Bioquímica Agrícola
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Item Estudo filogeográfico e análise comparativa dos modelos de classificação do Porcine circovirus-2 (PCV-2).(Universidade Federal de Viçosa, 2010-07-30) Vidigal, Pedro Marcus Pereira; Silva Júnior, Abelardo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4771645P8; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782432A8; Lamêgo, Márcia Rogéria de Almeida; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782197P4; http://lattes.cnpq.br/4423245295284314; Ramos, Humberto Josué de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/4037452920080174; Heinemann, Marcos Bryan; http://lattes.cnpq.br/2008760316007525Os agentes infecciosos de suínos têm recebido grande atenção desde a última década, quando muitos países produtores acumularam perdas econômicas significativas devido a patógenos como o Porcine circovirus-2 (PCV-2). O PCV-2 é um vírus classificado na família Circoviridae e está associado a um conjunto de diferentes síndromes em suínos denominado Porcine Circovirus Associated Diseases (PCVAD). Desde a sua identificação e caracterização, o PCV-2 alcançou uma distribuição mundial e a PCVAD tornou-se uma síndrome endêmica na maioria dos países produtores, sendo considerada a principal causa por perdas nas granjas. Neste trabalho, as nomenclaturas propostas para a classificação das linhagens virais foram comparadas e as vias de dispersão do PCV-2 entre os países suinocultores foram analisadas. Uma pesquisa por sequências genômicas do PCV-2 foi realizada no GenBank e 350 sequências de isolados virais foram aleatoriamente selecionadas. Os modelos de classificação do PCV-2 em genótipos, recomendado pelo Consórcio Europeu que estuda as Porcine circovirus diseases (PCVD) e definido por análises de mismatch distibution, e o modelo de classificação em subgrupos filogenéticos, modelo alternativo e definido por hipóteses filogenéticas, foram aplicados ao conjunto de sequências selecionado. Tanto nas análises de mismatch distribution quanto nas análises filogenéticas, os agrupamentos formados e as variações observadas foram muito semelhantes. Nessas análises, observou-se a sobreposição entre os agrupamentos em genótipos e em subgrupos filogenéticos. O genótipo PCV-2a foi correspondente ao Grupo 2 e reuniu os subgrupos 2A, 2B, 2C, 2D e 2E. O genótipo PCV-2b foi correspondente ao Grupo 1 e reuniu os subgrupos 1A, 1B e 1C. O genótipo PCV-2c reuniu apenas a sequência do isolado viral que o define. Esses resultados mostram que as subdivisões existentes nos genótipos PCV-2a e PCV-2b não devem ser desconsideradas para que a diversidade genética existente entre os isolados virais do PCV-2 não seja subestimada. No estudo filogeográfico, as vias de dispersão do PCV-2 foram preditas por meio de abordagens filogenéticas e filogeográficas. Nas análises filogenéticas, as árvores foram calculadas por inferência bayesiana e os isolados virais foram agrupados nos genótipos PCV-2a, PCV-2b e PCV-2c. Nas análises filogeográficas, uma rede de haplótipos foi calculada pelo algoritmo Median Joining, para o estabelecimento da genealogia entre os isolados virais, e as vias de dispersão entre os países foram preditas. Para dar suporte a essas análises, dois bancos de dados foram organizados. O primeiro banco de dados reuniu todas as informações disponíveis sobre os isolados do PCV-2 no GenBank e nas publicações relacionadas ao isolamento viral. O segundo banco de dados reuniu as estatísticas do comércio internacional de suínos vivos disponíveis no United Nations Commodity Trade Statistics Database DESA/UNSD e foi organizado para estabelecer um contexto econômico às vias preditas na rede de haplótipos. A partir dessas análises e desses bancos de dados, as seguintes vias de dispersão do PCV-2 entre os países produtores de suínos foram preditas: América do Norte → África, América do Norte → América do Sul, América do Norte → Caribe, Europa → América do Norte, Europa → América do Sul, Europa → Ásia, Oceania → Ásia e Oceania → América do Norte. Nessas vias de dispersão, os principais países de origem das vias são o Canadá, os Estados Unidos, a Dinamarca, a França e a Holanda, que são os principais exportadores de animais no mercado internacional de suínos vivos. As correlações observadas entre as vias de dispersão do PCV-2 preditas nas análises filogeográficas e as estatísticas do comércio internacional de suínos vivos mostram a importância do movimento de animais no rebanho mundial para a emergência de novos patógenos e a necessidade da criação de barreiras sanitárias cada vez