Ciências Biológicas e da Saúde
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Item Nitrificação heterotrófica/desnitrificação aeróbia: caracterização de isolados e investigação das vias metabólicas(Universidade Federal de Viçosa, 2018-09-18) Silva, Lívia Carneiro Fidélis; Silva, Cynthia Canedo da; http://lattes.cnpq.br/4490342708817083A água de produção proveniente do processo de extração de petróleo contem elevadas concentrações de amônia. Despejos desses efluentes podem ser prejudiciais ao meio ambiente e, por isso, antes de ser descartado, o efluente deve ser tratado. A remoção biológica de amônia pode ocorrer por diferentes vias: a nitrificação autotrófica aeróbia, seguida da desnitrificação anaeróbia (processos convencionais), que é uma via bem conhecida e consolidada, onde cada etapa é realizada por diferentes microrganismos, e a nitrificação heterotrófica/desnitrificação aeróbia (NH/DA), onde um único microrganismo heterotrófico é capaz de realizar as duas etapas em condições de aerobiose, conferindo vantagens em relação à nitrificação e à desnitrificação convencionais para aplicação em estações de tratamento de efluentes. Porém, pouco se sabe sobre esse processo e sobre os microrganismos que o realizam. Assim, visando à otimização da remoção de amônia nas estações de tratamento, os objetivos deste trabalho foram isolar e identificar microrganismos capazes de realizar o processo de NH/DA de amostra de lodo ativado, avaliar a influência de fatores físico- químicos sobre a remoção de amônia, e investigar as possíveis vias de remoção de amônia através do estudo do transcriptoma de um dos isolados capazes de realizar a NH/DA. Foram identificados seis isolados bacterianos nitrificantes heterotróficos/desnitrificantes aeróbios capazes de converter 100 % de amônia em N2 em até 72 horas. Dos seis isolados, três foram identificados como Pseudomonas balearica, e os outros como Rhodococcus ruber, Pseudomonas stutzeri e Gordonia amicalis. Eles apresentaram perfil de resposta diferente em relação aos fatores físico-químicos estudados, porém, todos exibiram alta eficiência de remoção de amônia em diferentes fontes de carbono, relação C/N, concentrações salinas, pH e temperatura. O balanço de nitrogênio mostrou que, aproximadamente, 55 % de toda a amônia removida pelos isolados foi perdida na forma de N2, e 45 % foi assimilada na biomassa microbiana. Não foi possível detectar por PCR e genômica comparativa, os genes envolvidos no processo de nitrificação autotrófica no genoma dos isolados, entretando, os genes do processo de desnitrificação anaeróbia foram detectados nas espécies do gênero Pseudomonas, que também realizam esse processo, sugerindo o envolvimento de outras enzimas na via de NH/DA. O estudo do transcriptoma do isolado P. stutzeri 2v em condição de indução das vias de remoção de amônia mostrou que os genes envolvidos no processos convencionais não estão envolvidos na NH/DA, e que houve mudança na maquinaria de biossíntese e tradução proteica da célula, indicando que outros genes foram expressos durante o processo, possivelmente aqueles envolvidos na NH/DA. Foi observado também aumento na expressão de genes envolvidos em processos de óxido-redução, que podem estar diretamente envolvidas na NH/DA. Este trabalho mostrou que os isolados identificados possuem potencial para aplicação em estações de tratamento de efluentes visando a otimização do processo biológico de remoção de amônia, e que as enzimas envolvidas no processo de NH/DA são diferentes daquelas observadas nos processos convencionais.Item Identificação, caracterização e análise de expressão de genes que codificam peptidil sintases não-ribossomais em Colletotrichum lindemuthianum(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-23) Correia, Hilberty Lucas Nunes; Queiroz, Marisa Vieira de; http://lattes.cnpq.br/5718975445923498Os fungos em geral, são grandes produtores de metabólitos secundários, que são compostos com funções e estruturas altamente diversas, não requeridos para o crescimento. Dentre os metabólitos secundários destaca-se a classe dos peptídeos não- ribossomais (NRPs), que são polímeros de aminoácidos proteinogênicos