Medicina Veterinária
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Item Análise bioquímica e proteômica do plasma seminal equino e sua relação com a criopreservação do sêmen(Universidade Federal de Viçosa, 2015-07-31) Bezerra, Luciana de Lima; Guimarães, José Domingos; http://lattes.cnpq.br/1472287018323233Este trabalho foi realizado com intuito de relacionar os constituintes bioquímicos e proteômicos do plasma seminal de garanhões da raça Mangalarga Marchador com a criopreservação. Em ambos os estudos foram utilizados garanhões hígidos da raça Mangalarga Marchador, com idades entre quatro e 15 anos e peso entre 400 e 500 kg. As colheitas foram realizadas no período de junho a agosto de 2013, totalizando 77 amostras. No experimento 1, após as colheitas foram retirados 3 mL de sêmen para análises bioquímicas de cálcio, colesterol, glicose, magnésio, fósforo, proteína total, potássio e sódio. Em sequencia as amostras seminais foram diluídas na proporção 1:1 (sêmen/ diluente) e congeladas para realização dos testes de motilidade espermática total, vigor espermático, teste hiposmótico e teste supravital. Após o descongelamento, os ejaculados de cada animal foram separados em grupos de alta (> 40%) e baixa congelabilidade (< 40%). Não foram visualizadas diferenças nos parâmetros bioquímicos e seminais entre os animais (P>0,05), entretanto foram observadas diferenças na concentração de colesterol e glicose nos animais 1 e 3 (P<0,05), sendo a maior concentração no grupo de animais de baixa congelabilidade e correlação negativa entre o potássio e a motilidade constituintes espermática bioquímicos pós- do descongelamento. Concluiu-se plasma não seminal que os influenciam na congelabilidade seminal na raça Mangalarga Marchador. No experimento 2, após as análises físicas e morfológicas do sêmen, foram selecionados para o perfil proteômico, os plasmas seminais correspondente aos sêmen de maior e menor motilidade pós-descongelamento por animal. O perfil das proteínas foi avaliado pelo sistema SDS–PAGE e as proteínas identificadas por MALDI- TOF/ TOF, utilizando o software Mascot para a busca em banco de dados. O site do UniProt (SWISSPROT, NCBI, Equidae) foi consultado para identificação das proteínas e a validação dos resultados foi realizada pelo programa SCAFOLD. As amostras não validadas pelo SCAFOLD foram analisadas pelo programa flexAnalysis (BRUKER®) para identificação de espectros de MS2 identificados pelo software Mascot. Foi observado diferença significativa em relação a CRISP 3 no grupo de sêmen de baixa congelabilidade e não foram observadas diferenças entre a HSP 1, a calicreína e a motilidade pós- descongelamento entre os grupos de sêmen de alta e baixa congelabilidade . Conclui-se que a CRISP3 com baixa massa molecular (22- 30 kDa) pode ser utilizada como biomarcador de baixa congelabilidade e que a calicreína e a HSP1 não podem ser utilizadas como marcadores de congelabilidade na raça Mangalarga Marchador.Item Análise do órgão articulação na doença articular degenerativa em modelo experimental por ruptura do ligamento cruzado cranial em cães(Universidade Federal de Viçosa, 2017-07-19) Sepúlveda, Rodrigo Viana; Borges, Andréa Pacheco Batista; http://lattes.cnpq.br/4201407168845064A doença articular degenerativa (DAD) é uma doença crônica da cartilagem articular. Até hoje, nenhuma terapia é capaz de regenerar a cartilagem articular danificada e nem impedir totalmente a sua progressão. Posto isso, é necessário o conhecimento de seus vários aspectos patológicos. Portanto, o presente trabalho tem por objetivo avaliar macro e microscopicamente as alterações ocorridas no modelo de indução cirúrgica da DAD após a ruptura do ligamento cruzado cranial em cães. Foram utilizados seis cães, adultos, pesando entre 15 e 30 Kg. Os animais foram anestesiados e tiveram o ligamento cruzado cranial do joelho direito rompido. Após 60 dias, foi realizada a eutanásia. Foi feita a análise anatomopatológica dos tecidos articulares e após essa análise, amostras foram coletadas para a análise histológica. A análise anatomopatológica revelou fibrilações superficiais e focais de espessura parcial na cartilagem articular dos côndilos femorais e platô tibial. A membrana sinovial apresentou-se descolorada, espessada e com aumento da vascularização. Nenhuma lesão macroscópica visível foi percebida nos meniscos. Na análise histológica, todos os tecidos articulares apresentaram algum grau de lesão. A superfície articular apresentou fissuras restritas à zona superficial e ondulações na superfície cartilaginosa, perda celular na zona superficial com eventuais agrupamentos. Também foi visto a presença de lacunas vazias na zona superficial. Ocorreu perda global do conteúdo de proteoglicanos e colágeno até a zona média da cartilagem articular. Houve perda da continuidade ou duplicação da tidemark da cartilagem articular de forma multifocal e aumento da espessura da placa óssea subcondral. A membrana sinovial apresentou pequenas vilosidades de distribuição multifocal, aumento da espessura do revestimento e moderado infiltrado inflamatório. Os meniscos apresentaram perda moderada do arranjo tecidual com discreta perda tecidual, perda moderada do conteúdo de proteoglicanos e colágeno em ambos os meniscos. Portanto, foi possível observar que aos 60 dias pós-ruptura do ligamento cruzado cranial, um grau leve de DAD, sendo as lesões uniformes. Por fim, o modelo não é útil para que o estudo de lesões macroscópicas seja feito, porém, permite avaliar a ocorrência de lesões microscópicas nos componentes articulares utilizando a abordagem da articulação como um órgão.Item Arthrobotrys cladodes var macroides e Pochonia chlamydosporia como controladores biológicos de nematóides parasitos gastrintestinais de equinos(Universidade Federal de Viçosa, 2020-02-14) Ayupe, Tiago de Hollanda; Araújo, Jackson Victor deOs nematóides parasitas gastrintestinais são responsáveis por gerar perdas econômicas significativas para a equideocultura mundial. O surgimento de resistência aos anti-helmínticos tem se tornado frequente e o controle biológico através do uso de fungos nematófagos torna-se uma alternativa para auxiliar na profilaxia das helmintoses gastrintestinais de equinos. Neste trabalho foi avaliada a eficácia do fungo nematófago Arthrobotrys cladodes var. macroides (isolado CG719) em predar larvas infectantes (L3) de ciatostomíneos in vitro, bem como sua atividade predatória após a passagem pelo trato gastrointestinal de equinos (TGI). Os testes in vitro e após passagem pelo TGI apresentaram reduções (p <0,05) de 56,6% e 31,42% respectivamente de L3, confirmando a capacidade de A. cladodes em controlar L3 de ciatostomíneos e suportar a passagem pelo TGI. Esses resultados incentivaram a avaliação da eficácia do fungo A. cladodes em testes com equinos a campo. Nesse ensaio, o fungo foi utilizado em formulações à base de alginato de sódio fornecidas duas vezes por semana, durante 9 meses. Embora os resultados tenham mostrado redução na contagem de ovos por grama de fezes, bem como de larvas recuperadas de coproculturas e de pastagem, não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre o grupo controle e tratado. Isso demonstra que fatores externos, como pluviosidade, temperatura e umidade relativa podem ter afetado sua eficácia a campo. Nesse trabalho, também foi avaliada a eficácia do nematicida biológico Rizotec® formulado com clamidósporos do fungo nematófago Pochonia chlamydosporia (isolado Pc 10). Foram utilizadas diferentes doses de Rizotec® equivalentes a (1x10 5 , 2,5x10 5 , 5x10 5 , 7,5x10 5 e 1x10 6 ) clamidósporos. Após 7, 14 e 21 dias de interação, os ovos foram classificados quanto aos efeitos ovicidas tipos 1, 2 e 3. Somente as doses de 14,25 mg e 19,0 mg de Rizotec ® apresentaram diferenças (p<0,05) com relação ao efeito lítico tipo 3 com 21 dias de interação em relação ao grupo controle. Foi observada uma tendência de aumento nas percentagens (17,0%, 26,33%, 28,33%, 47,83% e 65,66%) de ovos com esse efeito ao se elevar a dose do produto. As curvas de regressão para as doses testadas mostraram uma tendência de aumento do efeito lítico tipo 3 com o aumento do tempo de interação. Os resultados apresentados neste trabalho confirmam a eficácia dos fungos Arthrobotrys cladodes var. macroides (isolado CG719) e