC apresentou maior padrão de expressão em estádios do início e meio da maturação da semente, sendo que nesses estádios pode-se sugerir que o promotor pBC atingiu sua capacidade máxima para ativar a transcrição do gene alvo, com a expressão do gene BC diminuindo em direção aos estádios finais de desenvolvimento da semente. Pode-se sugerir que essa diminuição na expressão do gene BC esteja associada à uma diminuição na atividade do promotor pBC, embora ele ainda permanecesse suficientemente ativo para garantir um nível alto de expressão do transgene em futuros experimentos transformação genética de soja. Nenhuma diferença significativa foi encontrada no padrão de expressão do gene BC quando se comparou uma variedade de soja e sua respectiva isolinha de maior teor protéico ao longo do desenvolvimento da semente. De modo geral, enquanto a concentração da subunidade α foi inferior em estádios iniciais da maturação (1° e 2°), o gene BC apresentou maior padrão de expressão em estádios do início e meio do desenvolvimento da semente (2° e 3°). A partir do 3° estádio em direção ao final da maturação, houve um aumento na concentração da subunidade α enquanto verificou-se uma diminuição na expressão do gene BC em vários desses estádios. A principal diferença foi encontrada na semente madura de todas as variedades que apresentou uma alta concentração do polipeptídeo, apesar de uma expressão quase nula do gene BC. De forma geral, não foi encontrado um padrão de expressão do gene BC e de concentração da subunidade α que permitisse diferenciar o grupo de variedades de ciclo tardio do grupo de ciclo precoce. Em relação ao gene GmFAD2-1A, de modo geral, as variedades de ciclo tardio apresentaram maior padrão de expressão gênica em estádios do meio para o final do desenvolvimento da semente, enquanto nos cultivares de ciclo precoce o gene GmFAD2-1A mostrou maior padrão de expressão em estádios do início e meio da maturação. Assim como para o gene BC a expressão de GmFAD2-1A foi quase nula na semente madura para todas as variedades. De modo geral, a correlação entre o padrão de expressão dos genes BC e GmFAD2-1A nas variedades de ciclo tardio mostrou que nos estádios em que houve maior taxa de transcrição do gene GmFAD2-1A a expressão do gene BC diminuiu após atingir um pico de expressão no 3° estádio. Entretanto, a expressão do gene BC foi ainda superior à do gene GmFAD2-1A nesses estádios. Dessa forma, para os cultivares de ciclo tardio, nos estádios em que o gene GmFAD2-1A apresentou os maiores valores de expressão pode-se sugerir que o promotor pBC está ativo ou com uma capacidade máxima para ativar a transcrição do gene alvo. Nos cultivares de ciclo precoce essa correlação mostrou que os genes BC e GmFAD2-1A apresentaram um padrão de expressão semelhante, com valores elevados de expressão gênica em estádios do início e meio da maturação (2° e 3°), diminuindo em estádios posteriores de desenvolvimento da semente. Portanto, pode-se sugerir que a maior atividade do promotor pBC ocorreu nos mesmos estádios em que foram encontrados os maiores valores de expressão do gene GmFAD2-1A. Dessa forma, pode-se sugerir que o promotor do gene da subunidade α daβ-conglicinina apresenta elevado potencial para ser usado em futuros experimentos de transformação genética que tenha como objetivo silenciar o gene GmFAD2-1A ao longo do desenvolvimento da semente de soja em todos os cultivares analisados.Item Análises biométricas da produtividade, composição de açúcares solúveis e polissacarídeos não-amídicos (PNAs) na seleção de genótipos de soja(Universidade Federal de Viçosa, 2009-02-17) Bueno, Rafael Delmond; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Oliveira, Maria Goreti de Almeida; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790894D6; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/5163173387452113; Piovesan, Newton Deniz; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728400U5; God, Pedro Ivo Vieira Good; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4769361T9; Guimarães, Valéria Monteze; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4798758T3A soja é um grão de alto valor nutricional, é utilizada como base para vários produtos, portanto existe uma demanda crescente por genótipos de soja com alta produtividade e características de qualidade específicas. Assim, torna-se importante a caracterização de genótipos de soja quanto aos componentes bioquímicos relativos à qualidade e também quanto aos fatores antinutricionais, os quais limitam o uso da soja na alimentação humana e de animais monogástricos. Este trabalho teve os seguintes objetivos gerais; avaliar a interação genótipo x ambiente quanto à produtividade e as concentrações de proteína, sacarose, rafinose e estaquiose em soja; estimar as correlações entre caracteres analisados no presente trabalho; selecionar genótipos de soja, os quais poderão ser utilizados em programas que visam aumentar a qualidade nutricional do grão de soja, visando o uso na alimentação humana e de animais monogástrico. Para isto, foram avaliados 18 genótipos de soja, cultivados nas estações experimentais da COOPADAP situadas nos Municípios de Mineiros-GO, Perdizes-MG, São Gotardo-MG e Presidente Olegário-MG, no ano agrícola 2005/2006. Os experimentos foram executados