e não- proteinogênicos, hidroxiácidos e ácidos carboxílicos. Esta classe de metabólitos é sintetizada pelo mecanismo de auto-molde pela atividade de grandes complexos enzimáticos multidomínios e multimodulares, denominados peptidil sintetases não- ribossomais (NRPSs). Entre as funções de peptídeos não-ribossomais já relatadas estão: imunossupressão, papel de toxinas envolvidas na patogênese, quelação de ferro e etc. O presente trabalho teve como objetivo realizar a identificação e caracterização das NRPSs em Colletotrichum spp. Além disso, foi realizada a análise da expressão dos genes que codificam NRPSs em Colletotrichum lindemuthianum, agente etiológico da antracnose do feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.). Foram identificados os genes que codificam NRPSs nos genomas de C. lindemuthianum (isolados 83, 89 e 7R), Colletotrichum fioriniae, C. glosporioides C. graminicola, C. higginsianum e C. orbiculare. O número de genes que codificam NRPSs identificadas variou para cada genoma em questão de 6 a 22. Todos os genes que codificam NRPSs foram encontrados como parte de agrupamentos contendo genes que codificam outras enzimas biossintéticas. A análise filogenética utilizando sequências dos domínios A indicou uma grande diversidade de NRPSs em Colletotrichum spp., sendo que algumas destas são ortólogas de proteínas responsáveis pela síntese de produtos relacionados à virulência de fitopatógenos como NPS6 e Hts1. Em C. lindemuthianum foram encontradas nove NRPSs, sendo duas destas ortólogas de Hts1 e NPS6. Apenas uma das NRPSs aqui identificadas é específica para a espécie C. lindemuthianum. A análise dos transcritos de C. lindemuthianum nas diferentes fases de desenvolvimento em plantas de feijoeiro e in vitro revelou que todos estes genes são expressos em ao menos uma das fases de desenvolvimento do fungo.Item Caracterização morfoanatômica, transcriptômica e estudo da aquisição de competência para a organogênese in vitro de espécies do gênero Melocactus (Cactaceae)(Universidade Federal de Viçosa, 2019-02-20) Silva, Gabriela Torres da; Otoni, Wagner Campos; http://lattes.cnpq.br/2974906293894879O Brasil é área prioritária na conservação da família Cactaceae por possuir grande número de espécies endêmicas. No entanto, fatores como degradação do habitat e coleta ilegal para comercialização como ornamental tem levado algumas espécies dessa família ao perigo de extinção, dentre estas espécies estão Melocactus paucispinus e M. glaucescens. Neste contexto, as técnicas de cultura de tecidos são uma importante ferramenta, pois permitem a propagação in vitro de material vegetal em larga escala, fornecendo uma alternativa à retirada dos indivíduos do seu habitat para a comercialização como ornamental. Contudo, a propagação in vitro de Melocactus apresenta alguns desafios, como o baixo número de brotos por explante, de brotos com variação morfológica e a ocorrência de variação somaclonal. Apesar do crescente interesse dos Melocactus como ornamental e da sua forma de propagação in vitro ser via cladódio, pouco se sabe sobre os aspectos morfofisiológicos relacionados à aquisição de competência para a organogênese in vitro dos membros deste gênero. Com o objetivo de aumentar o conhecimento sobre os processos da organogênese em espécies do gênero Melocactus, foi realizada a caracterização anatômica do cladódio de M. glaucescens e M. paucispinus, assim como a análise da ploidia das regiões do cladódio e a microtomografia de raio-X. As duas espécies de Melocactus estudadas apresentaram o mesmo padrão de organização dos tecidos e picos de ploidia, onde a periferia do cladódio e a medula apresentaram quatro picos de ploidia (2C, 4C, 8C e ~16C), as raízes são diploides e o córtex do cladódio apresentou um pico a mais de ploidia (~32C). A mixoploidia do cladódio foi atribuída ao programa de formação dos diferentes tecidos que compõem este órgão, o qual possui como uma das principais funções o armazenamento de água. As células com alta ploidia passaram por endociclos que aumentaram seus conteúdos de DNA, o que permite que o volume de armazenamento de água nos vacúolos seja maior para que assim possam desempenhar