Análise de redes extracelulares de neutrófilos (NETs), autofagia e apoptose desencadeados por vírus Zika

Abstract

O vírus Zika (ZIKV) apresenta tendência de migrações para órgãos imuno privilegiados no qual tem a capacidade de se replicar e gerar doenças graves. O vírus nesses locais, sem a presença de neutrófilos, se replica e ativa vias de escape. A imunidade inata atua em resposta às doenças virais pela formação de redes extracelulares de neutrófilos (NETs) que usam as vias de autofagia para promover a destruição de vírus impedindo o escape viral por meio da apoptose. O objetivo desse trabalho foi mostrar a ação das redes extracelulares de neutrófilos em vírus Zika, avaliando se as mesmas são capazes de ativar as vias estresse oxidativo e autofagia necessária para a ativação e destruição viral e se apoptose interfere nesse processo. Foram coletados neutrófilos de nove doadores saudáveis, purificados e avaliados por imuno marcação, FACS (Citometria de fluxo), leitor de fluorescência para avaliar a presença de NETs, autofagia, estresse e vias de sinalização, e apoptose estimulados pelo vírus Zika ou não. Os resultados mostraram que ocorre formação de NETs pela formação de estruturas visíveis ao microscópio, com a presença de autofagia. A quantificação de estresse oxidativo e peroxidase também confirma a ocorrência de NETs ex vivo induzidas por ZIKV em neutrófilos humanos, e a sinalização de duas horas das proteínas p-ERK e p-AKT mostram que não ocorre escape viral. A via de apoptose foi observada apenas de forma basal no grupo controle e no grupo que recebeu ZIKV o que indica que não ocorre escape viral em neutrófilos. O presente estudo demonstra que em neutrófilos existe um eficiente sistema de resposta ao vírus, e pode-se concluir que o vírus zika estimula os neutrófilos a ativarem as vias de estresse, autofagia, e de NETs, pela sinalização p-Erk e que não ocorre vias de escape viral em neutrófilos humanos infectados com ZIKV. Palavras-chave: Zika. NETs (redes extracelulares de neutrófilos). Autofagia. Apoptose.

The zika virus (ZIKV) shows a tendency for migrations to immune-privileged sites, in which it has the capacity to replicate and generate serious diseases. The virus in these sites without the presence of neutrophils replicates and activates escape routes. Innate immunity presents a described form to combat viral diseases by the formation of neutrophil extracellular Traps (NETs) that use the autophagy pathways to promote the destruction of viruses by preventing viral escape through apoptosis. The aim of this work was to show the action of neutrophil extracellular Traps, evaluating if they are capable of activating the oxidative stress and autophagy pathways necessary for viral activation and destruction and if apoptosis interferes with this process. Neutrophils were collected from nine healthy donors, purified and evaluated by Immunofluorescence, FACS, fluorescence reader to evaluate the presence of NETs, autophagy, stress and signaling pathways, and apoptosis. The results showed that NETs occur through the formation of microscopically visible structures; histone H4 acetylated Immunofluorescence and DNA webs with the presence of viral protein, and these pathways present LC3 A / B marking thus occurring together with autophagy. The quantification of oxidative stress and peroxidase also confirms the occurrence of ex vivo NETs induced by zika on human neutrophils, and the 2-hour signaling of the p- ERK and p-AKT proteins show that no viral escape occurs. The apoptosis pathway was observed only at baseline in the control group and in the ZIKV group, which indicates that there is no viral escape in neutrophils. Previous research shows that for the occurrence of symptoms generated by ZIKV, migration to immune-privileged sites, stress suppression, and p-erk and p-AKT pathways in monocytes or precursors of neurons is necessary. The present study shows that in neutrophils there is a virus- fighting efficiency system, and we can conclude that zika virus stimulates neutrophils to activate the stress pathways, autophagy, and NETs, by p-Erk signaling and that there is no viral escape pathway in human neutrophils infected with ZIKV. Keywords: Zika. Neutrophils extracellular traps. Autophagy. Apoptosis.