Pochonia chlamydosporia (isolado Pc 10) no controle de formas infectantes e ovos de nematóides gastrintestinais de equinos in vitro. Palavras-chave: Ciatostomíneos. Controle. Equinos. Helmintos. Parascaris equorum.Item Ascaris suum: diagnóstico, controle alternativo e levantamento na microrregião de Ponte Nova - Minas Gerais(Universidade Federal de Viçosa, 2015-03-05) Fausto, Mariana Costa; Araújo, Jackson Victor de; http://lattes.cnpq.br/0445774769399383O setor suinícola brasileiro tem enfrentado nos últimos anos, barreiras para exportação da carne, principalmente relacionadas a questões sanitárias e ao bem-estar animal. Em relação às questões sanitárias, grande destaque tem sido dado às parasitoses intestinais causadas por helmintos e às falhas no processo de vermifugação decorrentes da resistência a antiparasitários. Portanto, é crescente a necessidade de se estudar o perfil epidemiológico dos parasitas que acometem os animais e a partir daí avaliar estratégias de controle alternativos e sustentáveis.O objetivo desse trabalho foi avaliar métodos alternativos de controle para Ascaris suum na produção de suínos. O trabalho foi dividido em quatro estudos, realizados em etapas distintas. No primeiro objetivou-se avaliar a epidemiologia do A. suum em rebanhos suinícolas localizado na micro-região de Ponte Nova, na Zona da Mata de Minas Gerais - Brasil. No segundo ensaio, foi avaliada a constituição fitoquímica do extrato aquoso produzido a partir das folhas da planta Piptadenia gonoacantha, sua açãosobre helmintos Panagrellussp. e sobre os parâmetros bioquímicos, hematológicos e histológicos de camundongos tratados por 10 dias consecutivos com diferentes doses do extrato.No terceiro, foram avaliadas soluções saturadas preparadas com quatro sais diferentes (NaCl, MgSO 4 , NaNO 3, ZnSO 4 ) e uma solução de açúcar, na realização da técnica de OPG (técnica de McMaster) em fezes de suínos, contaminadas com ovos de A. suum. E por último avaliou-se a atividade ovicida in vitro de diferentes concentrações de clamidósporos e de diferentes isolados fúngicos de Pochonia chlamydosporia(VC1 e VC4) sobre ovos de A. suum.Para o estudo epidemiológico,foram avaliados 108.073 fígados de suínos, abatidos durante o período de janeiro de 2011 a junho de 2013, quanto à presença de lesões hepáticas decorrentes da migração larval deA. suum, sendo9,75% (10.535 ixanimais) positivos.O levantamento epidemiológico demonstrou ineficiência dos protocolos de vermifugação utilizados e necessidade do desenvolvimento de xestratégiasalternativas de controle para este parasita na produção. No estudo com a planta, a análise fitoquímica revelou a presença de flavonóides, compostos fenólicos, taninos, antraquinona, saponinas, cumarinas, heterosídeos e cardiotônicos. A atividade anti-helmíntica in vitro de diferentes preparações do extrato aquoso foi demonstrada e sua alta eficácia justifica a sua utilização no controle de helmintos gastrointestinais de animais. De acordo com os parâmetros avaliados, a mesma se mostrou segura e com baixa toxicidade, possibilitando o avanço para a realização de estudos clínicos, a fim de comprovar possíveis benefícios em um programa de controle alternativo e sustentável para as parasitoses que acomentem os suínos.No terceiro trabalho, as cinco soluções estudadas foram capazes de flutuar ovos, sendo que a solução de nitrato de sódio (densidade 1.20) foi mais eficiente do que as demais (1533,33), e as soluções de açúcar e sulfato de zinco foram as que recuperaram menor quantidade de ovos. Na utilização de clamidósporos do P. chlamydosporia (VC1 e VC4) para a destruição de ovos de A. suum, in vitro, o maior efeito sobre os ovos, ou seja, efeito tipo 2, ocorreu na concentração de 1.000 clamidósporos por placa, apresentando 20.0% (VC4) e 7,33% (VC1) de ovos danificados.Estratégias alternativas e promissoras existem para detecção e controle de A. suum na produção de suínos. Contudo, mais testes devem ser realizados com a finalidade de aprimorar tais alternativas para que as mesmas possam ser utilizadas a campo, de maneira segura, dentro de um sistema intensivo de produção de suínos.Item Aspectos do parasitismo por carrapatos: hospedeiros diversos, patógenos associados, alterações histopatológicas e oxidativas no local de fixação(Universidade Federal de Viçosa, 2023-02-24) Nogueira, Bárbara Cristina Félix; Campos, Artur Kanadani; http://lattes.cnpq.br/0801132406656596Os carrapatos apresentam uma infinidade de hospedeiros, no entanto a maioria dos estudos para desvendar as relações desse parasitismo se concentra em hospedeiros primários e de importância econômica. Mesmo assim, alguns aspectos ainda permanecem pouco abordados tanto para estes hospedeiros como para hospedeiros secundários e acidentais. Diante do exposto, esta tese foi organizada em três capítulos em formato de artigo científico. No primeiro capítulo é apresentada uma avaliação das alterações histopatológicas e as respostas do perfil oxidativo de equinos no local de fixação de A. sculptum. Nele foi observado aumento da celularidade, infiltrado inflamatório, mastócitos, núcleos picnóticos e alterações nos componentes fibrosos da matriz, o nível da enzima antioxidante SOD foi maior em Breton Postier, o que pode significar que esses animais tiveram maior atividade enzimática e, consequentemente, menos dano tecidual, enquanto a GST caiu nos locais de fixação em comparação ao controle, o que pode indicar que os animais estavam em estado de estresse oxidativo significativo ou a possível ocorrência de sequestro enzimático por carrapatos, além disso, foi observada correlação negativa entre a infestação por carrapatos e a resposta inflamatória indicando que animais com maior resposta inflamatória tendem a ter menos infestação por carrapatos. No segundo capítulo foi feita uma avaliação da diversidade de ixodídeos e detecção Rickettsia spp. em carrapatos que parasitam aves no bioma Mata Atlântica. Nele foram capturadas 773 aves, das quais 130 estavam parasitadas por carrapatos 479 carrapatos das espécies Amblyomma longirostre, Amblyomma calcaratum, Amblyomma varium, Amblyomma sculptum e larvas de Amblyomma spp., foi observada distribuição sazonal dos estágios de vida ao longo do ano e foram encontradas correlações negativas significativas entre temperatura e carrapatos e temperatura e aves infestadas. Foram positivas para Rickettsia spp. 43 amostras de carrapatos e a análise de sequência indicou alta identidade de nucleotídeos com Rickettsia rhipicephali, R. massiliae, R. africae e R. honei marmionii, o que chamou a atenção devido ao potencial de dispersão de carrapatos pelas aves somado à agressividade espécies do gênero Amblyomma e o potencial zoonótico de algumas espécies de Rickettsia. No terceiro capítulo foi realizado um compilado de dados publicados que relatam o parasitismo de carrapatos em humanos nos diferentes biomas do Brasil e sua relação com as alterações ambientais. Foram incluídos estudos publicados entre 1909 e 2022, que apresentavam nove espécies da família Argasidae e 32 espécies da família Ixodidae parasitando humanos nos seis biomas do território brasileiro. A espécie com maior número de registros de parasitismo humano foi Amblyomma sculptum, seguido por Amblyomma coelebs, Amblyomma cajennense sensu stricto e Amblyomma brasiliense. Além disso foram encontrados registros para Amblyomma ovale, vetor da Rickettsia parkeri no país, e A. sculptum e A. aureolatum que são as principais espécies que atuam como vetores de Rickettsia rickettsii, o que é bastante preocupante considerando que a ampla distribuição das espécies e fases de vida mais freqüentemente mencionados no parasitismo (ou seja, ninfas e adultos) são os que favorecem a transmissão do patógeno. Palavras-chave: Doenças transmitidas por carrapatos. Ixodidae. Argasidae. Parasitologia.Item Aspectos epidemiológicos de enfermidades causadas por vírus e protozoários de animais de produção no Brasil e Moçambique(Universidade Federal de Viçosa, 2022-07-28) Mataca, Azido Ribeiro; Silva Junior, Abelardo; http://lattes.cnpq.br/3543811329998999Os vírus da artrite-encefalite caprina (CAEV) e língua azul (BTV) e os parasitas Neospora caninum e Toxoplasma gondii podem ser importantes agentes infecciosos para caprinos leiteiros. Além disso, o herpesvírus bovino 1 (BHV-1) e o vírus da