sua função de parênquima aquífero. A análise de microtomografia de raio-X mostrou que o diâmetro das células da região do córtex é maior do que na periferia e na medula do cladódio, corroborando com os dados de ploidia. Para compreender as modificações anatômicas durante a organogênese de M. glaucescens, foi realizada a caracterização anatômica de explantes cultivados na ausência de regulador de crescimento e explantes cultivados na presença de 1,34 μM de ácido naftaleno acético (ANA), 17,76 μM de 6- benzilaminopurina (BA) e com as aréolas feridas. Além disso, foi realizada a análise de expressão do gene SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE (MgSERK-like) nos mesmos tratamentos. Foi observada a formação de brotações derivadas da ativação da região meristemática das aréolas, assim como de regiões mais internas do cladódio, sendo que mais meristemoides foram observados no córtex dos explantes que foram submetidos à ação de reguladores de crescimento e ferimento. Este tratamento também mostrou elevado número de brotações, ocorrência de variação morfológica e expressão do gene MgSERK-like em todos os períodos analisados da organogênese. Alterações no padrão de expressão durante a organogênese in vitro também foram observadas nas análises de expressão diferencial (ED) de explantes antes e após a indução de organogênese na presença de 1,34 μM de ANA, 17,76 μM de BA e com as aréolas feridas. A análise do transcriptoma mostrou que os explantes antes da indução da organogênese apresentavam o metabolismo mais comprometido com o metabolismo primário, principalmente com a fotossíntese, além da alta expressão do fator de transcrição TCP, o qual é responsável pela forte dominância apical nessa espécie que não apresenta ramificações laterais naturalmente. As análises no Gene Ontology, Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, BiNGO e Plant Transcription Factor Database demonstram que o metabolismo nos explantes submetidos à organogênese é modificado e concentrado em genes relacionados com mitocôndria, parede celular, retículo endoplasmático, organização celular e biogênese, o que tem relação com o aumento da síntese de proteínas para dar suporte na divisão celular e formação de parede durante a regeneração. As análises de ED também indicam que os tecidos submetidos à organogênese apresentaram grande potencial na produção de compostos do metabolismo secundário, o que amplia as possibilidades de aplicação das culturas in vitro de M. glaucescens.Item Fotoperíodo, défice hídrico e estresse salino no perfil de óleos essenciais em Lippia alba L. cultivada in vitro(Universidade Federal de Viçosa, 2019-02-19) Castro, Kamila Motta de; Otoni, Wagner Campos; http://lattes.cnpq.br/6501490132573552Lippia alba (Miller) N.E. Brown, conhecida como erva-cidreira brasileira, é uma planta tradicionalmente utilizada pela medicina popular brasileira. Possui importância econômica devido à produção de óleos essenciais aos quais são utilizados para melhoria da qualidade do sono, alívio do estresse, controle de doenças respiratórias, gastrointestinais, anti-inflamatórias e sedativo natural. Podem também ser utilizados no controle biológico contra diversos patógenos e na conservação de alimentos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do fotoperíodo, estresse salino e défice hídrico no perfil de óleos essenciais em L. alba cultivada in vitro, utilizando-se de técnicas de análises morfoanatômicas, fisiológicas e moleculares. Desse modo, avaliou-se aspectos anatômicos, o crescimento, metabólitos primários, taxa fotossintética, perfil de óleos essenciais e expressão de genes relacionaods à síntese de óleos essenciais e ao relógio molecular. Foram conduzidos três experimentos: I) Avaliação do efeito de diferentes fotoperíodos (4, 8, 16 e 24 h); II) Avaliação do efeito do estresse salino sob diferentes concentrações de NaCl (0, 30 e 60 mM); e III) Avaliação do efeito do défice hídrico sob diferentes concentrações de PEG [0, 1, 2 e 3% (m/v)] no crescimento, nos metabólitos primários, na taxa fotossintética, no perfil de óleos essenciais e na expressão de genes relacionados à síntese dos óleos essenciais. Os