mais eficazes no comércio de animais.Item Seleção de genes candidatos, identificação e validação de marcadores SNPs para conteúdo de óleo em soja(Universidade Federal de Viçosa, 2013-02-21) Souza, Franciele Barros de; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Piovesan, Newton Deniz; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728400U5; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/5657135240353986; Soares, Taís Cristina Bastos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4768998Y9A soja é uma cultura agrícola amplamente distribuída por quase todas as regiões do mundo. É uma das principais oleaginosas produzidas e tornou-se uma espécie de grande interesse, devido aos teores elevados de proteína e óleo, à produtividade dos grãos e à possibilidade de sua adaptação a ambientes diversos. Tem sido muito visada como matéria prima renovável, principalmente na produção de biodiesel, sendo uma alternativa para diminuição da dependência dos derivados de petróleo. Diferentes marcadores moleculares são utilizados como ferramentas para a compreensão de herança, relações entre indivíduos e populações e para auxiliar no processo de seleção de caracteres quantitativos. Os marcadores SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) têm sido usados em estudos de associação baseados em genes candidatos. Para isto, tecnologias de genotipagem para identificação de SNPs, têm apresentado grandes avanços, como a análise de dissociação em alta resolução (High Resolution Melting analysis Analysis - HRMA), que é um método pós-PCR, para identificar alterações no DNA através da observação da distorção que ocorre na curva de dissociação das amostras. Baseado nestas descrições objetivou-se neste trabalho, selecionar genes candidatos para conteúdo de óleo em soja, identificar SNPs e validá-los em uma população de RILs (linhagens recombinantes endogâmicas), oriundas do cruzamento entre genótipos parentais Suprema e CD01RR8384. Foi possível selecionar 25 genes relacionados à biossíntese de lipídeos no soybase e, através do Northen eletrônico, pode-se observar que 14 destes genes foram expressos. Na análise de polimorfismos dos 14 genes, foram encontrados 52 SNPs, e com a genotipagem HRM na população de RILs, verificou-se o perfil de homozigoze e heterozigoze, havendo eficiência na identificação dos SNPs. Realizando-se a validação dos SNPs na população, observou-se que não foi possível associar os polimorfismos com as variações fenotípicas. Os SNPs distribuíram-se aleatoriamente, independente do conteúdo de óleo. Esta não correlação pode ser devido ao uso de uma população de RILs cultivada em um único ambiente e a possibilidade de ter sido selecionado QTLs de pequeno efeito.Item Determinantes virais envolvidos na adaptabilidade diferencial de dois begomovírus em tomateiro e Nicotiana benthamiana(Universidade Federal de Viçosa, 2011-12-16) Antunes, Tathiana Ferreira Sá; Fontes, Elizabeth Pacheco Batista; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781848H2; Zerbini Júnior, Francisco Murilo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783743U5; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/1906798499649337; Zerbini, Poliane Alfenas; http://lattes.cnpq.br/8632328159533071Os begomovírus (família Geminiviridae) possuem genoma constituído por um ou dois componentes de DNA de fita simples circular, e infectam plantas dicotiledôneas. Os sintomas induzidos pelo begomovírus Tomato yellow spot virus (ToYSV) em tomateiro e Nicotiana benthamiana são mais severos e surgem mais cedo em comparação aos induzidos pelo Tomato rugose mosaic virus (ToRMV). Além disso, o ToYSV invade o mesofilo em N. benthamiana, enquanto o ToRMV é restrito ao floema nesse hospedeiro (ambos os vírus são restritos ao floema em tomateiro). Essas observações indicam uma adaptação diferencial de cada um desses vírus aos seus hospedeiros. Com o objetivo de mapear os determinantes genéticos virais responsáveis por essa adaptação diferencial, foram construídos três recombinantes com base na troca dos genes MP e NSP e da região BRi entre esses vírus, em diferentes combinações. Os experimentos com os recombinantes foram realizados para determinar o ganho ou a perda das seguintes características: intensidade de sintomas, acúmulo de DNA viral e tropismo de tecido. Os recombinantes recíprocos nos quais os genes MP e NSP foram trocados apresentaram sintomas de intensidade intermediária em comparação aos vírus parentais em ambos os hospedeiros, e o mesmo tropismo de tecido em N. benthamiana. Já o recombinante no qual a região BRi do ToYSV foi