Bovine herpesvirus 1 interfere na maturação in vitro de ovócitos bovinos em modelo de infecção artificial e natural

Abstract

O bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) é de fácil disseminação, difícil controle e está amplamente disseminado nos rebanhos bovinos no mundo. Essa infecção viral é responsável por prejuízos à pecuária principalmente quanto aos aspectos reprodutivos. Estudos prévios envolvendo infecção experimental com o BoHV-1 em um sistema de produção in vitro de embriões reportou que a presença do vírus afetou o desenvolvimento embrionário. Neste trabalho, foi avaliada a interferência do BoHV-1 sobre a maturação in vitro de complexos cumulus-ovócito (COCs) e ovócitos desnudados com células do cumulus em suspensão (DOs). Foram coletados sangue e os ovários de fêmeas bovinas sabidamente não vacinadas contra o BoHV-1. Após o teste de soroneutralização, os animais soropositivos foram classificados de acordo com a sua titulação de anticorpos. Os ovócitos recuperados após aspiração folicular foram divididos em COCs e DOs e avaliados através da sua capacidade de maturação nuclear associado a detecção viral pela microscopia confocal de varredura a laser. Dois experimentos foram realizados: (I) maturação após infecção in vitro de COCs e DOs de animais soronegativos; (II) maturação in vitro de COCs e DOs de animais soropositivos. No experimento I, diferença (P<0,01) foi observada entre as taxas de maturação do grupo COCs controle (78,2%) e os grupos infectados dos COCs (43,6%). No experimento II verificou-se diferença (P<0,01) na taxa de maturação entre os animais de titulação de anticorpos ≥ 16 (56,9%) e o grupo controle (79,4%). Os ensaios de imunofluorescência permitiram a identificação do BoHV-1 nos COCs e DOs. Diante disso, conclui-se que o BoHV-1 foi capaz de afetar o processo de maturação in vitro tanto nas condições de infecção in vitro e em condições naturais de infecção.

Bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) disseminates easily, is difficult to control, and is widely spread in cattle herds worldwide. BoHV-1 causes a broad range of losses to the cattle industry, mainly concerning reproduction. Previous studies involving experimental infection of BoHV-1 in an in vitro embryo production system have reported impairment of embryonic development by BoHV-1. In this study, we evaluated the interference of BoHV-1 in the in vitro maturation system of cumulus- oocyte complexes (COCs) and denuded oocytes (DOs) cultured with a cumulus cell suspension. Blood samples and ovaries were collected from slaughterhouse cows unvaccinated against BoHV-1. Using virus neutralization assays, the seropositive animals were classified according to their antibody titers. The oocytes were recovered by follicular aspiration and divided into two groups, COCs and DOs, which were evaluated for their nuclear maturation capacity using immunofluorescence assays by laser scanning confocal microscopy. Two experiments were carried out: (I) in vitro maturation of COCs and DOs after artificial infection of seronegative animals and (II) in vitro maturation of COCs and DOs of seropositive animals. In experiment I, a difference (P <0.01) was observed between the maturation rates of the control group COCs (78.2%) and the infected COCs (43.6%). In experiment II, there was a difference (P <0.01) in the maturation rate between animals with antibody titers ≥ 16 (56.9%) and the control group (79.4%). Immunofluorescence assays identified BoHV-1 in the COCs and DOs. Therefore, it was concluded that BoHV-1 affects the in vitro maturation process in both in vitro and natural infections.