Efeito in vitro da incorporação de colesterol à membrana plasmática de espermatozoides criopreservados de jumentos (Equus asinus) da raça pêga

Abstract

A criopreservação de sêmen asinino vem apresentando limitações na fertilidade que desestimulam sua utilização como rotina para profissionais que trabalham com a espécie. A incorporação de colesterol associado à ciclodextrina (CLC) tem se mostrado uma alternativa promissora por melhorar a resistência espermática ao processo de criopreservação em diversas espécies. Objetivou-se verificar os efeitos in vitro da adição de diferentes concentrações de CLC na viabilidade de espermatozóides criopreservados de jumentos da raça Pêga. Vinte e cinco ejaculados de cinco jumentos (cinco ejaculados por jumento) foram incubados a temperatura de laboratório por 15 minutos com diferentes concentrações de CLC: 0 mg (controle - CT), 1 mg (T1), 2 mg (T2) e 3 mg (T3) / 120 x 106 espermatozóides totais, antes do congelamento. As amostras foram descongeladas e avaliadas quanto à integridade física da membrana plasmática (SV), integridade funcional (HOST), morfologia espermática, longevidade (TTR) e viabilidade da membrana plasmática e do acrossoma (teste com sondas fluorescentes - IP/FITC-PNA). Os parâmetros físicos foram avaliador de forma subjetiva e objetiva (CASA). As amostras tratadas com CLC apresentaram maior integridade funcional e física (P<0,05) da membrana plasmática que as amostras do tratamento CT. A inclusão de CLC resultou em um aumento (P<0,05) nos valores de motilidade total e progressiva (CASA) para os três tratamentos quando comparado ao CT. Não foram observadas diferenças (P>0,05) na quantidade de células com a membrana plasmática e acrossoma intactos pelo testes de epifluorescência. Também não foi observada diferença entre os tratamentos durante o TTR para os parâmetros motilidade total e vigor espermático (P>0,05). A xv utilização de colesterol incorporado a ciclodextrina aumenta a resistência espermática aos processos de criopreservação, aumentando o número de células com motilidade e membrana íntegra. Novos estudos devem ser realizados para avaliar o efeito do CLC na fertilidade do sêmen asinino.

The cryopreservation of donkey semen has shown limitations on fertility that discourages their use as routine for professionals working with this species. Incorporation of cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) has proved a promising alternative to improve the resistance of spermatozoa cryopreservation in several species. The aim of this study was to determine the effects of adding different CLC concentrations on in vitro viability of frozen-thawed Pêga donkey spermatozoa. Twenty-five ejaculates from five donkeys (five ejaculates per animal) were submitted to different concentrations of CLC: 0 mg (control), 1 mg (T1), 2 mg (T2) and 3 mg (T3) / 120 x 106 total spermatozoa for 15 minutes before freezing. Samples were thawed and evaluated for physical integrity of sperm plasma membrane (eosin-nigrosin), functional integrity (HOST), sperm morphology, longevity (TTR), and viability of sperm plasma membrane and acrosome (tested with fluorescent probes - IP/FITC-PNA). Physical parameters were measured by subjective and objective (CASA) evaluation. Treated groups had higher physical and functional integrity plasma membrane (P<0.05) than control. Inclusion of CLC resulted either in higher total and progressive motile (CASA) (P<0,05). There were no differences in the amount of cells with plasmas membrane and acrossome intact by epifluorescence test (P>0.05). No difference was observed for total motility and vigor between treatments during TTR (P>0,05). The use of cholesterol- loaded cyclodextrin increases the resistance of frozen-thawed process, number of cells with motility and viable membranes (P<0,05). Futher studies should be conducted to evaluate the influence of CLC cryopreserved donkey spermatozoa fertility.