estomatite vesicular (VSV) também podem ocasionalmente infectar caprinos e causar problemas na produção. Ainda, a Peste Suína Africana (PSA) é uma doença infecciosa transfronteiriça que afeta de forma insidiosa os suínos domésticos e causa grandes prejuízos para a indústria suinícola. Este estudo objetivou avaliar a prevalência, os fatores de risco para infecção viral (CAEV, BTV, BHV-1 e VSV) e os protozoários (T. gondii e N. caninum) (capítulo 1); bem como a disposição natural dos grupos soropositivos quanto à sua similaridade multivariada em fazendas de caprinos leiteiros comerciais na Zona da Mata de Minas Gerais, Brasil e a distribuição espacial, temporal e a tendência temporal da PSA em Moçambique (capítulo 2). A prevalência média de 413 amostras de soro encontrada no capítulo 1 foi de 65% (269/413) e 47,1% (195/413) para os parasitas N. caninum e T. gondii, e 35% (145/413) e 24% (99/413) para BTV e CAEV, respectivamente. Todas as amostras foram soronegativas para BHV- 1 e VSV. Fatores de risco significativos foram encontrados apenas na infecção por T. gondii e CAEV. As fazendas com mais casos positivos de CAEV, N. caninum e T. gondii estão conectadas por fronteiras, demonstrando possível interação espacial da soropositividade dos rebanhos. No capítulo II foi demostrado que Moçambique, entre os 21 anos de estudos, notificou 28.624 casos de PSA distribuídos para as três regiões do país, com destaque para a região norte com 64,9% do total de casos. A maior incidência relativa (40,8%), foi demostrada na província de Cabo Delgado, e a tendência temporal demostrou que a maioria das províncias têm tendência decrescente de casos. Espera-se alertar aos programas oficiais de vigilância, a importância de controlar essas infecções virais e protozoárias na região de produção de leite caprino no Brasil, mas também, para a PSA em Moçambique, com atuação permanente entre as fronteiras das províncias e países, de forma a evitar a propagação viral para regiões vulneráveis. Palavras-chave: Risco epidemiológico. Vigilância geográfica. Defesa sanitária animal. Cluster. Vírus. Protozoários.Item Aspectos histomorfométricos, histoquímicos e ultraestruturais do intestino grosso de capivaras (Hydrochoerus sp.)(Universidade Federal de Viçosa, 2017-07-27) Carrascal Velásquez, Juan Carlos; Fonseca, Cláudio CésarEsta pesquisa teve como objetivo geral descrever os aspectos histológicos e histoquímicos do intestino grosso de Hydrochoerus hydrochaeris (Linnaeus, 1766) e Hydrochoerus isthmius (Goldman, 1912) adultas, bem como as características ultraestruturais dos grânulos secretores das células argirófilas e argentafins no intestino grosso de H. hydrochaeris. Para este fim, foram coletados vários fragmentos do ceco (9), cólon (9) e reto (3) de cada animal, fixados por 24h em líquido de Bouin, para coloração pelas técnicas de Hematoxilina-Eosina (H-E), Acido Periódico de Schiff (P.A.S.), Grimelius, em formol 10% tamponado para técnica de Masson-Fontana modificada, e em glutaraldeído 5% em tampão fosfato de sódio 0,1 M pH 7,3, para as análises ultraestruturais dos grânulos citoplasmáticos das células endócrinas. Histologicamente, o intestino grosso das duas espécies de capivaras é semelhante ao da maioria dos mamíferos quanto à estrutura da sua parede sendo constituída por quatro camadas, mucosa, submucosa, muscular e serosa. A mucosa é revestida por epitélio simples cilíndrico com células caliciformes PAS-positivas, que se apresentam em maior quantidade no reto. A presença de pregas longitudinais também foi observada nos três segmentos. A camada submucosa nas duas espécies é constituída por tecido conjuntivo frouxo com vasos sanguíneos de vários calibres, nódulos linfoides isolados ou associados e gânglios nervosos. A muscular constituída por fibras musculares lisas é organizada em duas subcamadas, a circular interna e a longitudinal externa, sendo que entre as duas se evidenciaram gânglios nervosos desenvolvidos. Esta camada aumenta sua espessura em direção ao reto. A camada serosa é constituída de uma delgada camada de tecido conjuntivo frouxo, revestida por mesotélio. Histoquimicamente foram identificadas células endócrinas argirófilas e argentafins, as quais foram do ―tipo aberto‖ e do ―tipo fechado‖ estando presentes em todos os segmentos do intestino grosso das duas espécies. Ultraestruturalmente os grânulos de secreção analisados nas células endócrinas evidenciaram formas e tamanhos variados, sendo classificados em maduros e imaturos dependendo da sua eletrodensidade. Por meio do programa Image-Pro®Plus (versão 7.0), foram obtidas as espessuras das camadas histológicas constatando que houve diferença significativa entre as duas espécies. Também foi feita a quantificação dos gânglios submucosos e mioentéricos por unidade de área (mm 2 ) e o número de células endócrinas argentafins e argirófilas das duas espécies por unidade de área (mm 2 ) da mucosa A morfometria dos grânulos de secreção para sua classificação também foi obtida.Item Aspectos seminais de suínos da raça Piau: sazonalidade e criopreservação(Universidade Federal de Viçosa, 2018-03-21) Shiomi, Hugo Hideki; Guimarães, José Domingos; http://lattes.cnpq.br/8762777922179358Foram realizados dois diferentes experimentos com o sêmen de suínos da raça Piau: o primeiro referiu-se à criopreservação seminal e o segundo, ao efeito da sazonalidade no perfil proteômico do plasma seminal e nas características físicas e morfológicas do sêmen. No primeiro experimento, foram utilizadas vinte coletas de cinco machos. O extensor de congelamento foi baseado em extensor de gema de lactose e ovo, adicionado a 2 % de glicerol, 3 % de dimetilacetamida. A adição de conjugados de colesterol carregados com ciclodextrina foi realizada após centrifugação, quando o sêmen foi diluído com o extensor de resfriamento. Quatro grupos foram submetidos ao seguinte tratamento: sem adição (grupo 1); 1,5 mg de colesterol carregado com ciclodextrina / 120x10 6 espermatozoides (grupo 2); 1,5 mg de colestanol carregado com ciclodextrina / 120x10 6 espermatozoides (grupo 3); 1,5 mg de esperma desmosterol carregado com ciclodextrina / 120x10 6 espermatozoides (grupo 4). Para analisar a qualidade pós-descongelamento, foram verificadas a motilidade e a morfologia espermática. Além disso, para verificar a viabilidade dos espermatozoides, foram utilizados o teste hiposmótico, a coloração supravital e o teste fluorescente. Os valores médios registrados para a motilidade espermática total imediatamente após a descongelação foram de 54,5 ± 5,8, 55,5 ± 5,3, 53,7 ± 6,7 e 52,5 ± 6,6 %, respectivamente, para os grupos de um a quatro, sem diferença entre eles (p> 0,05). Em relação ao teste fluorescente, os resultados foram 28,3 ± 13,2, 26,9 ± 12,2, 22,2 ± 11,4 e 32,0 ± 15,3 %, respectivamente, para os grupos de um a quatro, também sem diferença entre os grupos (p> 0,05). Da mesma forma, testes complementares para avaliação da integridade e funcionalidade da membrana plasmática não mostraram diferença entre os tratamentos (p> 0,05). Em conclusão, o uso de conjugados de colesterol carregados com ciclodextrina adicionados à membrana plasmática do esperma não demonstrou qualquer efeito aditivo no aumento e / ou manutenção da motilidade do espermatozoide. No experimento 2, foram utilizados dez varrões da raça Piau, aprovados previamente como férteis por exame andrológico e as coletas de sêmen foram realizadas mensalmente para análise, durante o período de um ano, avaliando motilidade, vigor, morfologia, concentração/ mL e concentração total. O perfil protéico do plasma seminal foi obtido por eletroforese bidimensional, as análises de imagem dos géis foram realizadas pelo programa ImageMaster 2D Platinum 6,0 (GE Healtcare®) e a identificação das proteínas foi por espectrometria de massas usando MALDI-TOF/TOF, com o software Mascot Daemon para a busca em banco de dados. A validação das proteínas identificadas entre os tratamentos foi realizada pelo programa SCAFOLD (95 %). No presente estudo, observou-se que as estações climáticas do ano influenciaram a qualidade do sêmen, e que no inverno houve maior alteração na morfologia espermática em relação ao verão, com mais defeitos espermáticos maiores e totais (p<0,05), porém esses valores ainda se mostram dentro dos padrões de qualidade seminal preconizados