Atividade anticâncer de extratos de Passiflora edulis e Passiflora setacea e dos óleos essenciais de Cyanocephalus rugosus e Cantinoa carpinifolia in vitro

Abstract

As famílias Passifloraceae e Lamiaceae possuem uma grande diversidade natural, sobretudo no Brasil. Diversas espécies já foram relatadas como fonte de compostos bioativos contra diferentes células cancerosas. O objetivo deste foi avaliar o potencial anticâncer e a composição química de extratos de acetato de etila de Passiflora edulis (SPE) e Passiflora setacea (SPS), além dos óleos essenciais de Cyanocephalus rugosus (CR) e Cantinoa carpinifolia (CC), coletadas no Cerrado (MG). A atividade citotóxica foi avaliada através de ensaio de MTT nas linhagens B16F10, 4T1, melan-a, VERO, SW480, HEPG-2, para o cálculo dos valores de IC50 e os índices de seletividade (IS), enquanto o tipo de morte celular e as variações no ciclo celular foram avaliadas em diferentes linhagens por citometria de fluxo e microscopia de luz. Os extratos foram obtidos de sementes, folhas e cascas por extração líquido-líquido e os óleos essenciais foram obtidos de folhas e flores por hidrodestilação e analisados por cromatografia gasosa e espectrometria de massas (CG/EM). Nos extratos SPE e SPS foram identificados apenas ácidos graxos. O ácido linoléico foi o composto majoritário (CM) em ambos, com maiores concentrações em SPE (74,35 %), comparado a SPS (64,75 %), seguido pelos ÁO (ácido oleico) e ÁP (ácido palmítico), em menores concentrações. O ÁO e o ÁP também tiveram suas atividades citotóxicas avaliadas. Os CM no óleo de flores e folhas de CR foram: β-cariofileno (22,84 %), Germacreno D (19,97 %), δ-Acoradieno (11,71 %), Espatulenol (8,30 %) e Tau-cadinol (5,30 %); no óleo de folhas de CR foram: Germacreno D (16,11 %), β- cariofileno (12,51 %), Espatulenol (12,16 %), δ-Acoradieno (11,98 %) e Óxido de cariofileno (6,49 %); no óleo de flores de CC: α-Tujona (43,13 %), Sabineno (8,86 %), Espatulenol (7,92 %), Óxido de cariofileno (5,41 %) e β-Tujona (5,13 %) e no óleo de folhas de CC: α-Tujona (46,049 %), Espatulenol (6,72 %), Sabineno (6,062 %), Isocariofileno (5,093 %) e α-Copaeno (4,797 %). O IS de SPS foi de 2,64 para B16F10 e 8,03 para SW480, enquanto SPE exibiu IS de 10,91 para a mesma. O ÁP exibiu IS de 2,19 para 4T1. O IS do óleo de folhas e flores de CR foi de 4,72 para HEPG-2 e do óleo das flores de CC foi de 2,71 para SW480. O tipo de morte celular desencadeado pelo extrato SPS nas células B16F10 foi a apoptose e para SW480 foi observado um acúmulo de células na fase G2-M associado a um aumento de DNA fragmentado e células vacuolizadas. Nas células 4T1 o ÁP também levou ao acúmulo de células em G2-M e aumento de fragmentação do DNA. O mecanismo de ação identificado para o óleo de folhas de CR nas células HEPG-2 foi morte celular por apoptose com fragmentação do DNA. Enquanto os óleos de folhas e flores de CR e das flores de CC induziram a morte celular por apoptose, conforme foi identificado na análise de morfologia celular por microscopia de luz. Esses achados indicam que os extratos SPE e SPS e os óleos essenciais de CR e CC possuem atividade anticâncer com seletividades promissoras in vitro e podem ser considerados na busca por compostos naturais com atividade anticâncer. Palavras-chave: Câncer. Cerrado. Espatulenol. Hyptis. Maracujá. MTT. Rosmarinho.The Passifloraceae and Lamiaceae families have a great natural diversity, especially in Brazil. Several species have already been reported as a source of bioactive compounds against different cancer cells. The aim of this study was to evaluate the anticancer potential and chemical composition of ethyl acetate extracts from Passiflora edulis (SPE) and Passiflora setacea (SPS), in addition to essential oils from Cyanocephalus rugosus (CR) and Cantinoa carpinifolia (CC), collected in the Cerrado (MG). Cytotoxic activity was evaluated by MTT assay on B16F10, 4T1, melan-a, VERO, SW480 and HEPG-2 cell lines for the calculation of IC50 values and selectivity indices (SI), while the type of cell death and variations in the cell cycle were evaluated in different cell lines by flow cytometry and light microscopy. Extracts were obtained from seeds, leaves and bark by liquid-liquid extraction and essential oils were obtained from leaves and flowers by hydrodistillation and analyzed by gas chromatography and mass spectrometry (GC/MS). In the SPE and SPS extracts, only fatty acids were identified. Linoleic acid was the major compound (MC) in both, with higher concentrations in SPE (74.35 %), compared to SPS (64.75 %), followed by OA (oleic acid) and PA (palmitic acid), in lower concentrations. OA and PA also had their cytotoxic activities evaluated. The MC in the oil of CR flowers and leaves were: β-caryophyllene (22.84 %), Germacrene D (19.97 %), δ- Acoradiene (11.71 %), Spathulenol (8.30 %) and Tau -cadinol (5.30 %); in CR leaf oil were: Germacrene D (16.11 %), β-caryophyllene (12.51 %), Spathulenol (12.16 %), δ-Acoradiene (11.98 %) and Caryophyllene oxide (6 .49 %); in CC flower oil: α-Thujone (43.13 %), Sabinene (8.86 %), Spathulenol (7.92 %), Caryophyllene oxide (5.41 %) and β-Thujone (5.13 %) and in CC leaf oil: α-Thujone (46.049 %), Spathulenol (6.72 %), Sabinene (6.062 %), Isokaryophyllene (5.093 %) and α-Copaene (4.797%). The SI of SPS was 2.64 for B16F10 and 8.03 for SW480, while SPE showed SI of 10.91 for it. The PA exhibited a SI of 2.19 for 4T1. The SI of CR leaf and flower oil was 4.72 for HEPG-2 and CC flower oil was 2.81 for SW480. The type of cell death triggered by the SPS extract in B16F10 cells was apoptosis and for SW480 an accumulation of cells in the G2-M phase was observed associated with an increase in fragmented DNA and vacuolated cells. In 4T1 cells PA also led to accumulation of cells in G2-M and increased DNA fragmentation. The mechanism of action identified for CR leaf oil on HEPG-2 cells was cell death by apoptosis with DNA fragmentation. While the oils from leaves and flowers of CR and CC flowers induced cell death by apoptosis, as identified in the analysis of cell morphology by light microscopy. These findings indicate that SPE and SPS extracts and CR and CC essential oils have anticancer activity with promising in vitro selectivities and can be considered in the search for natural compounds with anticancer activity. Keywords: Cancer. Cerrado. Hyptis. MTT. Passion fruit. Rosemary. Spatulenol.