Ciências Biológicas e da Saúde
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Item Potencial bioquímico e perfil de crescimento de isolados de Streptomyces spp(Universidade Federal de Viçosa, 2020-11-05) Abreu, Dâmaris Simões Gomes; Bazzoli, Denise Mara Soares; http://lattes.cnpq.br/6606314838268779Bactérias do gênero Streptomyces pertencentes ao filo Actinobacteria são Gram-positivas com alto conteúdo GC no seu DNA. São predominantes no solo e há uma estimativa de que cerca de 80% das substâncias bioativas naturais do mundo, como antibióticos, substâncias antitumorais, imunossupressores, pesticidas, pigmentos e diversas enzimas de interesse industrial sejam produzidas por Streptomyces spp. O rastreamento de novas fontes de enzimas com capacidade de catalisar diferentes reações é um aspecto atraente para indústria biotecnológica. Uma forma de encontrar novas fontes, é a partir da triagem de um grande número de microrganismos, aumentando a probabilidade de se encontrar fontes promissoras para uma ampla gama de enzimas. O objetivo desse trabalho foi caracterizar isolados de Streptomyces spp. em relação à produção de diversas enzimas de interesse biotecnológico e investigar o perfil de crescimento de alguns dos isolados considerados mais promissores. Na primeira etapa, foi realizada análise qualitativa para atividade das enzimas: amilase, celulase, protease, lipase, L-asparaginase e L-glutaminase. Os isolados de Streptomyces spp. investigados foram capazes de expressar atividade de diferentes enzimas nas condições analisadas. Assim, 5% dos isolados apresentaram atividade de todas as 6 enzimas investigadas, 30% foram capazes de expressar atividade para 5 diferentes enzimas, 30% (4), 19% (3) e 16% apenas um único perfil de atividade. Três isolados foram investigados quanto ao perfil de crescimento. Para isso, os isolados identificados como CAB25, CAB50 e CAB66 foram inoculados nos caldos BD (Batata Dextrose) e ISP-2 (International Streptomyces Project), por 12 dias a 28 °C e 150 RPM, e o crescimento acompanhado por massa seca, consumo de glicose e variação do pH ao longo do período de análise. A partir dos resultados obtidos, pôde-se observar que houve relação entre variação de pH e aumento de massa seca, sendo a tendência de incremento de biomassa ao longo do tempo significativamente diferente entre os dois meios de cultura e para todos os isolados testados. A escolha do meio de cultura apropriado é importante para análise de isolados de Streptomyces, visto que o potencial de produção de compostos bioativos é influenciado pelas condições culturais. A análise do pH do sobrenadante 9 das culturas em meio ISP-2, de neutro a alcalino, revelou que os isolados de Streptomyces possuem características interessantes para aplicação em solos ácidos. Portanto, com este trabalho, foi possível selecionar isolados de Streptomyces spp. produtores de enzimas de interesse biotecnológico e com taxa de crescimento rápido, o que permite desenvolver plataformas ou chassis biotecnológicos de Streptomyces spp. Palavras-chave: Actinobacteria. Potencial enzimático. Crescimento microbiano.Item Predição in silico de Proteínas Extracelulares de Kluyveromyces lactis e suas relações com fatores transcricionais(Universidade Federal de Viçosa, 2008-07-31) Brustolini, Otávio José Bernardes; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8; Cruz, Cosme Damião; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788274A6; Passos, Flávia Maria Lopes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781817D3; http://lattes.cnpq.br/0928279245502410; Mantovani, Hilário Cuquetto; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727026Z7; Yotoko, Karla Suemy Clemente; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763141P7O banco de dados da Kluyveromyces lactis constituído de 5327 seqüências de proteínas (http://cbi.labri.fr/Genolevures) foi submetido a quatro algoritmos de predição para identificar o potencial secretome extracelular. O primeiro,SignalP v3 (http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP-3.0), que identifica a presença de peptideo sinal na porção N-terminal e o sítio de clivagem da peptidase sinalagrupou 698 proteínas.Deste grupo, o Phobius(http://phobius.sbc.su.se), que prevê a topologia de domínios transmembranas a partir das sequencias primárias, indicou 260 sem domínios transmembranas.Outros dois algoritmos, big-PI predictor(http://mendel.imp.ac.at/gpi/gpi_server.html),capaz reconhecer marcas de de ancoras GPI (Glicosilfosfatidilinositol) e WoLF PSORT(http://www.genscript.com/psort/wolf_psort.html)capaz de identificar assinaturas para a localização em compartimentos subcelulares apontaram 236 proteínas sem ancoras GPI e 101 endereçadas ao meio extracelular. Como controle positivo, os mesmos algoritmos foram testados e predisseram corretamente 95 proteínas de leveduras Saccharomycetes encontradas nos bancos de dados públicos (NCBI e UNIProt) e anotadas como extracelulares. Como controle negativo foram preditas como intracelular 95 seqüências aleatórias do banco de dados da K. lactis. O grupo controle positivo e o grupo predito foram comparados pelo teste estatístico T2 de Hotelling. Não foram evidenciadas diferenças significativas entre os valores das médias dos grupos.A condição fisiológicana qual estas proteínas extracelulares são expressas foi analisada relacionando suas seqüências promotoras com os fatores transcricionais ortólogos da Saccharomyces cerevisiae. A metodologia aplicada foi o "Yeastract" (http://www.yeastract.com) que localiza sítios de ligação ao DNA dos fatores transcricionais de S. cerevisiaenas seqüências promotoras dos ORFs das proteínas preditas como extracelulares. A condição fisiológica que favorece a expressão para o meio extracelular foi obtida pela pesquisa dos termos descritos pelo "Gene Ontology"(http://www.geneontology.org). Os fatores transcricionais que mais se relacionam com as seqüências preditas foram aqueles associados com resposta a estresse. Também foi indicado que o estresse ácido e limitação de nitrogênio (aminoácidos) exercem influência na expressão das proteínas extracelulares.