inserido no DNA-B do ToRMV foi capaz de infectar o mesofilo em N. benthamiana. Em conjunto, esses resultados sugerem que as proteínas MP e NSP e a região BRi estão envolvidas na adaptação do ToYSV em tomateiro e N. benthamiana, e que a região BRi é o determinante viral de tropismo de tecido em N. benthamiana. Outras proteínas e sequências regulatórias presentes no DNA-A também devem estar envolvidas na adaptação desses vírus, no entanto experimentos adicionais, incluindo a análise do recombinante no qual a região BRi do ToRMV esteja inserida no DNA-B do ToYSV, são necessários para a identificação precisa dessas regiões.Item Caracterização do perfil de ácidos graxos em leite de cabra por diferentes métodos de extração de gordura ou por metilação direta(Universidade Federal de Viçosa, 2011-07-04) Madureira, Plínio Magalhães; Detmann, Edenio; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4760013T1; Rodrigues, Marcelo Teixeira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788161Y5; Moraes, George Henrique Kling de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4721569T7; http://lattes.cnpq.br/1111892534834228; Silva, Márcia Maria Cândido da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4700519H2; Oliveira, Tânia Toledo de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787758J2; Queiroz, Augusto César de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783006P5Objetivou-se caracterizar o perfil de ácidos graxos em leite de cabra por quatro métodos distintos de extração da gordura do leite e um método de metilação direta com posterior análise por cromatografia gasosa. As amostras foram obtidas no tanque de armazenamento de leite no setor de Caprinocultura do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Viçosa, onde se encontram caprinos das raças Saanen e Alpina, os quais são mantidos em baias coletivas sob o sistema de estabulação livre e recebendo alimentação à base de silagem de milho, feno de Tifton e concentrado. As metodologias utilizavam processos de extração por solventes orgânicos, hexano (NOUROOZ-ZADEH & APPELQUIST, 1988) e clorofórmio (BLIGH & DYER, 1959); extração somente por processos físicos de centrifugação (FENG et al. 2004); extração por centrifugação associada à extração por solvente (HARA & RADIN, 1978) e extração e metilação realizadas conjuntamente a partir do leite liofilizado (CHRISTIE et al. 1982). As análises demonstraram que o tempo longo de manipulação da amostra durante a extração da gordura do leite nos métodos que não utilizavam o leite liofilizado provoca perda dos ácidos graxos mais voláteis, sendo que a metodologia de extração e metilação a partir do leite liofilizado preserva mais os teores dos ácidos graxos de cadeia curta e média do leite caprino. O método proposto por CHRISTIE et al. (1982) foi o que mais se destacou,notadamente em relação aos ácidos graxos butírico (C4), capróico (C6), caprílico (C8) e cáprico (C10), apresentando concentrações (g/100g de gordura) (P<0,05) maiores para esses AGs em relação aos demais métodos analíticos.Item Correlação entre a expressão dos genes da subunidade α da β-conglicinina e GmFAD2-1A durante o desenvolvimento da semente de soja(Universidade Federal de Viçosa, 2010-02-25) Cunha, Pricila da Silva; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/2712020388620043; Fietto, Juliana Lopes Rangel; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790238D0; Oliveira, Márcia Rodrigues Carvalho; http://lattes.cnpq.br/0568726713111558O aumento no conteúdo de ácido oléico e diminuição nos níveis dos ácidos graxos polinsaturados (linolênico e linoléico) na semente de soja pode ser alcançado pela redução da atividade da enzima ω-6 dessaturase microssomal através do silenciamento do gene GmFAD2-1A que codifica para essa enzima, resultando na produção de óleos com elevada estabilidade oxidativa. O silenciamento deve ocorrer especificamente na semente de forma a não alterar as características agronômicas da planta e não interferir negativamente no seu crescimento e desenvolvimento. Para isso, o transgene deve estar sob controle de um promotor semente-específico como o promotor do gene da subunidade α da β-conglicinina (promotor pBC). O principal objetivo desse trabalho foi correlacionar o padrão de expressão do gene que codifica a subunidade α da β-conglicinina (gene BC) com o padrão de expressão do gene GmFAD2-1A ao longo do desenvolvimento da semente de soja em cinco variedades que diferem quanto ao teor protéico ("normal" e "alto") e ao ciclo de vida (precoce e tardio). E, através dessa correlação, analisar se opromotor pBC