Medicina Veterinária
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Item Caracterização de fatores interferentes na produção de bacteriocinas por Bactérias Ácido Láticas isoladas de leite cru e queijo(Universidade Federal de Viçosa, 2011-02-17) Perin, Luana Martins; Moreira, Maria Aparecida Scatamburlo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4797678J6; Pinto, Paulo Sérgio de Arruda; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4793537Y3; Nero, Luís Augusto; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763792E2; http://lattes.cnpq.br/1307285104457036; Franco, Bernadette Dora Gombossy de MeloBactérias ácido láticas (BAL) são constituintes naturais da microbiota do leite cru, exercendo importante papel na segurança alimentar, devido ação antimicrobiana sobre microrganismos deteriorantes e patógenos, como Listeria monocytogenes e Staphylococcus aureus. Várias espécies de BAL já foram isoladas e identificadas como produtoras de diversas bacteriocinas. Porém, pesquisas devem ser conduzidas a fim de otimizar a utilização e a produção dessas substâncias antimicrobianas, visando o controle de patógenos e deteriorantes. Considerando a viabilidade de aplicação das bacteriocinas em indústrias de alimentos, este trabalho teve como objetivo verificar a natureza protéica e a interferência de condições de incubação na produção de substâncias antimicrobianas por isolados de Bactérias Ácido Láticas (BAL) de leite cru e queijo. As substâncias antimicrobianas produzidas foram caracterizadas quanto à sensibilidade enzimática, atividade antimicrobiana contra diferentes cepas de Listeria spp., Staphylococcus spp. e BAL, e avaliadas quanto à interferência de oito variações de meios de cultura (MRS, MRS modificado - MRSm, M17, e BHI, adicionados ou não de solução de cisteína) e oito combinações de tempo e temperatura de incubação (25 e 35 °C por 12, 24, 48 e 72h). As substâncias antimicrobianas produzidas por 80 isolados de BAL apresentaram natureza protéica, as caracterizando como bacteriocinas. Lactococcus spp. foi o gênero que apresentou melhor desempenho de atividade antimicrobiana e Listeria spp. foi o gênero mais sensível. Os meios de cultura MRS e MRSm e a combinação de 25 °C por 24h, e a 35 °C por 12h de incubação, foram as condições que apresentaram melhor performance de atividade antimicrobiana. Assim, foi possível conhecer alguns aspectos relevantes em relação à produção de bacteriocinas por alguns gêneros de BAL, direcionando estudos complementares para sua futura aplicação em produtos lácteos.Item Diversidade molecular da microbiota lática bacteriocinogênica de leite de cabra e caracterização de seu potencial bioconservador para a produção de queijo Minas(Universidade Federal de Viçosa, 2014-12-05) Perin, Luana Martins; Nero, Luís Augusto; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763792E2; http://lattes.cnpq.br/1307285104457036; Carvalho, Antônio Fernandes de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781655T2; Todorov, Svetoslav Dimitrov; http://lattes.cnpq.br/8821952497465644; Bogsan, Cristina Stewart; http://lattes.cnpq.br/0407938414729011; Martins, Elaine Cristina Pereira deO leite de cabra cru é uma importante fonte de novos isolados de bactérias ácido láticas (BAL) bacteriocinogênicos. A constante demanda de consumidores por alimentos sem aditivos químicos justifica o estudo de alternativas para sua bioconservação. Este trabalho teve como objetivos isolar e identificar BAL bacteriocinogênicos presentes na microbiota autóctone do leite de cabra cru, caracterizar suas bacteriocinas produzidas, seu potencial de virulência e avaliar seu potencial bioconservador na produção de queijos Minas produzido com leite de cabra cru. Como aspecto adicional de segurança, aminas biogênicas (AB) presentes nos queijos produzidos foram quantificadas. BAL foram isoladas do leite de cabra cru usando meios de cultura seletivos e submetidas à avaliação de seu potencial bacteriocinogênico a partir de testes moleculares e fenotípicos usando como indicador Listeria monocytogenes ATCC 7644. O gene codificador de nisina dos isolados positivos foi submetido a sequenciamento para identificação de possíveis variações em sua composição de aminoácidos. Isolados caracterizados como bacteriocinogênicos foram identificados a partir do sequenciamento dos genes 16S rRNA e adicionalmente do gene pheS para identificação das espécies de Enterococcus. Esses isolados foram agrupados de acordo com sua similaridade genética por rep-PCR e a partir dos perfis gerados, alguns isolados foram selecionados e submetidos a testes fenotípicos e moleculares para identificação de seu potencial de virulência. O isolado Lactococcus lactis subsp. lactis GLc05 foi escolhido pelo seu interessante potencial bacteriocinogênico e ausência de fatores de virulência para produção de queijo Minas utilizando leite de cabra cru. A microbiota dos queijos com (A) e sem (B) adição de L. lactis subsp. lactis GLc05 foi analisada usando métodos cultura-dependentes (meios de cultura seletivos) e -independentes (rep-PCR e DGGE). A quantificação de AB nos queijos Minas foi realizada por HPLC. Produtores de bacteriocinas foram identificados como Lactococcus spp. (24) e Enterococcus spp. (33). Entre os isolados, 9 Lactococcus lactis foram identificados como produtores de uma nova variante de nisina ainda não descrita e com amplo espectro de ação. Testes de caracterização do potencial de virulência demonstraram a presença de genes relacionados a patogenicidade e expressão de alguns desses fatores em alguns isolados identificados como Lactococcus spp. Por outro lado, alguns isolados identificados como Enterococcus spp., usualmente considerados patógenos oportunistas, não apresentaram esses fatores. A análise da microbiota dos queijos A e B usando métodos cultura- dependentes e -independentes mostrou que L. lactis subsp. lactis GLc05 foi capaz de controlar a população de cocos coagulase-positivo e causar mudanças na microbiota autóctone em queijo Minas produzido com leite de cabra cru. Altas concentrações de AB foram encontradas em queijo Minas produzido com leite de cabra cru, revelando importância de garantir a qualidade higiênico-sanitária do leite utilizado, porém foram significativamente menores nos queijos Minas adicionados de L. lactis subsp. lactis GLc05. Os resultados indicam que este isolado pode ser utilizado para produção de queijos produzidos com leite cru, pois foi capaz de controlar populações de micro- organismos patogênicos e as concentrações de AB.