resultados demonstraram que L. alba é uma espécie que apresenta destacada plasticidade fisiológica nos diferentes fotoperíodos com melhor desempenho em dias longos. O melhor desempenho em crescimento, organização anatômica do mesofilo, caule, raízes e feixes, pigmentos fotossintéticos, maior taxa fotossintética e maior síntese de proteínas totais foi sob fotoperíodo de 24 h. A biossíntese de linalol, componente majoritário do quimiotipo BGEN-04, foi aumentada sob fotoperíodo de 24 h, com a redução da expressão de LaGES. O estresse salino afeta negativamente o metabolismo primário de L. alba, em que o crescimento, desenvolvimento e atividades fisiológicas foram comprometidas. O metabolismo secundário foi modulado, tendo aumento nos teores de linalol e redução dos teores de eucaliptol em plantas sob estresse salino mais severo (60 mM). Elevadas concentrações de NaCl podem comprometer a fisiologia das plantas no cultivo in vitro, entretanto, esta é uma espécie que apresenta plasticidade fisiológica sob estresse salino moderado sendo capaz de crescer e desenvolver e não comprometer a via dos monoterpenos e sesquiterpenos. A Lippia alba mostrou-se uma espécie capaz de adaptar em solos com baixa disponibilidade hídrica. O metabolismo primário é afetado com redução do crescimento, área foliar e taxa fotossintética. A limitação hídrica aumentou no conteúdo de aminoácidos e proteínas totais. O metabolismo secundário foi modulado, com aumento nos teores de linalol e redução nos teores de germacreno em plantas sob défice hídrico.Item Expressão de aquaporinas no sistema digestório e túbulos de Malpighi de Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae) e caracterização funcional de Am_Eglp 1(Universidade Federal de Viçosa, 2018-07-31) Souza, Débora Linhares Lino de; Serrão, José Eduardo; http://lattes.cnpq.br/2563185742178779Aquaporinas são proteínas de membrana responsáveis pelo transporte de água através das membranas celulares. Estas proteínas são encontradas e amplamente investigadas em insetos, porém pouco estudadas em Apis mellifera. As regiões do sistema digestório e os túbulos de Malpighi dos insetos expressam aquaporinas, o que aumenta a permeabilidade natural dos tecidos e a velocidade do transporte de água. Neste estudo foi avaliado o nível de expressão de cinco genes preditos para aquaporinas, que apresentaram diferentes níveis de expressão nos órgãos do sistema digestório – papo, intestino médio, íleo e reto – e túbulos de Malpighi de abelhas forrageiras. O gene Am_Eglp 1 apresentou maior expressão relativa no intestino médio, e a hibridização in situ confirmou a presença de RNA mensageiro para este gene em todas as regiões investigadas. Além disso, o ensaio de absorção de água, após a expressão heteróloga de Am_Eglp 1 em ovócitos de Xenopus laevis, comprovou que o gene da aquaporina codifica para uma proteína funcional, capaz de transportar água e que é bloqueada por mercúrio. Este foi o primeiro relato da funcionalidade de uma aquaporina de abelhas, que atua principalmente no intestino médio, aumentando a permeabilidade à água nas membranas da região.Item Efeito do kefir de água no estresse oxidativo, na inflamação e na esteatose hepática em ratos wistar(Universidade Federal de Viçosa, 2017-11-28) Silveira, Carlos Mário Martins; Queiroz, José Humberto de; http://lattes.cnpq.br/3151690646439858A obesidade é uma doença multifatorial, e o acúmulo excessivo de gordura no tecido adiposo está na gênese de distúrbios metabólicos e inflamatórios. O kefir de água é uma bebida fermentada que contém micro-organismos com potencial ação probiótica. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito do kefir de água no metabolismo lipídico e na inflamação, no fígado e no tecido adiposo, em ratos alimentados com dieta de cafeteria. O experimento teve duração de 15 semanas e os animais foram divididos em seis grupos: G1-Dieta comercial; G2–Dieta comercial e 1 mL de kefir de água; G3–Dieta de cafeteria; G4–Dieta de cafeteria e 1 mL de kefir de água administrado antes da indução da obesidade; G5–Dieta de cafeteria e 1 mL de kefir de água administrado após a indução da obesidade e G6–Dieta de cafeteria e 2 mL de kefir de água administrado após a indução da obesidade. O kefir de água foi administrado 1 vez ao dia por gavagem. Ao final do experimento foram coletados o sangue, o fígado e o tecido adiposo. Analisou- se enzimas antioxidantes e da peroxidação lipídica no plasma, a expressão de genes envolvidos na inflamação e no metabolismo lipídico no fígado e no tecido adiposo, os teores de lipídeos no fígado e a histomorfometria no fígado e no tecido adiposo. O kefir de água aumentou a atividade da glutationa S-transferase (GST) e reduziu a concentração de malondialdeído (MDA) no plasma, quando administrado após a indução da obesidade, na dose de 2 mL, reduziu a expressão de TNFα no fígado e no tecido adiposo nos ratos obesos, aumentou a expressão dos genes envolvidos na oxidação de ácidos graxos hepáticos ADIPO R2, PPARα e CPT 1A, reduziu o teor de triacilglicerol e o percentual de gordura hepática quando administrado antes da indução da obesidade, e os teores de colesterol em todos os ratos obesos. Além disso, o kefir de água foi capaz de reduzir a expressão do gene adipogênico Fas e aumentar as expressões de LpL e adiponectina no tecido adiposo. Estes resultados demonstram potenciais efeitos benéficos do kefir de água nas complicações metabólicas relacionadas à obesidade e esteatose hepática.Item Atividade antioxidante e anti-inflamatória da castanha de sapucaia (Lecythis pisonis Cambess) em ratos Wistar(Universidade Federal de Viçosa, 2016-06-14) Martins, Marcos Vidal; Queiroz, José Humberto de; http://lattes.cnpq.br/4685920093225964A Lecythis pisonis Cambess conhecida popularmente como castanha de sapucaia, tem origem brasileira e é proveniente da Floresta Pluvial Atlântica. Estudos prévios realizados com a sapucaia em nosso laboratório demonstraram a presença de importantes compostos quimicos da sapucaia e revelaram que o uso contínuo na dieta poderá contribuir para efeitos benéficos à saúde. Os principais resultados mostraram que a sapucaia é fonte expressiva de ácidos graxos insaturados, proteínas e minerais como manganês, magnésio zinco e que, em conjunto, podem configurar como potenciais agentes protetores em diferentes desordens metabólicas. Tem-se verificado na literatura que o consumo de castanhas pode trazer importantes benefícios a saúde humana. Alguns trabalhos atribuem às castanhas e nozes efeitos na prevenção de doenças crônicas não transmissiveis ligadas ao estresse oxidativo. Diante de tais informações objetivamos avaliar a capacidade antioxidante e anti-inflamatória da castanha de sapucaia inserida em diferentes tipos de dieta, a AIN93G e a Dieta de Cafeteria em tecidos hepático e cerebral de 48 ratos da linhagem Wistar. Os animais foram divididos em quatro grupos e o estudo foi conduzido por 28 dias e realizada eutanásia no 14o e no 28o de todos od grupos para que fosse avaliado o impacto em relação ao tempo no metabolismo animal. A Expressão gênica dos marcadores inflamatórios TNF-α e NFkB, bem como dos marcadores antioxidantes ZnSOD e HSP-72 foi determinada pela reação em cadeia da polimerase quantitativa pós-transcrição reversa (qPCR). A atividade antioxidante também foi verificada pela determinação das espécies reativas do ácido tiobarbitúrico (TBARS) e por mensuração da atividade da enzima superóxido dismutase. A expressão gênica dos marcadores inflamatórios NFkB (p65) e TNF-α foi menor para os grupos de ratos que consumiram as dietas enriquecidas com sapucaia com diferença significativa pelo teste de Tukey (p<0,05). A proteína de choque térmico HSP- 72 e a enzima ZnSOD apresentaram aumento da expressão gênica com diferença estatística significativa (p<0,05) para ambos os grupos que consumiram sapucaia em suas dietas. As propriedades nutricionais da castanha de sapucaia exerceram importante atividade protetora por modular a atividade antioxidante e o processo inflamatório nos tecidos hepático e cerebral dos animais avaliados.Item Postharvest role of jasmonic acid and wounding on expression of defense related metabolism in sugar beet roots(Universidade Federal de Viçosa, 2016-03-18) Oliveira, Lucilene Silva de; Finger, Fernando Luiz; http://lattes.cnpq.br/3160525387384694Jasmonate (JA) can act as an inducer expression of defense genes against biotic and abiotic stress by process of priming plant. Exogenous application of JA has been shown to reduce rotted tissue and control postharvest pathogen in sugarbeet roots. However, the mechanism involved in the postharvest induction of defense by JA in sugarbeet roots is unknown. Consequently, we investigated the JA-induced mechanisms which protect roots from storage pathogens by identifying and characterizing genes that are altered by JA treatment. JA (10 μM) treatment to sugarbeet roots resulted alteration significant of unigenes expression. RNA-Seq data showed that 30 and 49 putative defense genes were upregulated at 2 and 60 days after JA-treatment, respectively. In sugarbeet roots, peroxidases, cinnamate-4-hydroxilase, chitinase acid, laccases, nbs-Irr resistant, pathogen-related thaumatin family protein, proteinase inhibitor and β- glucosidase were found at higher levels (fold change ranged from 1.8 to 8.3) in treated than control roots at 2 d subsequent to JA-application. At 60 days after JA treatment observed that peroxidase, chitinase, cinnamate-4 hydroxilase and cc-nbs-Irr resistant protein were also up-regulated. These upregulated unigenes are related with biosynthesis of secondary metabolites, cell wall reinforcement, as well as for plant- pathogen interaction. Thus, the present study suggests that JA treatment could prime sugarbeet inducting a series of defense genes, including defense-related proteins and key enzymes related secondary metabolites. JA also increased the ability of sugarbeet cells to recognize pathogen which may result faster activation of immune response and then reduction of infection and susceptibility. In addition to rotted losses in rot storage it is extremely importance to avoid losses during sugarbeet growth. Insect attack by sugarbeet root magoot is one of damage that significantly reduces root yield and sucrose content and can devastate individual fields. Thus, study of resistance mechanism is essential to provide new control strategies and reduce insecticides spray. We investigated if resistance of some genotypes is achieved through activation of chitinase, peroxidase and polyphenoloxidase. Root of nine genotypes sugarbeet, susceptible and resistant to maggot fly, were wounding 4 weeks after planting to mimic maggot attack. The results showed neither peroxidase nor polyphenol oxidase activity is correlated to maggot fly resistant in sugarbeet roots. We observed that chitinase activity was significantly reduced for some genotypes after wounding, although no significance difference was found between resistant and susceptible sugarbeet genotypes.Item Embriogênese somática em Passiflora cincinnata Mast. e P. setacea D.C.: caracterização morfo-anatômica, mobilização de reservas e expressão dos genes SERK e BBM(Universidade Federal de Viçosa, 2015-03-25) Vieira, Lorena Melo; Otoni, Wagner Campos; http://lattes.cnpq.br/2835038295258914A aquisição de competência embriogênica por células somáticas é um processo intrigante e necessita da junção de dados genético-moleculares e citológicos para melhor compreensão dos mecanismos e mudanças celulares envolvidas. À vista disso, os objetivos desse trabalho foram isolar e caracterizar o padrão de expressão dos genes SERK e BBM por hibridização in situ durante o processo de embriogênese somática em Passiflora cincinnata, avaliar a responsividade morfogênica in vitro de P. setacea e P. cincinnata submetidas a condições de indução de embriogênese somática, bem como, acompanhar a mobilização de reservas e a expressão dos genes supracitados durante a embriogênese somática. Para tal, a partir de calos embriogênicos de P. cincinnata, com 20 dias em meio de indução (MI), extraiu-se o RNA total e obteve-se o cDNA, o qual serviu como molde para amplificação da sequência codante utilizando-se primers degenerados para SERK e BBM. A responsividade de embriões zigóticos maduros de P. setacea e P. cincinnata foi avaliada mediante o cultivo em meio de indução alternativo constituído por sais MS suplementado com 31,06 μM de Picloram + 2,22 μM de BA + 2,27 μM de TDZ (MIP) + 500 