apresenta potencial para ser usado em futuros experimentos de transformação genética de soja que tenha como objetivo silenciar o gene GmFAD2-1A. A análise do padrão de expressão dos genes BC e GmFAD2-1A foi feita por PCR em Tempo Real (qRT-PCR) utilizando dois controles endógenos (GAPDH e EF1b). A subunidade α da β-conglicinina foi quantificada por SDSPAGE/ densitometria durante o desenvolvimento da semente em todos os cinco cultivares. De modo geral, a concentração da subunidade α daβ-conglicinina foi inferior em estádios iniciais de desenvolvimento da semente, aumentando em estádios do meio para o final da maturação, indicando que ocorreu um acúmulo desse polipeptídeo ao longo do enchimento do grão, e apresentando uma concentração alta e significativa na semente madura. As variedades de teor protéico "normal" apresentaram concentrações superiores da subunidade α quando comparadas com suas respectivas isolinhas de maiores teores protéicos, o que ocorreu em estádios do meio para o final da maturação. Os dois genes endógenos (GAPDH e EF1b) normalizaram os dados de expressão dos genes BC e GmFAD2-1A de modo muito similar, com as principais diferenças ocorrendo nos perfis de expressão dos dois genes alvos em estádios do meio e final da maturação nas variedades de ciclo precoce. Entretanto, GAPDH foi melhor normalizador do que EF1b, mostrando expressão mais estável entre todos os tratamentos. De modo geral, o gene BC apresentou maior padrão de expressão em estádios do início e meio da maturação da semente, sendo que nesses estádios pode-se sugerir que o promotor pBC atingiu sua capacidade máxima para ativar a transcrição do gene alvo, com a expressão do gene BC diminuindo em direção aos estádios finais de desenvolvimento da semente. Pode-se sugerir que essa diminuição na expressão do gene BC esteja associada à uma diminuição na atividade do promotor pBC, embora ele ainda permanecesse suficientemente ativo para garantir um nível alto de expressão do transgene em futuros experimentos transformação genética de soja. Nenhuma diferença significativa foi encontrada no padrão de expressão do gene BC quando se comparou uma variedade de soja e sua respectiva isolinha de maior teor protéico ao longo do desenvolvimento da semente. De modo geral, enquanto a concentração da subunidade α foi inferior em estádios iniciais da maturação (1° e 2°), o gene BC apresentou maior padrão de expressão em estádios do início e meio do desenvolvimento da semente (2° e 3°). A partir do 3° estádio em direção ao final da maturação, houve um aumento na concentração da subunidade α enquanto verificou-se uma diminuição na expressão do gene BC em vários desses estádios. A principal diferença foi encontrada na semente madura de todas as variedades que apresentou uma alta concentração do polipeptídeo, apesar de uma expressão quase nula do gene BC. De forma geral, não foi encontrado um padrão de expressão do gene BC e de concentração da subunidade α que permitisse diferenciar o grupo de variedades de ciclo tardio do grupo de ciclo precoce. Em relação ao gene GmFAD2-1A, de modo geral, as variedades de ciclo tardio apresentaram maior padrão de expressão gênica em estádios do meio para o final do desenvolvimento da semente, enquanto nos cultivares de ciclo precoce o gene GmFAD2-1A mostrou maior padrão de expressão em estádios do início e meio da maturação. Assim como para o gene BC a expressão de GmFAD2-1A foi quase nula na semente madura para todas as variedades. De modo geral, a correlação entre o padrão de expressão dos genes BC e GmFAD2-1A nas variedades de ciclo tardio mostrou que nos estádios em que houve maior taxa de transcrição do gene GmFAD2-1A a expressão do gene BC diminuiu após atingir um pico de expressão no 3° estádio. Entretanto, a expressão do gene BC foi ainda superior à do gene GmFAD2-1A nesses estádios. Dessa forma, para os cultivares de ciclo tardio, nos estádios em que o gene GmFAD2-1A apresentou os maiores valores de expressão pode-se sugerir que o promotor pBC está ativo ou com uma capacidade máxima para ativar a transcrição do gene alvo. Nos cultivares de ciclo precoce essa correlação mostrou que os genes BC e GmFAD2-1A apresentaram um padrão de expressão semelhante, com valores elevados de expressão gênica em estádios do início e meio da maturação (2° e 3°), diminuindo em estádios posteriores de desenvolvimento da semente. Portanto, pode-se sugerir que a maior atividade do promotor pBC ocorreu nos mesmos estádios em que foram encontrados os maiores valores de expressão do gene GmFAD2-1A. Dessa forma, pode-se sugerir que o promotor do gene