em blocos casualizados, com três repetições. Foi determinada a produtividade média (Kg ha-1) dos 18 genótipos nos quatro ambientes, assim como, as concentrações: de proteína utilizando um espectrômetro infravermelho (NIR); sacarose, rafinose e estaquiose por HPLC. As análises estatísticas foram realizadas com o auxílio do aplicativo computacional em genética e estatística, Programa GENES. Na análise de variância conjunta, verificaramse efeitos significativos para ambiente e genótipo x ambiente (p<0,01), para todas as cinco características avaliadas. Foram detectados efeitos significativos de genótipo (p<0,01) para produtividade e proteína e (p<0,05) para sacarose e rafinose. As análises de adaptabilidade e estabilidade foram realizadas utilizando-se o método de Lin e Binns (1988) modificado por Carneiro (1998) e método de Centróide. Os dois métodos empregados mostraram coerência e permitiram identificar os genótipos mais estáveis e responsivos a melhoria do ambiente como sendo também os que apresentaram maior produtividade e maiores concentrações de proteína, sacarose, rafinose e estaquiose. Os genótipos que se destacaram pela ampla adaptabilidade segundo as duas metodologias empregadas no presente trabalho foram; considerando a variável produtividade, as cultivares VENCEDORA e MSOY 8001; para concentração de proteína, a cultivar ELITE; para concentração de sacarose, a linhagem CS 01 736; para a concentração de rafinose, a linhagem CS 02 988 e para a concentração de estaquiose, a cultivar MSOY 8001. Produtividade e concentração de proteína apresentaram correlação negativa, o que mostra que a seleção para um determinado caráter pode provocar o declínio do outro. A correlação entre a produtividade e concentração de sacarose não foi significativa. O mesmo comportamento foi observado entre a concentração de proteína vs concentração de sacarose e entre a concentração de proteína vs concentração de estaquiose. O fato desses caracteres não estarem correlacionados facilita a seleção de genótipos com alta concentração de sacarose e alta produtividade, ou ainda, genótipos com altas concentrações de sacarose e proteína. A correlação entre produtividade vs concentração de rafinose e produtividade vs concentração de estaquiose foram negativas e significativas, essa correlação negativa e significativa facilita a seleção de genótipos com alta produtividade e com baixas concentrações de rafinose e estaquiose. A concentração de sacarose apresentou altos e positivos coeficientes de correlação com as concentrações de rafinose e estaquiose, indicando a impossibilidade de se fazer à seleção direta de indivíduos com alta concentração de sacarose e baixas concentrações de rafinose e estaquiose. A segunda parte do presente trabalho foi realizada utilizando seis genótipos de soja cultivados no Município de Mineiros-GO. Foi demonstrado que a metodologia adaptada para quantificar fatores antinutricionais termoestáveis, tais como, os Polissacarídeos não-amídicos em soja, utilizando a técnica cromatográfica HPLC, se mostrou de boa precisão. Não foi encontrada correlações significativas entre Produtividade vs PNAs,Óleo vs PNAs e Proteína vs PNAs entre os seis genótipos analisados. O fato desses caracteres não estarem correlacionados facilita a seleção de genótipos com melhor qualidade nutricional, pois possibilita ao melhorista diminuir os conteúdos de PNAs totais, PNAs insolúveis e principalmente os PNAs solúveis, sem afetar a produtividade e as concentrações de óleo ou de proteína. As variáveis produtividade e concentração de óleo apresentaram altos e positivos coeficientes de correlação com as concentrações de carboidratos totais e açucares solúveis, indicando a dificuldade de se fazer a seleção direta de indivíduos com alta produtividade ou altas concentrações de óleo e ao mesmo tempo, com baixas concentrações de carboidratos totais e açucares solúveis. Proteína correlacionou-se negativamente com as concentrações de carboidratos totais e açucares solúveis, esse resultado favorece a seleção de genótipos com altas concentrações de proteína e com baixas concentrações de carboidratos totais e açucares solúveis.Item Identificação e validação de marcadores moleculares indel e SNP para lipoxigenases de sementes de soja(Universidade Federal de Viçosa, 2009-07-06) Silva, Danielle Fernandes da; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Oliveira, Luiz Orlando de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781626T2; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/7918289438245309; Miranda, Fábio Demolinari de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4706159T4; Schuster, Ivan; http://lattes.cnpq.br/9991337319211428; Moraes, Rita Maria Alves de; http://lattes.cnpq.br/2396993596781287A degradação oxidativa dos ácidos graxos da fração óleo de soja, que ocorre durante o processamento dos grãos, desenvolve o sabor de feijão cru que altera a palatabilidade e conseqüentemente aceitabilidade dos produtos à base de soja, resultando em problemas para a indústria de alimentos. A enzima lipoxigenase (linoleato: O2 oxirredutase, EC 1.13.11.12), catalizadora dessa reação oxidativa, está presente na semente de soja sob a forma de três isoenzimas codificadas por três genes dominantes, Lox1, Lox2 e Lox3. A seleção assistida