mg L -1 de Extrato de Malte (EM) + 13,77 μM de Espermidina (Spd). Após 30 dias as culturas foram transferidas ao meio de maturação (MM) composto de meio MS acrescido de 1,0% de carvão ativado e ausência de reguladores de crescimento. Amostras com 0, 10, 20 e 30 dias foram coletadas para microscopia de luz, microscopia eletrônica de varredura, testes histoquímicos e hibridização in situ, todas seguindo protocolos específicos. Para visualização da expressão dos genes SERK e BBM foi gerada uma sonda de RNA a partir de um clone sequenciado de P. cincinnata. Para P. setacea utilizou-se uma sonda heteróloga sense e antisense de P. cincinnata. O relacionamento filogenético das sequências isoladas de P. cincinnata comparadas às de outras espécies apontou que as funções das proteínas podem ser conservadas na espécie. Em SERK, o Pc contig1 agrupou-se com membros de SERK1 e SERK2, enquanto o Pc contig2 agrupou-se com membros de SERK3/BAK1. Por sua vez, o Pc contig1 de BBM, agrupou-se com membros de BBM1 e BBM2. A expressão do gene SERK foi constatada em embriões zigóticos e gradualmente diminuída até os 20 dias em MI. Aos 30 dias em MI, embriões somáticos globulares foram intensamente marcados, assim como em embriões com 5 e 40 dias em MM. Transcritos do BBM foram observados em embriões zigóticos, no entanto, a expressão foi cessada no decorrer do desenvolvimento dos embriões somáticos. A expressão foi retomada em embriões somáticos cotiledonares após 40 dias em MM, assemelhando-se ao observado no embrião zigótico. Observou-se que em P. setacea, durante o processo embriogênico, houve formação de protuberâncias que deram origem a zonas pró-embriogênicas, as quais se desenvolveram em embriões somáticos. Já em P. cincinnata houve proliferação das células do meristema fundamental e formação de meristemoides, caracterizando regiões organogênicas. Quando transferidos ao meio de maturação não houve regeneração de plantas a partir de embriões somáticos em P. setacea. Em P. cincinnata houve intumescimento das regiões calejadas e, em alguns casos, formação de primórdios foliares. Quanto à expressão gênica, em P. setacea foi constatada expressão de BBM e SERK em todas as fases analisadas, especialmente em protuberâncias e embriões somáticos formados. P. cincinnata, por sua vez, também apresentou transcritos dos genes BBM e SERK em todas as fases analisadas, sendo intensificado o sinal de hibridização na periferia dos explantes e regiões meristemáticas após 20 dias em MI. P. setacea apresentou corpos proteicos com decréscimo gradativo até os 30 dias em meio de indução. Houve presença de carboidratos e amido no explante e seu decréscimo após 10 dias, e verificou-se a síntese de novo de amido aos 30 dias de indução, quando há formação de embriões somáticos. Não foi verificada a presença de corpos lipídicos durante o processo embriogênico. Já em P. cincinnata, constatou-se corpos proteicos e amido de forma moderada em todas as etapas de desenvolvimento e a presença de carboidratos totais e corpos lipídicos foi averiguada nas fases iniciais de indução. Após 20 dias, houve mobilização dessas substâncias de reserva concomitantemente com a formação e desenvolvimento de meristemoides. Deste modo, sugere-se que a expressão desses genes está associada aos processos de aquisição de competência embriogênica e podem servir como marcadores moleculares desse processo. Os resultados do isolamento e expressão dos genes SERK e BBM em P. cincinnata são inéditos e contribuem para o melhor entendimento dos processos que envolvem a embriogênese somática na espécie. Nosso trabalho apresenta dados inéditos da indução de embriões somáticos em P. setacea e como as espécies estudadas apresentam respostas morfogênicas divergentes quando submetidas ao mesmo meio de indução. E ainda, relatamos à expressão dos genes BBM e SERK e a mobilização de compostos de reserva no decorrer dos eventos morfogênicos in vitro em P. setacea e P. cincinnata.Item Modulação dos fatores de risco metabólico associados à obesidade, por chá de folhas de mangueira (Mangifera indica L. variedade Ubá), em ratos alimentados com dieta hiperlipídica(Universidade Federal de Viçosa, 