da subunidade α daβ-conglicinina apresenta elevado potencial para ser usado em futuros experimentos de transformação genética que tenha como objetivo silenciar o gene GmFAD2-1A ao longo do desenvolvimento da semente de soja em todos os cultivares analisados.Item Efeito do estresse hídrico na expressão de proteínas em duas variedades de soja contrastantes para o conteúdo de óleo e proteína(Universidade Federal de Viçosa, 2013-11-12) Soares, Carla Quinhones Godoy; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/9819216110443917; Ribeiro, Cleberson; http://lattes.cnpq.br/5023387764069051; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8; Ramos, Humberto Josué de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/4037452920080174; Araujo, Wagner Luiz; http://lattes.cnpq.br/8790852022120851; Teixeira, Arlindo Inês; http://lattes.cnpq.br/2334788531499774Elucidar os processos bioquímicos e fisiológicos que ocorrem em resposta ao estresse hídrico durante o período de desenvolvimento reprodutivo em plantas é importante para prever os impactos das alterações climáticas sobre a qualidade das sementes. Neste trabalho, as variedades de soja Suprema e UFVTN105AP, de sementes com alto teor de óleo e baixo teor de proteína, e baixo teor de óleo e alto teor de proteína, respectivamente, foram submetidas ao déficit hídrico no estádio R5. Neste ponto, foram analisados parâmetros fisiológicos, coletadas folhas e raízes para análise proteômica, seguida de seqüenciamento em espectrômetro de massa (MALDI-TOF- TOF), e identificação pelo Mascot 4®. Foram realizadas análises de PCR quantitativo em tempo real, sendo a quantificação relativa da expressão gênica feita pelo método 2 - ∆ct, utilizando o termociclador SDS ABI PRISM 7500. As plantas foram re-irrigadas, após este ponto, e foram coletadas sementes em R8 para análise do conteúdo de óleo e proteína por espectrofotometria do infravermelho próximo (FT-NIR). Foi verificado, em sementes de plantas submetidas ao déficit hídrico, uma redução no conteúdo de óleo em ambas as variedades, e um aumento no conteúdo de proteína na variedade Suprema. As duas variedades apresentaram uma redução na expressão de enzimas envolvidas no metabolismo de carbono, como a fosfoglicerato cinase, gliceraldeido 3 fosfato desidrogenase, ferrodixina NADPH redutase, ATP sintase e quinona oxidoredutase, que estão relacionadas com a redução do conteúdo de óleo nas sementes. O aumento na expressão de enzimas relacionadas com o metabolismo do nitrogênio, como Glutamina sintetase, proteína 14-3-3, Vspβ, isoflavona redutase e chalcona isomerase, foram observadas na variedade Suprema, tanto em folhas quanto em raízes, e foram relacionadas com o aumento no conteúdo de proteína na semente. A variedade Suprema, em condições de estresse hídrico, mostrou uma elevada expressão da enzima Glutamina sintetase em folhas, o que não foi observado na UFVTN105AP. Este fato pode estar relacionado com o diferente comportamento das duas variedades em relação ao acúmulo de proteína na semente. Os resultados mostram que alterações na composição de óleo e proteína da semente estão relacionadas com a intensidade e duração do estresse hídrico, e ainda, dependentes da variedade em estudo.Item Identificação de marcadores SNP em genes candidatos associados ao conteúdo e qualidade do óleo de soja(Universidade Federal de Viçosa, 2012-11-05) Bueno, Rafael Delmond; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; God, Pedro Ivo Vieira Good; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4769361T9; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/5163173387452113; Piovesan, Newton Deniz; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728400U5; Teixeira, Arlindo Inês; http://lattes.cnpq.br/2334788531499774O desenvolvimento de cultivares produtivas com incremento significativo no teor de proteína e/ou de óleo, bem como melhorar a composição de ácidos graxos na fração óleo, está entre os principais objetivos dos programas de melhoramento genético de soja. A identificação e validação de marcadores SNP (Single Nucleotide Polymorphism) em regiões gênicas associadas a essas características e o seu emprego na seleção assistida por marcadores moleculares (SAM), representa uma poderosa ferramenta para o melhoramento genético da soja, no sentido de aumentar a eficiência e proporcionar maiores ganhos genéticos. O objetivo deste trabalho foi identificar SNP em regiões gênicas associadas ao conteúdo e a qualidade do óleo em genótipos contrastantes do banco de germoplasma do Programa de Melhoramento da Qualidade da Soja da UFV e validar os