Análise da expressão gênica induzida por Phakopsora pachyrhizi em soja

Abstract

Ferrugem asiática da soja, uma doença causada pelo fungo Phakopsora pachyrhizi, tem provocado sérios danos econômicos à sojicultura brasileira e mundial. A obtenção de linhagens de soja resistentes ao fungo tem sido um desafio, e atualmente as medidas de controle da doença são baseadas no manejo da cultura e aplicação de fungicidas. Com o objetivo de avançar o conhecimento sobre o mecanismo molecular de defesa da planta frente a ferrugem asiática da soja, avaliou-se, através da técnica de PCR em tempo real, a expressão de genes que supostamente estão envolvidos no mecanismo de defesa. Dois genótipos foram selecionados para a condução do experimento, PI 230970, que possui o alelo Rpp2 e desenvolve lesões do tipo RB, quando em presença de P. pachyrhizi, e Embrapa-48, suscetível, desenvolvendo lesões tipo TAN. O experimento foi conduzido em sala climatizada (Fitotron) e para a análise de expressão gênica foram extraídos RNAs de folhas da soja inoculadas com o patógeno e falso-inoculadas (água). Dentre os genes avaliados, quitinase apresentou uma expressão 117 vezes maior no genótipo resistente (PI 230970), quando comparado com o calibrador (PI 230970 falso-inoculado), atuando possivelmente como uma barreira de defesa da planta. No genótipo suscetível a expressão deste gene foi 1,75 vezes maior que o seu calibrador (Embrapa-48 falsoinoculado). Foi observada uma expressão diferencial de genes relacionados a espécies reativas de oxigênio, produção de fitoalexinas bem como genes envolvidos na liberação de elicitores. Esses genes podem estar atuando no mecanismo de defesa contra P. pachyrhizi no genótipo resistente, porem sua expressão também no genótipo suscetível pode estar relacionado a uma maior colonização do patógeno no tecido hospedeiro ou uma resposta tardia à infecção. A identificação de uma rota de defesa pode possibilitar o estudo mais aprofundado da mesma, com o objetivo de identificar genes mais específicos no processo de defesa celular e apontar novas alternativas para obtenção de cultivares resistente.

Soybean Asian Rust, a disease caused by the fungi Phakopsora pachyrhizi, has caused serious economic damages to the Brazilian and world-wide soybean crop. The development of soybean lines resistant to this fungi has been a challenge, and currently the measures of control this disease are based on the handling of the crop and application of fungicides. With the objective to advance the knowledge on the molecular mechanism of defense of the plant to the Soybean Asian Rust, it was evaluated, by PCR in real time, the expression of genes that supposedly are involved in the defense mechanism. Two genotypes had been selected for the conduction of the experiment, PI 230970, that it possess allele Rpp2 and develops type RB type injuries, when in presence of P. pachyrhizi, and Embrapa-48, susceptible, which develops injuries of Tan type. The experiment was carried out in Fitotron and for the analysis of the gene expression was done using RNAs from leaves of the soybean inoculated either with pathogen or mock-inoculated with water. Amongst the evaluated genes, chitinase presented an expression 117 times higher in the resistant genotype (PI 230970), when compared with the calibrator (PI 230970 mock-inoculated) possibly acting as a barrier of defense of the plant. In the susceptible genotype the expression of this gene was 1.75 time higher that your calibrator (Embrapa-48 mock-inoculated). It was observed a differential expression of related genes with reactive species oxygen, production of fitoalexinas as well as involved genes in the release of elicitors. These genes can be acting in the mechanism of defense against P. pachyrhizi in the resistant genotype; however its expression in the susceptible genotype can be related to a bigger settling of the pathogens in the tissues of the host or to a delayed response the infection. The identification of a defense route should be farther investigated, with the objective to identify more specific genes in the process of cellular defense and to point out new alternatives for the development of resistant cultivars.