para a espécie. Em relação à motilidade espermática progressiva, vigor e concentração espermática, não sofreram influência das estações climáticas do ano (p>0,05). Importantes proteínas do plasma seminal de varrões da raça Piau foram identificadas e validadas, destacando-se as espermadesinas. Foram reportadas correlações significativas entre as características seminais e alguns spots. Ao longo das estações do ano, dez spots foram observados como diferencialmente abundantes.Item Aspectos toxicológicos do inseticida Dimilin ® : efeitos no comportamento, na hematologia e na morfologia testicular do lambari Astyanax bimaculatus(Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-31) Goulart, Amara Manarino Andrade; Benjamin, Laércio dos Anjos; http://lattes.cnpq.br/7459332093923265Para investigar impactos dos agrotóxicos em organismos vivos, são utilizados testes padronizados de toxicidade que ajudam prevenir ocorrências de alterações de alta relevância ecológica nessas populações. Com isso, objetivou-se determinar a CL 50 , analisar as alterações hematológicas e morfológicas, e observar aspectos comportamentais do lambari Astyanax bimaculatus provocadas pela exposição ao Dimilin ® , além de avaliar a possível capacidade de recuperação após a transferência dos peixes para aquários com água limpa. Para a CL 50 -48h, os peixes foram divididos em grupo controle, sem tóxico, e grupos com concentrações de 5, 15, 45, 135 e 405 mg/L do tóxico com três repetições por concentração, contendo cinco peixes cada. O teste de toxicidade de 96h, utilizou grupo controle e três grupos com concentrações de 3, 6 e 12 mg/L de Dimilin ® . Após exposição aguda, foi avaliada a capacidade de recuperação a partir da transferência dos peixes para aquários com água sem contaminante. Testículos e sangue de seis animais de cada grupo foram coletados 96h após exposição ao tóxico e sete dias após a transferência de ambientes e processados para estudos histológicos e hematológicos de rotina. A CL 50 -48h foi de 97,1mg/L, com intervalo de confiança de 63,8 a 147,6 mg/L (P<0,05) (±22,4ºC). O parâmetro nado lento foi o evento de comportamento mais observado para todos os grupos. Entre os comportamentos relacionados ao estresse, pulando, nado errático, deitado no fundo e nado na superfície só foram observados nos grupos expostos ao Dimilin ® . As alterações observadas nas taxas de hematócrito mostram condição anêmica dos peixes. Observou-se diminuição de neutrófilos e eosinófilos e aumento de linfócitos e monócitos nos grupos expostos quando comparados ao grupo controle. A avaliação das respostas metabólicas ao se comparar os resultados do hematócrito do A. bimaculatus no período de desintoxicação de sete dias com a exposição por 96h, revelou que estes foram recuperados, ocorrendo a desintoxicação dos organismos. Observou-se diminuição no diâmetro médio das células espermatogênicas no experimento de 96h, com diferença (P<0,05) para os núcleos de espermatogônia B, espermatócito I e espermatócito II, sendo esta mais marcante entre controle e maior concentração (12 mg/L). Foram observadas diminuição no diâmetro médio com diferenças (P<0,05), para cistos de espermatócito I, cistos de espermatócito II e cistos de espermátide, sendo também a diferença mais marcante entre o controle e a concentração 12 mg/L. Quando comparados o tempo de exposição de 96h de Dimilin ® com o tempo de desintoxicação de sete dias, os diâmetros médios dos núcleos de espermatócitos I e II de A. bimaculatus apresentaram aumento com diferenças (P<0,05) no período de sete dias, quando comparados dentro das mesmas concentrações nos diferentes tempos, assinalando uma melhora nos valores dos núcleos com sete dias, indicando recuperação nos parâmetros avaliados. O A. bimaculatus pode ser classificado como espécie sensível ao Dimilin ® , uma vez que a exposição ao produto nas concentrações utilizadas alterou o padrão tecidual dos testículos. O período de desintoxicação sete dias em água limpa após exposição aguda ao Dimilin ® em concentrações abaixo de 12mg/L foi suficiente para recuperação das alterações hematológicas e testiculares causadas no lambari, demonstrando assim a capacidade de recuperação, indicando a plasticidade que os peixes apresentam. Palavras-chave: Peixes. Efeitos dos inseticidas. Toxicologia ambiental. Diflubenzuron. Inseticida.Item Associação dos fungos Monacrosporium sinense e Pochonia chlamydosporia no controle biológico de nematoides gastrintestinais de bovinos(Universidade Federal de Viçosa, 2021-07-21) Oliveira, Isabela de Castro; Oliveira, Isabela de Castro; http://lattes.cnpq.br/6339726237025753As infecções por nematoides são uma importante restrição à produção eficiente de ruminantes criados em pastagem no Brasil e no mundo. O presente estudo descreve sobre os fungos Monacrosporium sinense (SF53) e Pochonia chlamydosporia (VC4) e seu uso associado no controle de nematoides gastrintestinais de bovinos. As etapas dos estudos in vitro envolveram observação dos índices de velocidade de crescimento micelial (IVCM) de cada fungo em três meios de cultura, seis temperaturas e sete variações de pH; a compatibilidade entre estes isolados; microscopia eletrônica e óptica de suas estruturas e interações com nematoides e suas atividades nematicidas conjuntas e isoladas sobre larvas infectantes (L3) de bovinos. A etapa do estudo in vivo avaliou os efeitos da administração oral de péletes contendo a combinação fúngica no controle biológico de L3 de nematoides parasitas gastrintestinais de bovinos criados em pastagens. A compatibilidade entre os isolados SF53 e VC4 foi confirmada pelos testes de confrontação direta, antibiose e compostos voláteis. Além disso, a avaliação nematicida in vitro mostrou que a melhor eficácia foi quando os dois isolados foram usados em conjunto, com redução de 98,90% no número de L3 de nematoides de bovinos. A espécie P. chlamydosporia apresentou a maior taxa de crescimento em meio ágar água a 20°C, enquanto M. sinense apresentou um crescimento numericamente melhor a 30°C. Os fungos não cresceram a 35 ou 40°C durante os seis dias de observação. Surpreendentemente, o crescimento micelial de ambos os isolados inibidos na temperatura de 35°C por 6 dias, recomeçaram seu crescimento quando a temperatura foi reduzida para 25°C. Já a temperatura de 40°C foi prejudicial para o desenvolvimento de ambos os fungos no laboratório. A observação do pH foi importante para mostrar que as variações de pH no trato gastrointestinal dos bovinos não serão prejudiciais aos fungos, uma vez que oferecer formulações orais aos animais é a forma mais prática de dispersar fungos nas fezes. A microscopia eletrônica e óptica mostrou as estruturas fúngicas que beneficiam seu uso no controle biológico de nematoides e interações com larvas infectantes de helmintos. Larvas de nematoides mantidas pelo micélio de P. chlamydosporia confirmam sua capacidade de predar os estágios larvais, apesar de ser um fungo classificado no grupo “ovicida”. Na avaliação a campo, a recuperação de L3 da pastagem do grupo tratado com a combinação fúngica foi 91,7% e 86,4% menor doque na pastagem do grupo controle, respectivamente para amostras coletadas a 20 cm e 40 cm das fezes. Os valores de ovos por grama de fezes (OPG) nos meses de maio de 2019 e janeiro de 2020 foram menores (p≤0.05) no grupo tratado. Portanto, os fungos M. sinense e P. chlamydosporia são promissores no controle de larvas infectantes de nematoides gastrintestinais de bovinos. Palavras-chave: Agentes biocontroladores. Compatibilidade. Crescimento micelial. Fungos nematófagos. Helmintos. Parasitas. Pastagem. Predadores. Ruminantes. Verminoses.Item Association of sperm oxidative stress, proteomics and fatty acid profiles in nellore bulls at sexual rest(Universidade Federal de Viçosa, 2023-03-31) Ramírez López, Camilo José; Guimarães, Simone Eliza Facioni; http://lattes.cnpq.br/2019925307607771Association of sperm oxidative stress, proteomics and fatty acid profiles in nellore bulls at sexual rest. Adviser: Simone Eliza Facioni Guimarães. This study was carried out with the objective of determining the effect of sexual rest on the oxidative status of spermatozoa from adult Nellore bulls and its effect on the fatty acid composition and protein profile. Six bulls were used, which were submitted to