polimorfismos como marcadores moleculares em populações segregantes e RILs. Foram selecionados 22 genes candidatos que estão potencialmente relacionados com o conteúdo e a qualidade do óleo em soja. As sequências parciais dos 22 genes candidatos ou de genes homólogos, foram obtidas a partir do GenBank. As sequências gênicas completas foram obtidas por meio do algoritmo BLASTn no banco de dados PHYTOZOME. Os primers desenhados para amplificar regiões específicas de cada gene candidato em genótipos contrastantes para conteúdo e qualidade do óleo de soja, produziram 33,91 kpb de sequencias com boa qualidade, com valor de Phred superior ou igual a 30, sendo identificados 88 SNP e 26 INDELs. Com o intuito de obter informações sobre a expressão dos transcritos dos genes candidatos foi feito um alinhamento por meio do algoritmo BLASTn, contra bibliotecas de ESTs derivadas de sete tecidos de soja, depositados no banco de dados do NCBI. Os resultados mostraram que todos os transcritos selecionados dos genes ADPRI e G3PDH foram expressos constitutivamente, enquanto que os transcritos dos genes ABI3, ACC, AMIP, ARAF, ASIL, CLPPR, CPT, DGAT, DOF4, FUS3, LEC1A, LEC1B, LPCAT, MDH e WRI, apresentaram expressão órgão-específica. Primers de genotipagem TSPCR (Temperature-Swicht Polymerase Chain Reaction) foram utilizados para discriminar os alelos de SNP em cinco populações (RIL e F2). Os polimorfismos identificados por meio do sequenciamento foram inicialmente testados nos respectivos progenitores, sendo para isso, desenhados 20 conjuntos de primers TSPCR. Somente os primers TSPCR desenhados no polimorfismo dos genes AMIP-5, AMIP-3, ABI3, LEC1B, ARAF, LPCAT, PDAT, FAD3B e FAD3C mostraram-se polimórficos, sem bandas inespecíficas e/ou marcação de bandas fracas, nos respectivos progenitores. Os primers de genotipagem TSPCR desenhados no polimorfismo dos genes AMIP-5, AMIP-3, ABI3 e LEC1B foram amplificados em 176 progênies F6 do cruzamento PI371611 x CD222 (contrastantes para teor de óleo). Os primers TSPCR desenhados no polimorfismo dos genes ARAF, LPCAT, e LEC1B foram genotipados em 236 progênies, na geração F6, derivadas do cruzamento CD01RR8311 x SUPREMA (contrastantes para teor de óleo). Os primers TSPCR, desenhados para detectar o polimorfismo presente nos genes ABI3 e LEC1B foram amplificados em 170 progênies F6, derivadas do cruzamento entre A7002 x CD219 (contrastantes para teor de óleo). Os primers TSPCR desenhados para discriminar os alelos de SNP identificados nos genes candidatos ARAF e PDAT, foram amplificados em 259 progênies F6 do cruzamento FA22 x CD219 (contrastantes para teor de ácido oleico). Os primers TSPCR desenhados no polimorfismo dos genes FAD3B, FAD3C e ABI3 foram amplificados em 185 progênies na geração F2 do cruzamento A29 x Tucunaré (contrastantes para teor de ácido linolênico). O polimorfismo do gene ABI3, apresentou associações significativas com teor de proteína na população F6 (A7002 x CD219) e com a característica teor de ácido palmítico, na população F2:3 do cruzamento entre A29 e Tucunaré. Nessa mesma população foram detectadas associações significativas do marcador SNP presente no gene FAD3B com os teores dos ácidos graxos esteárico, oléico e linolênico e do marcador SNP do gene FAD3C com os teores de ácidos linoléico e linolênico. A metodologia de genotipagem TSPCR mostrou ser eficaz na discriminação dos alelos de SNP nas cinco populações estudadas. Associação dos marcadores SNP presentes nos genes ABI3, FAD3B e FA3C, que estão relacionados com a biossíntese dos ácidos graxos, possibilitará o emprego da SAM, com intuito de selecionar indivíduos que apresentem melhor perfil de ácidos graxos, otimizando o desenvolvimento de linhagens de soja especiais para a agroindústria.Item Qualidade do biodiesel: degomagem, perfis de ácidos graxos e misturas de biodiesel de diferentes matérias primas(Universidade Federal de Viçosa, 2011-08-08) Santos, Eleonice Moreira; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Dias, Luiz Antonio dos Santos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763137P6; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/0377243496257605; Piovesan, Newton Deniz; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728400U5; God, Pedro Ivo Vieira Good; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4769361T9; Araújo, Maria Helena de; http://lattes.cnpq.br/2358316608859284O biodiesel é derivado de óleos vegetais ou gorduras animais, e é considerado uma potencial fonte renovável para substituição parcial do diesel de petróleo. Quimicamente o biodiesel é definido como mono