Diversidade genética de isolados do fungo predador de nematóides Arthrobotrys spp. por marcadores moleculares RAPD e PCR-RFLP do rDNA

Abstract

A diversidade genética de seis isolados Arthrobotrys conoides, três isolados A. oligospora e sete isolados A. robusta foi avaliada por meio de RAPD. A amplificação resultou em um total de 107 fragmentos de DNA polimórficos, utilizando 11 oligonucleotídeos. As distâncias genéticas variaram de 9 a 83%, quando analisadas em conjunto, demonstrando grande diversidade genética nos isolados dessas três espécies. Por meio dessas análises, pôde-se diferenciar os isolados A51 (A. robusta) e A78 (A. conoides) das suas respectivas espécies. Além desses, o isolado A183 (A. oligospora) também se diferenciou de sua espécie agrupando-se com isolados de A. robusta. A variação dentro da região ITS do rDNA de seis isolados A. conoides e sete isolados A. robusta foi analisada por PCR seguida pela análise do polimorfismo de comprimento de restrição (RFLP). Essa região amplificada inclui o espaçador interno transcrito (ITS), que possui um baixo grau de conservação. Dois isolados fúngicos, A51 e A78, apresentaram polimorfismo de tamanho dentro de suas respectivas espécies. Os produtos da amplificação da região ITS foram hidrolisados com diferentes endonucleases de restrição. Análises de agrupamento, baseadas nos fragmentos de DNA de restrição, separaram os isolados em três distintos grupos: o Grupo 1, que contém os isolados pertencentes à espécie A. conoides, exceto o isolado A78; o Grupo 2, que contém os isolados da espécie A. robusta, exceto o isolado A51; e o Grupo 3, formado pelos isolados A78 e A51, sugerindo uma nova análise na sua classificação.

The genetic diversity of six isolates of Arthrobotys conoides, three of A. oligospora, and seven of A. robusta was evaluated by RAPD. Total DNA amplification using 11 oligonucleotides resulted in 107 distinct polymorphic DNA fragments. The genetic distances varied from 9 to 38%, showing high genetic diversity among the isolates of the three species. By means of RAPD analysis, the isolates A51 (A. robusta) and A78 (A. conoides) could be differentiated from their respective species. Besides A51 and A78, the isolate A183 (A. oligospora) also differentiated from its species, grouping with the isolates of A. robusta. Variation within the rDNA ITS region of six isolates of A. robusta was analyzed by PCR, followed by restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP). The amplified region included the internal transcribed spacer (ITS), which possesses a low degree of conservation. Two fungal isolates presented length polymorphism within their respective species. Amplification products of the ITS region were cleaved with different restriction endonucleases. Cluster analysis based on restriction fragments divided the isolates into three groups: Group 1, containing the A conoides isolates, except ixA78; Group 2, containing the A robusta isolates, except A51; and Group 3, formed by A78 and A51, suggesting that their classification should be revised.