Breeding Soundness Evaluation and consecutive semen collection by the electroejaculation method. For each semen collection, the physical and morphological characteristics of the ejaculates were evaluated using conventional optical microscopy and phase contrast microscopy. After analyzing the semen qualitative parameters, the first and last ejaculate of each were centrifuged to separate the spermatozoa from the seminal plasma. From sperm aliquots, the enzymatic activity of Super Oxido Dismutase, Catalase and Glutathione S-Transferase was determined by colorimetric methods. The markers of lipid peroxidation, malondialdehyde and nitric oxide were also determined. Using gas chromatography, the fatty acids of sperm from the first and last ejaculate were identified. For proteomic analysis, total sperm proteins were extracted and precipitated in a 4% CHAPS solution, then quantified by the Bradford method and subsequently analyzed by monodimensional short-run electrophoresis and mass spectrometry (LC-MS/MS). Proteins were identified using PEAKS software version 7.0. Proteins were functionally classified by the RPSBLAST tool of BLAST version 2.13.0 into categories from the KOG database. For the label-free quantitative proteomics analysis, proteins identified in at least three technical replicates of each group with a fold-change greater than 1.5 times were included. Data were analyzed using GraphPad Prisma software version 9.1. Four semen collections were necessary so that the bulls at sexual rest presented sperm parameters compatible with reproductive fitness. Differences (p<0.05) were observed between all physical and morphological characteristics of the first and last ejaculate. A total of 974 proteins were identified, of which 735 were common between the two groups and 123 and 116 proteins were unique to spermatozoa from the first and last ejaculate, respectively. Functional classification analysis revealed that KOG categories with the highest number of classified proteins were Posttranslational modification, protein turnover, chaperones and Cytoskeleton and Signal transduction mechanisms. The protein abundance profile showed that 6 proteins were differentially abundant in spermatozoa from the first ejaculate and 30 proteins weredifferentially abundant in spermatozoa from the last ejaculate. In addition, gas chromatography analysis allowed the identification of 19 fatty acids, 47.3% of the saturated type and 52.7% of the unsaturated type. The C12:0 and C18:0 fatty acids showed difference between the two groups, being more abundant in the spermatozoa of the last ejaculate. The results indicate that oxidative stress may be related to sperm characteristics displayed by bulls at sexual rest, since the accumulation of by-products of lipid peroxidation can cause alterations in the metabolic pathways used by spermatozoa to generate energy used for motility and alter fluidity. of the membrane causing sperm abnormalities. Keywords: Bovine. Semen. Antioxidants. Lipids. Proteins.Item Avaliação clínica e laboratorial comparativa entre diferentes modalidades de reposição hidroeletrolítica em equinos desidratados experimentalmente(Universidade Federal de Viçosa, 2018-08-10) Dias, Domingos Cachineiro Rodrigues; Filho, José Dantas Ribeiro; http://lattes.cnpq.br/3241849111233015O objetivo do presente estudo foi realizar a comparação clínica, por meio da utilização de parâmetros do exame físico e de exames laboratoriais, entre os efeitos de três modalidades de terapias hidroeletrolíticas, uma hipotônica (SeHIPO) e uma isotônica (SeISO), ambas por via enteral em fluxo contínuo (HETfc), e outra com solução de ringer lactato por via intravenosa (RL IV), na taxa de infusão de 15 ml/kg/h administradas simultaneamente em tempo real por 8 horas num delineamento crossover 6X3 em equinos desidratados experimentalmente. Para tanto, foram utilizadas 6 éguas adultas da raça Brasileiro de Hipismo que foram submetidas a um protocolo experimental de desidratação (PD) constituído de 36 horas de jejum hídrico e alimentar, associado a duas aplicações de 1 mg/kg do diurético furosemida sendo posteriormente tratadas de acordo com o delineamento experimental proposto. Foram determinados os parâmetros do exame físico, assim como colhidas amostras de sangue, fezes e urina para análises laboratoriais imediatamente antes do PD (T -36), assim como imediatamente antes do início dos tratamentos (T0), além de 2 (T2), 4 (T4), 6 (T6) e 8 (T8) horas de tratamento. Os resultados obtidos demonstraram que, apesar da terapia RL IV ser tradicionalmente considerada a mais eficaz como reposição hidroeletrolítica em equinos, ambos os tratamentos HETfc demonstraram a mesma eficácia na reversão dos efeitos ocasionados pelo PD, ainda que para alguns marcadores da volemia, tais como o Volume Globular (VG), Proteínas Plasmáticas Totais (PPT) e porcentagem de Volume Plasmático (%VP) tenham sido relativamente mais lentos. Porém, para os demais marcadores do exame físico e laboratoriais dos equilíbrios hidroeletrolíticos e ácido base a eficácia entre as três terapias estudada foi equivalente, tendo as terapias HETfc demonstrado maior efeito na promoção da umidade das fezes, na promoção e manutenção dos níveis de glicemia, além do cálcio e do magnésio sérico, sem, no entanto, ter determinado poliuria e natriurese como observado no tratamento RL IV. Entre as terapias HET, a SeISO apresentou diferenças significativas quando comparada à SeHIPO, tendo demostrado maiores valores de Cloreto Sérico com consequentes menores valores de Diferença de Íons Fortes (DIF), além de maiores valores de Glicemia e Glicosúria, sem ter, no entanto, determinado quaisquer tipos de efeitos adversos. Portanto, a eficiência das terapias HETfc foi comprovada sem a ocorrência de complicações, tais como desequilíbrios eletrolíticos e ácido-base, nem distensão e desconforto abdominal, ainda que tenham gerado maior aumento do contorno abdominal. As observações clínicas do presente estudo comprovam a eficácia das terapias HETfc ao serem comparadas ao tratamento RL IV e justificam a indicação e utilização dessas modalidades terapêuticas em equinos na reposição hidroeletrolíticas para essa espécie.Item Avaliação clínica e laboratorial em éguas Mangalarga Marchador durante o período de transição mantidas à pasto(Universidade Federal de Viçosa, 2018-02-26) Silva, Micheline Ozana da; Ribeiro Filho, José Dantas; http://lattes.cnpq.br/8051186247907569O período de transição em éguas compreende o final da gestação, parto e início da lactação. Nesta fase as adaptações no organismo da égua são intensas e estão associadas com um estado metabólico alterado quando comparado com o período não-gestacional. O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do período de transição sobre parâmetros clínicos e laboratoriais em éguas da raça Mangalarga Marchador. Foram utilizadas 48 éguas, distribuídas em dois grupos: O grupo em manutenção (GM), formado por éguas não prenhes, e um grupo experimental, chamado de grupo de transição (GT), composto por éguas gestantes e que após o parto passaram a ser lactantes. As avaliações foram realizadas nos seguintes tempos: T-60 (sessenta dias antes do parto), T-30 (trinta dias antes do parto), T-15 (quinze dias antes do parto), T0 (primeiras seis horas após o parto), T+15 (quinze dias após o parto), T+30 (trinta dias após o parto) e T+60 (sessenta dias após o parto). As éguas do GM foram avaliadas apenas no T-60. Todos os animais foram submetidos a avaliações clínicas: peso corporal, temperatura retal, coloração da mucosa, tempo de enchimento capilar, porcentagem de gordura e massa livre de gordura, exceto durante o parto; análises hematológicas: eritrograma, leucograma (total e diferencial) e contagem de plaquetas; e as análises bioquímicas: proteína sérica, albumina, globulina, ferro, fibrinogênio, colesterol total, triglicerídeos, ácidos graxos não-esterificados, glicose, lactato, cálcio total, fósforo, magnésio, sódio, potássio, cloreto, ácido úrico, creatinina, ureia, gamaglutamiltransferase, aspartatoamiltransferase, fosfatase alcalina e creatina quinase. Os resultados foram submetidos a tratamento estatístico que demonstrou maior temperatura retal nos tempos T+15, T+30 e T+60 do que nos T-60, T-30 e T-15. O peso corporal e a massa livre de gordura