por marcadores moleculares é uma área que possui grande impacto dentro dos programas de melhoramento. Recentemente, uma nova classe de marcadores moleculares, denominados indel (Inserção/deleção) e SNP (Single Nucleotide Polymorphism), vem sendo utilizada. Estes se baseiam na detecção de polimorfismos resultantes da alteração de uma única base no genoma. A identificação de marcadores moleculares dentro dos genes que codificam as lipoxigenases poderá auxiliar na seleção de alelos recessivos que determinam a ausência de lipoxigenases na semente, acelerando assim o processo de melhoramento da soja. Os objetivos desse trabalho foram a confirmação e identificação de polimorfismos presentes nas seqüências dos genes que codificam as lipoxigenases 2 e 3, respectivamente; entre variedades, de origem genética distintas, utilizadas no Programa de Melhoramento da Qualidade da Soja-BIOAGRO/UFV e validação de alguns desses polimorfismos como marcadores moleculares. Um par de primers para a LOX2 e 14 pares de primers desenhados para amplificar todo o gene da LOX3, foram utilizados para a obtenção dos fragmentos dos genes. As seqüências foram obtidas a partir do seqüenciamento direto dos produtos de PCR de cada par de primer. Posteriormente, uma população de RILs contrastantes para presença/ausência das lipoxigenases das sementes, foi utilizada para a validação de dois SNPs como marcadores dos genes LOX 2 e um indel como marcador para LOX 3. O método de genotipagem usado foi o seqüenciamento direto dos fragmentos que continham os polimorfismos em estudo. Dois SNPs para LOX 2 e o indel contido no primeiro éxon do gene LOX 3 co-segregaram com o caráter presença/ausência de LOX 2 e 3 respectivamente nos indivíduos da população de RILs. Esses polimorfismos têm potencial para serem utilizados como ferramentas no melhoramento da soja assistido por marcadores moleculares.Item Caracterização genética da resistência ao míldio (Peronosclerospora sorghi) em sorgo (Sorghum bicolor L. Moench)(Universidade Federal de Viçosa, 2008-04-30) Simões, Christiano Costa; Magalhães, Jurandir Vieira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782698J9; Oliveira, Luiz Orlando de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781626T2; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4269132A4; Guimarães, Cláudia Teixeira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782346A3; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6No presente trabalho, foram avaliadas 13 linhagens de sorgo do programa de melhoramento genético da Embrapa Milho e Sorgo quanto à reação a nove raças de Peronosclerospora sorghi. Dentre as linhagens foram identificadas cinco fontes de resistência às nove raças (BTx623, Tx430, SC414-12, QL- 3 e ARG-1) e duas linhagens (SC283 e ATF14B) susceptíveis às mesmas raças, sendo as demais resistentes às diversas combinações entre três e quatro raças. As cinco fontes de resistência foram cruzadas com a linhagem susceptível ATF14B e os F1´s autofecundados para gerar populações F2´s com 150 indivíduos aproximadamente. Pelo teste de qui- quadrado a 5% de probabilidade, foi determinado que as linhagens SC414-12, BTx623 e Tx430 apresentaram dois genes dominantes e independentes, enquanto as linhagens QL-3 e ARG-1 apresentaram apenas um gene de resistência para cada um dos seis raças mais importantes de P. sorghi (04A, 16A, 18A, 20A, 22A e 22B). Com base na freqüência de indivíduos resistentes e susceptíveis nas populações derivadas dos cruzamentos dialélicos entre as fontes de tolerância, há grande possibilidade de que as linhagens QL-3 e ARG-1 apresentem o mesmo gene de resistência às seis raças de P. sorghi, pois não foram identificadas plantas susceptíveis na F2. No entanto, por limitação do tamanho populacional não foi possível concluir sobre o número de genes segregando entre as linhagens resistentes, sugerindo a existência de efeitos epistáticos, de complementaridade entre genes e/ou diferenças no background genético. Uma população de 121 linhagens recombinantes originada do cruzamento entre BTx623 e uma linhagem susceptível (IS3620C) foi fenotipada pela reação às mesmas seis raças, sendo detectada a presença de dois genes dominantes de resistência na linhagem BTx623 para as raças 04A, 16A, 22A e 22B. Avaliando a coincidência da reação de susceptibilidade/ resistência na população de RILs, parece que um dos genes de resistência na linhagem BTx623 confere resistência às raças 04A e 16A enquanto as raças 22A e 22B também têm sua resistência devida a ação de um gene em comum. Por outro lado, não houve genes comuns conferindo resistência às raças 16A e 22A. Assim, o conjunto de dados obtidos fornece subsídios para a utilização de fontes de resistência ao míldio do sorgo, possibilitando a combinação de genes de resistência vertical de espectro amplo e genes específicos às raças no programa de melhoramento genético. Adicionalmente, as populações avaliadas estão prontas para o mapeamento com marcadores moleculares. A futura associação desses marcadores com a resistência ao míldio do sorgo e sua efetiva aplicação na seleção assistida para resistência ao míldio em sorgo é de grande interesse para o programa de melhoramento genético da Embrapa Milho e Sorgo.
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