Expressão heteróloga da proteína não estrutural (NS1) do vírus dengue-2 visando a produção de antígenos para kits diagnósticos

Abstract

A dengue é uma das doenças mais importantes causada por arbovírus no mundo, sendo observado nos últimos vinte anos um aumento significativo na distribuição geográfica, transmissão contínua de vários sorotipos e emergência da Febre hemorrágica em áreas onde a doença não era prevalente. Apesar dos processos metodológicos de diagnóstico da dengue estarem na atualidade em profundo desenvolvimento e aperfeiçoamento, um empecilho para a realização de testes diagnósticos para dengue reside na dificuldade de produção em grande escala de antígenos a serem utilizados em testes diagnósticos. Devido a esta demanda, os objetivos deste trabalho foram a obtenção da proteína não estrutural 1(NS1) do sorotipo dengue 2, através da expressão heteróloga em Nicotiana tabacum e a construção de um vetor otimizado para expressão em plantas com o intuito de elevar os níveis de expressão da proteína recombinante nas plantas transgênicas e facilitar sua purificação. Após a confirmação da expressão em Nicotina tabacum, a proteína heteróloga foi caracterizada por imunoblot. Em ensaio imunoenzimático a proteína NS1 recombinante, apresentou potencial como antígeno para desenvolvimento de Kits de diagnóstico da dengue e foi confirmado a transformação de Agrobacterium tumefaciens com o vetor otimizado. Estudos posteriores verificarão a expressão da proteína NS1 recombinante em Arabidopsis thaliana e sua potencial utilização em Kits diagnósticos.

Dengue is one of the most important diseases caused by arboviruses in the world, being reported in the last twenty years a significant increase in geographical distribution, continuous transmission of various serotypes and emergence of hemorrhagic fever in areas where the disease was not prevalent. Despite the methodological processes of diagnosis of dengue are at present in-depth development and improvement, a hindrance to the realization of diagnostic tests for dengue is the difficulty of large-scale production of antigens for use in diagnostic tests.Due to this demand, the aim of this work was to obtain the nonstructural protein 1 (NS1) of dengue serotype 2 by heterologous expression in Nicotiana tabacum and the construction of a vector optimized for expression in plants in order to raise the levels of expression recombinant protein in transgenic plants and facilitate their purification. Upon confirmation of expression in Nicotiana tabacum, the heterologous protein was characterized by immunoblotting. In enzyme immunoassay recombinant NS1 protein, presented as potential antigen for the development of dengue diagnostic kits and the confirmed transformation of Agrobacterium tumefaciens with the optimized vector was confirmed. Further studies will verify the expression of recombinant NS1 protein in Arabidopsis thaliana and its potential use in diagnostic kits.