diferiu (P < 0,05) entre as éguas em manutenção e as do período de transição. No GT houve uma redução progressiva de ambas as variáveis (P < 0,05). A porcentagem de gordura foi menor nas éguas em manutenção. Houve diferença entre os grupos (P < 0,05) na quantidade de colesterol, triglicerídeos, ácidos graxos não-esterificados, glicose e lactato. O GT apresentou menor (P < 0,05) concentração de hemácias, hematócritos e hemoglobina do que no GM. O GM apresentou menores valores de volume corpuscular médio e de distribuição do diâmetro das hemácias com coeficiente de variação e maiores valores da concentração de hemoglobina corpuscular média. Não ocorreu diferença (P > 0,05) nos valores de hemoglobina corpuscular média, leucócitos global, neutrófilos segmentados e bastonetes, e ferro. As plaquetas diferiram apenas no GT (T-60) e as globulinas no GT (T0 e T+15). Houve diferença entre grupos (P < 0,05) nos valores de monócitos, eosinófilos, linfócitos, proteínas totais, fibrinogênio e albumina. Houve diferença (P < 0,05) entre os grupos GM e GT e entre os tempos avaliados nas quantidades de cálcio, magnésio, sódio, potássio, creatinina, ureia, fosfatase alcalina e creatina quinase. Já o cloreto e o fósforo não diferiram (P > 0,05) entre as éguas em manutenção e as em transição, assim como as concentrações enzimáticas de gamaglutamiltransferase e aspartatoaminotransferase. O ácido úrico também diferiu entre os grupos (P > 0,05), e GT apresentou diferença ao longo dos tempos. O período de transição exerce forte influência na condição corporal e nos elementos presentes no sangue das éguas evidenciando a demanda metabólica da égua e do feto. Muitas das adaptações são fisiológicas e decorrem de mecanismos de proteção do organismo materno para garantir que esta possa suprir as necessidades impostas pelo período. É possível monitorar a saúde da égua bem como a do feto a partir do conhecimento e avaliação do perfil metabólico de éguas submetidas ao mesmo manejo.Item Avaliação de dados morfométricos em corações suínos submetidos a diferentes protocolos de desidratação, visando técnica de plastinação com silicone(Universidade Federal de Viçosa, 2018-07-26) Santana, Marcelo Lopes de; Paula, Tarcízio Antônio Rêgo de; http://lattes.cnpq.br/2310315050141152A plastinação representa uma alternativa viável para conservação de peças anatômicas reduzindo o uso do formol na sua manutenção. Além do uso do formol, a etapa de desidratação utiliza grandes montantes de acetona, a qual deve ser racionalizada evitando seus efeitos danosos. O objetivo do trabalho foi avaliar o comprometimento da qualidade final de corações suínos em diferentes protocolos de desidratação visando a redução do uso da acetona. Foram utilizados 18 corações suínos, onde as etapas de fixação, impregnação e de cura foram experimentalmente padronizadas. Na etapa de desidratação foram utilizadas as proporções de volume 5:1; 7,5:1 e 10:1 de acetona em relação ao peso da peça anatômica como grupos de tratamento, respectivamente T1, T2 e T3, os quais foram submetidos ainda a duas condições de temperatura: temperatura ambiente (Grupo G1) e temperatura de freezer (Grupo G2). Foram realizadas as mensurações do perímetro; dos comprimentos esquerdo e direito; do peso; do volume, e calculados seus percentuais de retração tecidual separadamente em cada etapa e total ao final da plastinação. Em cada tratamento as peças foram submetidas a dois banhos de acetona com consumo médio de acetona de 3,7, 5,1 e 8,1 litros nos T1, T2 e T3 respectivamente. A desidratação foi mais rápida no grupo que utilizou a temperatura ambiente e o grau de desidratação foi maior nos tratamentos que utilizaram maiores proporções de acetona. A estabilização do grau de desidratação em 10 dias no G1 foi de 97,9, 98,6 e 99% e no G2 em 14 dias de 97,6, 98,6 e 98,8% nos T1, T2 e T3 respectivamente. A desidratação em temperatura ambiente promoveu uma retração tecidual inicial maior que na temperatura de freezer, porém na retração final não houve diferença (p>0,05) entre os grupos em todas as mensurações exceto no comprimento cardíaco esquerdo (p<0,05). As médias percentuais totais das retrações foram: perímetro (8,27 e 8,44%); comprimento esquerdo (8,57 e 5,70%); comprimento direito (7,71 e 6,58); peso (38,98 e 39,51%) e volume (23,07 e 20,50%) em G1 e G2 respectivamente. Da mesma forma, na avaliação subjetiva dos corações plastinados, não foi possível detectar diferença na qualidade final das peças entre os tratamentos com menor volume de acetona à temperatura ambiente em relação ao protocolo amplamente preconizado na técnica de plastinação, qual seja o uso de temperatura de freezer e maiores proporções de acetona.Item Avaliação de diferentes fixadores na qualidade histológica de tecidos previamente plastinados(Universidade Federal de Viçosa, 2018-07-20) Ramos, Moema Lopes; Paula, Tarcízio Antônio Rego de; http://lattes.cnpq.br/2280046813332479A exposição ao formaldeído é reconhecidamente um dos mais importantes fatores de risco presentes nos laboratórios de anatomia e de patologia, por ser um produto tóxico, carcinogênico e teratogênico. O formaldeído é utilizado em solução comercial, normalmente diluída a 10%, designada comumente por formol. Trata-se de uma solução pouco onerosa e extremamente eficiente para preservação de peças anatômicas e de tecidos. Na busca de técnicas conservativas em substituição ao formaldeído, a plastinação é um método inovador de conservação de peças anatômicas, que substitui a água e a gordura dos tecidos por um polímero curável, para a etapa de conservação de peças cadavéricas. Porém, a plastinação prescreve o uso do formol na etapa de fixação. Um estudo comparativo, sobre a ação de três fixadores utilizados em tecidos previamente plastinados, foi realizado a fim de avaliar qualitativamente a preservação de características histológicas de nove órgãos, ao microscópio de luz (ML). Artéria, esôfago, fígado, intestino delgado, intestino grosso, músculo estriado esquelético, nervo periférico, pâncreas e traqueia de equino foram coletados, fixados em três diferentes soluções fixadoras (formaldeído 10%, formaldeído 2,5% e solução de Cambridge). Após fixação, foram preparados para procedimentos de plastinação com silicone S10 Biodur ® , os quais foram submetidos ou não à etapa de cura. Após o término da plastinação, metade das amostras dos tecidos foi desplastinada em solução de metóxido de sódio 5% em metanol e processada para rotina histológica. A outra metade passou por um processo de maturação durante 04 meses, para depois ser desplastinada e processada para rotina histológica. Este estudo mostrou que a solução fixadora de formaldeído 10% apresentou melhores qualificações para análises histológicas dos tecidos plastinados, que foram submetidos ou não ao processo de cura, seguidos do processo de desplastinação. Mostrou também que a solução fixadora de Cambridge apresentou as melhores qualificações para análises histológicas dos tecidos plastinados, submetidos ou não ao processo de cura, maturados e desplastinados.Item Avaliação hematológica, radiográfica e eletrocardiográfica em cães adultos da raça Pinscher Miniatura portadores ou não da doença degenerativa mixomatosa da valva mitral, diagnosticada pela ecocardiografia(Universidade Federal de Viçosa, 2016-07-27) Matos, Luciana Diégues Guimarães; Borges, Andrea Pacheco Batista; http://lattes.cnpq.br/7304892130243158Para melhor compreensão da doença degenerativa mixomatosa da valva mitral (DDMVM) em sua forma subclínica na raça Pinscher Miniatura, o presente estudo teve por principal objetivo caracterizar os achados hematológicos, eletrocardiográficos e radiográficos em uma população de cães Pinscher Miniatura clinicamente saudáveis, não portadores da DDMVM ou pertencentes aos estádios subclínicos da doença, diagnosticada ecocardiograficamente. Vinte e nove Pinscher Miniatura adultos clinicamente saudáveis (16 machos e 13 fêmeas), com idade entre 1 e 15 anos foram avaliados na Clínica de Pequenos Animais do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa. Inicialmente os cães passaram por uma triagem que incluiu anamnese, avaliação física e exames laboratoriais de rotina (hemograma e bioquímica sérica). Os animais foram então submetidos a exame ecocardiográfico, que incluiu análise por Doppler colorido