alquil ésteres de ácidos graxos, produzido por transesterificação. O tamanho da cadeia carbônica e o número de insaturações e ramificações dos ésteres de ácidos graxos influenciam diretamente as propriedades que garantem a qualidade do biodiesel. A estabilidade oxidativa e o ponto de entupimento de filtro a frio (CFPP) são afetados de modos contrários pelos ácidos graxos. O aumento do conteúdo de ácidos graxos insaturados diminui a estabilidade oxidativa e melhora o CFPP. Além da influencia dos ácidos graxos na qualidade do biodiesel, a presença de fósforo no biodiesel afeta drasticamente o desempenho do catalisador. Para avaliar alguns dos aspectos relacionados com a qualidade do biodiesel, realizou-se um estudo sobre: a importância do pré tratamento dos óleos vegetais para a redução do conteúdo de fósforo; avaliação de uma linhagem de soja com reduzido conteúdo de ácido linolênico para produção de biodiesel; e o uso de misturas com biodieseis de diferentes matérias primas na melhoria da estabilidade oxidativa e CFPP. Na avaliação do uso da degomagem como pré tratamento para redução do conteúdo de fósforo em óleos de soja convencional, soja contendo baixo conteúdo de ácido linolênico e pinhão manso usando degomagem com água e degomagem ácida, os dois métodos testados foram eficientes na redução do conteúdo de fósforo dos óleos e não afetaram a acidez livre. No estudo da performance da soja com baixo linolênico em relação a soja convencional na produção de biodiesel, os resultados mostram que o biodiesel da soja com baixo linolênico apresenta maior estabilidade oxidativa que o de soja convencional e o CFPP é semelhante. Na avaliação da influência das misturas dos biodieseis de soja convencional e com baixo linolênico em biodieseis de pinhão manso e palma, nas propriedades - estabilidade oxidativa e CFPP do biodiesel, o conteúdo e perfil dos ácidos graxos apresentam forte correlação com estas propriedades. As modificações do conteúdo dos ésteres de ácidos graxos proporcionadas pelas misturas mostram que o CFPP para as misturas de biodiesel de soja convencional e soja com baixo linolênico em pinhão manso e palma, apresentou comportamento semelhante. Para estabilidade oxidativa os melhores valores foram para as misturas com os biodieseis de soja com baixo linolênico, pinhão manso e palma. Diante dos resultados, melhorias na qualidade do biodiesel podem ser alcançadas com pré tratamento simples, como a degomagem com água para redução do conteúdo de fósforo; modificações genéticas na fração óleo de oleaginosas usadas como matérias primas para a produção de biodiesel; ou ainda por meio de misturas entre diferentes biodieseis, com combinações que favoreçam a melhoria da estabilidade oxidativa e CFPP e outras propriedades.Item Caracterização in silico de genes da biossíntese de lipídeos e utilização de eixos embrionários e nós-cotiledonares na transformação genética de soja(Universidade Federal de Viçosa, 2012-06-15) Sousa, Cassiana Severiano de; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/2126288732219018; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8; Soares, Taís Cristina Bastos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4768998Y9As atividades das enzimas oleoil dessaturase, 1,2-diacilglicerol colinafosfotransferase (CPT) e a lisofosfatidilcolina aciltransferase (LPCAT) regulam a biossíntese de lipídeos em plantas. Dessa forma, um melhor conhecimento dos genes que codificam essas enzimas é importante no processo de melhoramento genético da qualidade do óleo de soja. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar in silico os genes que codificam as enzimas CPT e LPCAT em soja e avaliar a utilização de eixos embrionários e nós-cotiledonares como explantes em protocolos de cultura de tecidos para transformação genética, via RNA de interferência, com cassetes de silenciamento do gene da oleil dessaturase. Análises computacionais mostraram que o genoma da soja apresenta dois genes que codificam a CPT e dois genes que codificam a LPCAT, sendo que um desses genes apresentou um transcrito alternativo. Nas regiões promotoras foram identificados cis-elementos responsáveis pela expressão semente-específica e também de resposta a estresses biótico e abiótico. A análise in silico indica que os genes são expressos em diferentes condições de estresse, em embriões somáticos em diferenciação, em sementes imaturas, em tecidos de raiz e em calos. A análise das sequências aminoacídicas revelou a presença de domínios transmembrana e a busca da localização celular indicou que as enzimas CPT e LPCAT estão localizadas