Detecção e quantificação de Salmonella spp. em carcaças de frango artificialmente e naturalmente contaminadas através da microbiologia tradicional e método molecular

Abstract

A Salmonelose é uma enfermidade veiculada por alimentos que provoca sintomas relacionados principalmente ao trato gastrointestinal, como diarreias e vômitos, podendo também apresentar quadros de infecção sistêmica e até levar ao óbito. O microrganismo responsável pela doença é a Salmonella spp.. Esta doença, gera anualmente diversos surtos em vários países, assim como grandes prejuízos econômicos. Este agente é muito prevalente na indústria de produção de aves, por ser naturalmente presente no trato gastrointestinal das aves. A pesquisa, identificação e quantificação da Salmonella spp. é de grande interesse e importância para a indústria e consumidores afim de garantir um produto final seguro. Contudo, os métodos de detecção convencionais e atuais são laboriosos e exigem um período de 5 a 7 dias para conclusão do diagnóstico, além de fornecerem apenas dados de caráter qualitativo. Desta forma, o presente trabalho foi desenvolvido com o intuito de reduzir o tempo de detecção e fornecer resultados quantitativos utilizando uma associação das técnicas de Número Mais Provável Miniaturizado (mNMP) e Real Time Polymerase Chain Reaction (qPCR). Após padronização da técnica constatou-se sua aplicabilidade em amostras artificialmente contaminadas, posteriormente, 50 carcaças de frango congeladas obtidas do mercado local. Estas amostras foram submetidos a técnica de microbiologia tradicional à partir da Bacteriological Analytical Methods (BAM) e à associação de mNMP e qPCR. Os resultados obtidos indicaram uma frequência de 38% Salmonella spp., quando analisados os dados de ambas as técnicas aplicadas. A microbiologia convencional foi capaz de detectar 8% de positividade, enquanto a técnica associada de mNMP e qPCR detectou 34%. O intervalo de detecção das técnicas associadas foi de aproximadamente 36 horas e a partir destas foi possível quantificar a contaminação pelo agente. A quantificação das amostras positivas foi expressa em NMP/g e variou entre 0,35 NMP/g e 59NMP/g, sendo esta quantificação, um dado alarmante, que indica um grau de contaminação importante neste tipo de produto.

Salmonellosis is a foodborne disease that causes symptoms related mainly to the gastrointestinal tract, such as diarrhea and vomiting, and may also present systemic infections and even lead to death. The microorganism responsible for the disease is Salmonella spp.. This bacterium generates several outbreaks annually in various countries, as well as major economic losses. This agent is very prevalent in the poultry industry, as it is a naturally occurring bacterium in the gastrointestinal tract of these animals. The research, identification and quantification of Salmonella spp. is of great interest and importance to the industry to guarantee the end consumer a safe product. Despite this, conventional detection methods are currently laborious and require a period of 5-7 days to complete providing only qualitative data. The present work was developed to reduce detection time and to produce quantitative results using a combination of Miniaturized Most Probable Number (mMPN) and Real Time Polymerase Chain Reaction (qPCR) techniques. After standardization of the technique in samples artificially contaminated, the technique demonstrated its applicability in natural occurring Salmonella spp. samples. Posteriorly, 50 frozen chicken carcasses of 5 different brands were bought from retail, during the second semester of 2018 and first semester of 2019, processed and stocked. They were then subjected to the traditional microbiology technique using the Bacteriological Analytical Methods (BAM) and the association of mMPN and qPCR. The results indicated a frequency of 38% of Salmonella spp., when analyzing the combined data of both techniques applied. Conventional microbiology was able to detect 8% of positivity, while the associated mMPN and qPCR technique detected 34%. The detection interval of the associated techniques was approximately 36 hours and from these it was possible to quantify the contamination by the agent. Quantitation of positive samples was expressed in MPN/g and ranged from 0.35 MPN/g to 59 MPN/g, and this quantification is alarming, indicating a significant degree of contamination in this type of product.