e espectral, modo B e modo M. Dezoito animais apresentaram regurgitação sistólica mitral, sendo que 9 deles apresentaram sinais de remodelamento cardíaco. Desta forma, de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo American College of Veterinary Internal Medicine (ACVIM) para o diagnóstico e estadiamento da DDMVM, onze animais foram classificados como em alto risco de desenvolver doença cardíaca, porém sem alterações estruturais identificáveis (estádio A). Regurgitação sistólica mitral foi diagnosticada em dezoito animais, os quais foram classificados como portadores assintomáticos de doença cardíaca estrutural. Nove desses dezoito animais não apresentaram evidências radiográfica ou ecocardiográfica de remodelamento cardíaco em resposta à DDMVM (estádio B 1 ) e os outros nove animais de fato apresentaram regurgitação valvar hemodinamicamente significativa, evidenciada por achados radiológicos ou ecocardiográficos de aumento de ao menos uma das câmaras cardíacas esquerdas (estádio B 2 ). A dosagem de NT-proBNP não diferiu significativamente entre os animais nos diferentes estádios da DDMVM. À avaliação eletrocardiográfica computadorizada não se constatou nos cães alterações com significado clínico; em todos os grupos, a onda P e o complexo QRS apresentaram maior duração média que a pré-estabelecida na literatura para a eletrocardiografia convencional, contudo este fato foi atribuído à maior sensibilidade do método computadorizado. Radiograficamente, obteve-se o valor médio de 10,1 unidades vertebrais referente ao vertebral heart size (VHS) dos cães estudados, sendo, portanto, este o valor sugerido para a análise da silhueta cardíaca da raça em questão. Em suma, a DDMVM em estádios assintomáticos não alterou os níveis séricos de NT-proBNP, nem os valores de VHS ou mesmo os parâmetros eletrocardiográficos em cães da raça Pinscher Miniatura.Item Avaliação morfofuncional testicular do lobo-guará (Chrysocyon brachyurus) nas diferentes estações climáticas do ano(Universidade Federal de Viçosa, 2018-07-26) Silva, Vinícius Herold Dornelas e; Paula, Tarcízio Antônio Rêgo de; http://lattes.cnpq.br/2801051229823449Classificado como ameaçado de extinção pela IUCN e vulnerável pela Lista Nacional Espécies da Fauna Brasileira Ameaçadas de Extinção, o lobo-guará (Chrysocyon brachyurus) sofre com a redução e fragmentação do seu ambiente, atropelamentos, redução da população de suas presas naturais. Estudo sobre a diversidade genética dessa espécie relatou que mais de 40% das amostras obtida foram de animais mortos em estradas ou resgatados próximos de áreas urbanas com sinais de envenenamento e/ou machucados. Assim para o estabelecimento de técnicas em reprodução assistida e para a manutenção da variabilidade genética da espécie torna-se necessário o esclarecimento da dinâmica de funcionamento dos parâmetros testiculares ao longo do ano. Poucos estudos existem sobre a variação na produção de espermatozoide para carnívoros neotropicais, entretanto, foi identificaram uma variação nos parâmetros seminais ao longo do ano para o lobo-guará. Neste sentido, o estudo quantitativo dos componentes testiculares ao longo das estações climáticas torna-se essencial para o entendimento desse processo nessa espécie. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a dinâmica do parênquima testicular do lobo-guará ao longo do ano. Foram avaliadas amostras testiculares de quatro indivíduos de lobos-guará para cada uma das diferentes estações climáticas do ano, estas amostras foram obtidas no acervo do Centro de Triagem de Animais Silvestres da Universidade Federal de Viçosa (CETAS-UFV), Viçosa, Minas Gerais. O volume testicular foi obtido através do cálculo do volume do elipsoide, e posteriormente foi realizada a confecção de lâminas histológicas. Os parâmetros morfométricos do testículo, como a proporção e o volume de túbulo seminífero, intertúbulo e de célula de Leydig, o comprimento tubular, o diâmetro de túbulo seminífero e de núcleo de célula de Leydig e o número de células de Leydig, foram mensurados ao longo das quatro estações climáticas do ano. O peso do testículo (6,03 ± 0,3g), a proporção (75,95 ± 5,84%) e o volume (4,58 ± 0,47ml) de túbulo seminífero mostraram-se maiores no outono, época de acasalamento, porém o volume de tecido intertubular não se alterou ao longo das diferentes estações climáticas. O diâmetro médio do túbulo seminífero na época acasalamento também foi maior (225,31 ± 6,07 μm) em relação ao período fora da época acasalamento. A proporção (40,00 ± 3,34%) e o volume (1,57 ± 0,38ml) de intertúbulo foram maiores no inverno, época de nascimento dos filhotes, o mesmo ocorre para o número de célula de Leydig totais, (9,44x10 8 ± 1,72x10 8 ), sendo o diâmetro e o volume do núcleo da célula o único componente que não teve variações ao longo do ano. Neste sentido é possível concluir que há uma sazonalidade nos constituintes do testículo de lobo-guará ao longo das diferentes estações climáticas do ano na região de estudo.Item Bacteriocinogenic potential of lactic acid bacteria isolates from artisanal fermented meat products(Universidade Federal de Viçosa, 2018-08-16) Castilho, Natália Parma Augusto; Nero, Luís Augusto; http://lattes.cnpq.br/9820553917988866The aim of the study was isolate and characterized lactic acid bacteria (LAB) from artisanal fermented meat products through phenotypic and genotypic methodologies, searching for the selection of isolates with bacteriocinogenic potential. LAB isolates were obtained from artisanal fermented meat products and were characterized to their bacteriocinogenic activity; after isolation and identification were obtained 5 different isolates: Lactobacillus curvatus 12 and 36; Lactococcus garvieae 32 and Weissella viridescens 23 and 31 and the detection of bacteriocins related genes were performed; L. curvatus 12 and 36 e W. viridescens 23 were selected for the other analysis to evaluate the bacteriocinogenic potential. The selected isolates showed distinct growth and bacteriocin production was more evident in L. curvatus 12 and W. viridescens 23. The bacteriocins produced were adsorbed by the producing strains at different levels. Partially purified bacteriocins maintained their inhibitory activity after elution with 60% isopropanol. Cell lysis patterns were similar for all isolates tested. Detection of β-galactosidase indicated destabilization of the cell membrane permeability of the isolated BAL. The bacteriocins produced by L. curvatus 12 were purified by HPLC and four different peptide sequences were identified. The selected BAL isolates were able to produce bacteriocins with high inhibitory activity against L. monocytogenes, indicating their potential application in the food industry as bioconservatives. For the evaluation of the presence of virulence genes, resistance to antibiotics and probiotics, the five isolates previously identified were used. All isolates tested were positive for mub, while EF226-cbp, EF1249-fbp and EF2380-maz were detected in at least one isolate; none isolated showed map, EFTu or prgB. The isolates tested presented variable results in relation to the virulence genes and no isolates showed the genes gelE, cylA, efsA, cpd, int-Tn or sprE. Antibiotic resistance genes were also detected at different patterns. LAB isolates presented some beneficial aspects besides the production of bacteriocins, but the presence of virulence genes and resistance to antibiotics is a problem when using these isolates as starter or bioconservative cultures in foods. Considering the inhibitory potential of these strains, an alternative would be the use of their bacteriocins after semi-purification or purification procedures. Fresh sausage was prepared and inoculated with different combinations of L. curvatus 12 (bacteriocinogenic BAL), L. sakei ATCC 15521 (non bacteriocinogenic BAL), L. monocytogenes, nisin and partially purified bacteriocin produced by L. curvatus 12 and stored at 7 ° C for 10 days. Microbiological analyzes were performed on days 1, 4, 7 and 10 and physical-chemical analyzes (control) on days 1 and 10. In general, LAB counts did not show significant differences between treatments and throughout the storage period (p> 0.05). The counts of L. monocytogenes in fresh sausage inoculated with the pathogen and the