Detecção molecular de hemoparasitos em cães atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa - Viçosa/MG

Abstract

Neste estudo foram analisadas 100 amostras de sangue de cães, com trombocitopenia marcada (plaquetas < 100.000/μL) ou com visualização direta de hemoparasitas (ou inclusões compatíveis) no esfregaço sanguíneo, obtidas da rotina do laboratório de análises clínicas do DVT (Departamento de Veterinária), do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa (UFV). As amostras foram submetidas à extração de DNA e posteriormente à reação em cadeia da polimerase de tipo nested (nPCR), para o diagnóstico molecular de A. phagocytophilum e outros hemoparasitas. Do total das amostras, 60 foram positivas para no mínimo um hemoparasita. Foi possível detectar a presença de quatro gêneros de hemoparasitas nas amostras de sangue avaliadas: Ehrlichia, Anaplasma, Babesia e Hepatozoon. Foram amplificadas um total de 26 produtos do primer Ehrlichia spp monocítica, 23 de Ehrlichia spp granulocítica 26 com BAB-rum e 10 utilizando o hsp70. Logo ao analisar os resultados, de um total de 86 amostras foi possível identificar os seguintes hemoparasitas: 23 E. canis (identidade 94%-100%), 7 A. platys (identidade 97%-100%), 11 B. vogeli (identidade 86%-99%) e 15 H. canis (identidade 94%-99%). Nenhuma amostra foi positiva utilizando o primer msp4, específico de A. phagocytophilum, porém, o sequenciamento de uma das amostras amplificadas teve uma identidade de 99% com um fragmento da sequência parcial do gene 16S rRNA de A. phagocytophilum depositada no GenBank. A não amplificação de produtos com um primer específico para A. phagocytophilum pode ser atribuída a diversas hipóteses, mas isto não exclui a possibilidade que a bactéria esteja presente no município de Viçosa ou da microrregião.

In this study were analyzed blood samples from 100 dogs, with marked thrombocytopenia (platelets/μL < 100,000) or with direct visualization of hemoparasites (or compatible inclusions) in the blood smear, obtained from the routine of the clinical analysis laboratory, of the DVT (Veterinary Department), from the Veterinary Hospital da Universidade Federal de Viçosa (UFV). The samples were submitted for DNA extraction and subsequently to polymerase chain reaction of nested type (nPCR), for the molecular diagnosis of A. phagocytophilum and other hemoparasites. From all the samples, 60 were positive for at least one hemoparasite. It was possible to detect the presence of four genera of hemoparasites in the blood samples assessed: Ehrlichia, Anaplasma, Babesia and Hepatozoon. Were amplified a total of 26 products from the monocytic ehrlichia spp primer, 23 from the granulocytic ehrlichia spp primer, 26 with BAB-rum primer and 10 using the hsp70 primer. After analyzing the results, from a total of 85 it was possible to identify the following hemoparasites: 23 E. canis (identity 94%- 100%), 7 A. platys (identity 97%-100%), 11 B. vogeli (identity 86%-99%) and 15 H. canis (94% -99% identity). No samples were positive using the msp4 primer, specific for A. phagocytophilum, however, the sequence of one of the amplified samples had a 99% identity with a partial sequence of the 16S rRNA gene of A. phagocytophilum deposited on GenBank. The non- amplification of products with a specific primer for A. phagocytophilum can be attributed to several hypotheses, but this does not exclude the possibility that the bacterium is present in the municipality of Viçosa or in the microregion.