no retículo endoplasmático. Como esses genes se expressam em sementes, eles são possíveis candidatos à manipulação genética visando a melhoria da qualidade do óleo. Dois protocolos de transformação de soja foram avaliados para a possível obtenção de soja com óleo que apresente maior estabilidade oxidativa. Nesse sentido, as variedades comerciais CAC-1 (de ciclo tardio) e CD-201 (de ciclo precoce) foram submetidas à infecção via Agrobacterium tumefaciens da linhagem KYRT1. O protocolo utilizado para os eixos embrionários foi mais rápido, com meios de cultura menos elaborados em relação à composição e um maior número de plantas foi transferido para a casa de vegetação, onde permaneceram até a produção de vagens e sementes. Foi possível realizar todas as etapas, desde a infecção até regeneração e aclimatação das plantas, para as variedades utilizadas, pelos protocolos descritos.Item Seleção de mutantes para conteúdo de proteína e óleo por espectroscopia do infravermelho próximo em soja submetidas à radiação gama(Universidade Federal de Viçosa, 2011-10-03) Barros, Josie Gomes de Almeida; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Guimarães, Valéria Monteze; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4798758T3; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/0758137207332877; Moraes, Rita Maria Alves de; http://lattes.cnpq.br/2396993596781287; Piovesan, Newton Deniz; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728400U5A indução de mutações por agentes mutagênicos físicos ou químicos tem sido muito utilizada nos programas de melhoramento de diversas culturas, inclusive no melhoramento da soja (Glycine max (L.) Merrill). A combinação da indução da mutação com uma eficiente análise das características cuja variação é desejada tem contribuído significativamente para o melhoramento vegetal. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da aplicação de diferentes dosagens de radiação gama (100, 200 e 300 Gy) sobre o conteúdo de proteína e óleo de grãos de soja e selecionar genótipos mutantes com características bioquímicas desejáveis ao Programa de Melhoramento da Soja do BIOAGRO/UFV. Modelos de calibração foram desenvolvidos para quantificar os conteúdos de umidade, proteína e óleo por espectroscopia de reflectância no infravermelho próximo para serem utilizados na determinação destes constituintes em linhagens de soja. Os coeficientes de correlação e erros quadráticos médio das calibrações (RMSEC) foram, respectivamente, 0,997 e 0,117 para umidade; 0,998 e 0,202 para proteína e 0,988 e 0,421 para óleo. Estes resultados demonstraram que a espectroscopia NIR forneceu resultados satisfatórios para análise dos constituintes em soja. Com os valores dos conteúdos de proteína e óleo da soja tratada com diferentes dosagens de raios gama e da não tratada (testemunha cultivar Vencedora) foi realizada uma avaliação do efeito das diferentes dosagens sobre essas características. A correção dos conteúdos de proteína e óleo em relação ao efeito ambiental foi realizada a partir das informações das testemunhas que foram intercaladas no ensaio. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância pelo teste F a 5% de probabilidade para testar o efeito da mutação nas progênies M1:4. A dose de radiação gama de 300 Gy forneceu maior porcentagem de plantas M1 irradiadas com diferenças significativas em relação à testemunha para as duas características avaliadas. Das plantas M1 selecionadas que apresentaram diferenças significativas entre os tratamentos irradiado e não irradiado, as que apresentaram menor e maior conteúdo máximo de proteína, superiores ao da testemunha (39,87%) foram as plantas 934 (43,03%) e 100 (46,64%), respectivamente. Os conteúdos de proteína dessas plantas foram maiores que da testemunha em 8% e 17%, respectivamente, indicando que as mutações nas plantas M1 selecionadas favoreceram o conteúdo de proteína. Para óleo, as plantas a que apresentaram menor e maior conteúdo máximo de óleo, superiores ao da testemunha (19,33%) foram as plantas 177 (20,46%) e 421 (21,89%) que apresentaram conteúdo de óleo maior que da testemunha em 6% e 13%, respectivamente, indicando que as mutações nas plantas M1 selecionadas favoreceram o conteúdo de óleo. As progênies M4 das plantas M1 que foram selecionadas como possíveis mutantes para aumento dos conteúdos de proteína e óleo através deste trabalho serão conduzidas a um novo ensaio de seleção de progênies para confirmar os dados obtidos e após essa nova seleção as progênies mutantes poderão ser utilizadas no Programa de Melhoramento da Soja do BIOAGRO/UFV.