bacteriocinogenic LAB varied from 1.0 to 2.0 log CFU/g, being significantly different from the sausage inoculated with only L. monocytogenes (p < 0.05). Nisin and partially purified bacteriocin also determined a reduction in the counts of L. monocytogenes when compared to the treatment that was inoculated only the pathogen, ranging from 1.0 to 3.0 log CFU/g (p> 0.05). These results indicate that the bacteriocinogenic LAB was able to determine a significant reduction in the count of L. monocytogenes in fresh sausage stored at 7 ° C.Item Beneficial properties and safety of lactic acid bacteria isolated from the dairy production environment(Universidade Federal de Viçosa, 2017-06-30) Colombo, Monique; Nero, Luis Augusto; http://lattes.cnpq.br/1188501382442265Lactic acid bacteria isolated from dairy environment were evaluated for beneficial potential. Preliminary screening and PCR analysis were applied to select and identified through 16s rRNA sequencing 15 LAB strains: Lactobacillus (n = 11; Lb. casei MSI1, Lb. casei MSI5, Lb. casei MRUV1, Lb. casei MRUV6, Lb. acidophilus MVA3, Lb. nagelli MSIV4, Lb. harbinensis MSI3, Lb. harbinensis MSIV2, Lb. fermentum SIVGL1, Lb. plantarum MLE5 and Lb. plantarum MSI2), Pediococcus (n = 2; P. pentosaceus MLEV8 and P. acidilactici MSI7) and Weissella (n = 2; W. paramesenteroides MRUV3 and W. paramesenteroides MSAV5). All selected strains showed resistance to acidic pH and to presence of bile salt. API ZYM test characterized enzymatic activity of the strains and high β-galactosidase activity was observed in 13 strains. All strains presented high values for survival rate to simulated gastric and intestinal conditions, ability to auto and co-aggregate with indicators microorganisms and high cell surface hydrophobicity. Most of the strains were positive for map and EFTu beneficial genes. Strong bile salts deconjugation was applied for all strains and all strains showed good results for assimilating lactose. After this first part of the study, the 15 BAL were evaluated for potential virulence and antimicrobial resistance. The production of virulence factors (hemolysis, gelatinase, lipase, deoxyribonuclease and biogenic amines: lysine, tyrosine, histidine and ornithine) was assessed by phenotypic methods at 25 °C and 37 °C, as well as the resistance to 17 antimicrobials. The isolates were also subjected to PCR to identify the presence of 49 genes associated with virulence factors. None of the strains presented hemolytic activity or the production of gelatinase, lipase, deoxyribonuclease and tested biogenic amines. Of the 15 selected cultures, for 12 types of antibiotics in the disc diffusion method, all strains were resistant for oxacillin and sulfa/trimethoprim, 14 were resistant to gentamicin, 11 were resistant to clindamycin, nine strains were resistant to vancomycin, eight strains to rifampicin, five were resistant to erythromycin, four were resistant to tetracycline, two strains were resistant to ampicillin, one strain was resistant to chloramphenicol and none was resistant for imipenem. For a quantitative test of the antibiogram, five antibiotics were selected in Etest ® strips (bioMérieux). All 15 strains were resistant to vancomycin, two for rifampicin, one for gentamicin and one for chloramphenicol. Regarding the virulence related genes, 19 genes from 49 tested were present in some strains. Results showed that five cultures showed the presence of the int gene, four cultures showed the presence of the ant(4')-Ia gene, three cultures were positive for vanC2, cpd and tdc, two cultures for vanA, tet(K), tet(S), ermA, bcrR, mur-2ed, asa1 and ccf, and one culture was positive for vanC1, ermB, aph(3')-IIIa, aac(6’)-le-aph(2”)-Ia, bcrB and hyl. After characterizing the virulent potential of the 15 BAL, these strains were evaluated for the technological potential for application in the dairy industry. All strains presented acidification capacity, reaching pH values between 0.73 and 2.11 in 24 hours: Lb. casei MRUV6 presented the highest acidification ability (pH 2.11 after 24 h). Ten strains were able to produce diacetyl at 37 °C, except by Lb. casei MSI1, Lb. harbinensis MSI3, Lb. fermentum SIVGL1, Lb. plantarum MLE5 and W. paramesenteroides MRUV3. All strains were able to produce exopolysaccharides, and only two strains presented proteolytic activity (Lb. casei MSI5 and W. paramesenteroides MSAV5). Based on this characterization, Lb. casei MRUV6 was selected for producing fermented milk, stored at 4 °C and 10 °C and monitored until 35 days of shelf life. Samples were subjected to phenotypical and molecular methods to quantify the presence of Lb. casei MRUV6 (conventional plating and RT-PCR, by checking the expression of gapdh, a housekeeping gene) and to verify the expression of bsh gene, related to resistance to bile salts (RT-PCR). Lb. casei MRUV6 population was stable during storage period at 4 and 10 °C at levels around 9.9 log CFU/g, and by monitoring the expression of gapdh gene. However, bsh gene was not expressed during storage period. The study demonstrated the potential use of the beneficial strain Lb. casei MRUV6 isolated from a dairy environment for the production of a fermented milk product, and its stability during storage at 4 and 10 °C. All isolates from the study presented beneficial characteristics, safety for use in food and technological potential for use in the dairy industry. In addition, they may further be subjected to further studies for in vivo evaluations and characterization as probiotics.Item Caracterização biológica e molecular de estirpes vacinais e isolados de campo de Infectious bronchitis virus(Universidade Federal de Viçosa, 2015-08-24) Pereira, Claiton Gonçalves; Silva Junior, Abelardo; http://lattes.cnpq.br/1513350934133258Infectious bronchitis virus (IBV) é uma das principais causas de perdas econômicas na indústria avícola, afetando galinhas de todas as idades, apesar das tentativas de controle por vacinação. Os objetivos deste estudo de três capítulos propôs-se: 1) analisar a composição genética das vacinas vivas H120 e Ma5 de IBV disponíveis comercialmente no Brasil, 2) promover a caracterização molecular de IBV acometendo um plantel de matrizes e, 3) investigar persistência viral nesse lote ao final do ciclo de produção e verificar a ocorrência de transmissão vertical. No capítulo 1 foi obtida a sequência completa do gene S1 das vacinas produzidas por diferentes laboratórios, sendo verificada que as vacinas H120 possuem subpopulações de IBV distintas, refletindo em até 14 diferenças na sequência de aminoácidos entre as vacinas. Na análise do cromatograma de S1 obtida da vacina Ma5 também foi detectado pico secundário, sugerindo a presença de subpopulação do vírus. Para abordar essa questão foi desenvolvido um sistema para identificar a população de espécies de RNA dessa vacina. Apesar de ser clonada foram identificadas pelo menos cinco subpopulações do vírus intra-vacina. Portanto, essa grande diversidade genética entre as vacinas poderia justificar os diferentes resultados da vacinação. No capítulo 2, a sequência parcial de S1 de IBV foi obtida diretamente de amostras clínicas. A vacina Ma5, previamente utilizada nesse lote, foi detectada na traqueia e no intestino delgado; enquanto subpopulação de IBV variante foi identificada em órgão específico das aves. Esse achado tem grande importância sob o ponto de vista aplicado porque ele ilustra o potencial repertório patogênico que a infecção por IBV de campo pode imputar sobre um lote de galinhas acometidas pela doença. Finalmente, no capítulo 3, diferentes órgãos dessas galinhas em final de produção e líquido cório-alantoide (LCA) de embriões vivos com 18 dias de incubação oriundos desse lote foram utilizados para a detecção e identificação de IBV. A vacina Ma5 foi detectada no intestino delgado, rins e oviduto das galinhas e no LCA de embriões. No entanto, nas tonsilas cecais foi detectado IBV com significativa diferença genética na comparação com a vacina Ma5 previamente utilizada e aqueles identificados nos diferentes órgãos das aves na época da doença. Esses achados sugerem que além da vacina, outras subpopulações de IBV podem persistir por longos períodos no hospedeiro e, pelo menos em galinhas em final de produção a vacina Ma5 pode ser transmitida verticalmente.