2015-02-24) Ramirez, Natalia Medina; Ribeiro, Sônia Machado Rocha; http://lattes.cnpq.br/1057328651162539A obesidade é uma alteração metabólica caraterizada pelo acúmulo de gordura corporal, sendo causada por fatores genéticos e ambientais (comportamento alimentar inadequado, sedentarismo). Está associada aos processos de inflamação, estresse oxidativo, doenças cardiovasculares, diabetes tipo 2, hipertensão arterial e dislipidemia. O presente estudo teve como objetivo desenvolver um chá de folhas de Mangifera indica L. da variedade Ubá, e avaliar seus efeitos na modulação de fatores de risco associados à obesidade, em ratos alimentados com dieta hiperlipídica. Este trabalho foi realizado nos Laboratórios de Nutrição Experimental, Desenvolvimento de Novos Produtos, Biodiversidade e Metabolismo e Fermentação da Universidade Federal de Viçosa, Minas Gerais (Brasil). Foram preparados chás com folhas jovens e maduras da M. indica, processadas (secas e trituradas) em concentrações de 1,25; 2,5 e 5% (g.mL-1) utilizando as técnicas de infusão, decocção e ultrassom. Foi determinada a concentração de mangiferina (por CLAE), sendo selecionado o chá com maior eficácia na obtenção desta xantona para o estudo de efeitos biológicos. O chá com teor elevado de mangiferina foi caracterizado determinando-se pH, fenólicos totais (utilizando o reagente de Folin-Ciocalteau) e atividade antioxidante (teste de retirada do radical DPPH). Também foi analisada a estabilidade oxidativa do chá por meio da quantificação de mangiferina, fenólicos totais e atividade antioxidante, utilizando dois tratamentos de conservação (refrigeração 4 ± 2°C e temperatura ambiente 20 ± 2°C) nos tempos 0, 24 e 48 horas. Finalmente, uma análise sensorial foi realizada para avaliar a aceitação do chá pelos consumidores. Para o ensaio biológico, ratos machos Wistar adultos foram alimentados com dieta hiperlipídica (n=16) durante sete semanas para induzir a obesidade. Finalizado este período, os ratos foram divididos considerando a homogeneidade dos fatores de risco metabólico (peso corporal, glicemia de jejum e Índice Lee) em dois grupos (n=8): dieta hiperlipídica (HFD) e dieta hiperlipídica suplementada com 50 mL de chá, em substituição à água (HFD-TT). Um grupo controle (n=8) recebeu dieta AIN-93 M. O experimento teve duração de 8 semanas. Foram avaliados parâmetros biométricos, bioquímicos e histomorfométricos. Além disso, foi realizado o teste de tolerância à glicose, controle de consumo de dieta e do chá, e foi determinado o nível de expressão de PPAR-γ, FAS e LPL no tecido adiposo epididimal. Os resultados foram analisados por meio de análise de variância (ANOVA) seguida dos testes Tukey ou Dunnett (paramétricos) e Dunn’s (não paramétricos). Os dados foram expressos como média ± desvio padrão ou média ± erro padrão. O nível de significância utilizado em todas as análises foi P<0,05. Houve diferenças significantes na concentração de mangiferina entre os tipos de folha para as três concentrações nas três técnicas (P<0,05). O chá preparado por decocção utilizando folhas novas na concentração 5% (m/v), apresentou o maior valor de mangiferina (0,72 ± 0,08 mg.mL-1). O chá apresentou estabilidade durante 48 horas após seu preparo em ambos os tratamentos avaliados e houve aceitação da bebida pelo consumidor. Alterações como tecido adiposo total aumentado, adipócitos com maior tamanho e acúmulo de lipídeos no tecido hepático, foram observadas nos animais alimentados com a dieta hiperlipídica. Foi observado que a dieta hiperlipídica, elevou os níveis da citocina pro-inflamatória TNF-α e reduziu a expressão de PPAR-γ. O chá teve efeitos anti-inflamatórios por meio da elevação dos níveis da citocina IL-10 e expressão de mRNA de LPL e PPAR-γ. Análises histomorfométricas evidenciaram os efeitos modulatórios do chá na redução do acúmulo de lipídeos e gotículas de gordura no tecido hepático e epididimal. Concluiu-se que o chá de folhas de M. indica é viável para ser consumido como bebida fonte de compostos bioativos, tendo efeitos anti-obesidade por meio da regulação da expressão de genes que melhoram o estado metabólico dos tecidos adiposo epididimal e hepático.