Bioquímica Agrícola
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Item Avaliação de derivados de Euterpe edulis Martius: estudo químico, efeito toxicológico e ação sobre esteatose hepática em modelo murino(Universidade Federal de Viçosa, 2014-07-11) Freitas, Rodrigo de Barros; Leite, João Paulo Viana; http://lattes.cnpq.br/3286511632112171O presente estudo foi realizado com o objetivo de caracterizar as propriedades químicas de três extratos obtidos a partir dos frutos de Euterpe edulis e avaliar a sua capacidade de atenuar os danos do fígado induzido pelo consumo de dieta de cafeteria (CD) em ratos Wistar e sua toxicidade. Os três extratos derivados do fruto de E. edulis, chamados de extrato liofilizado (LEE), extrato liofilizado e desengordurado (LEDE) e óleo de E. edulis (EO) foram analisados quimicamente quanto à sua composição centesimal, por UPLC-ESI-MS/MS, para determinação do perfil de antocianinas de LEE e LEDE, HPLC para composição de tocoferóis de LEE, LEDE e OE, cromatografia gasosa, para determinação do perfil de ácidos graxos de OE, método de folin-ciocalteu, para determinação de polifenóis totais, pH diferencial, para avaliação das antocianinas monoméricas em LEE e LEDE, e DPPH, para sua capacidades antioxidantes. Quarenta e dois ratos foram divididos em sete grupos de seis animais cada para avaliação da ação sobre a esteatose hepática. Cada grupo recebeu CD por 30 dias para induzir a esteatose hepática, seguido da administração continuada da mesma dieta acrescida dos extratos de E. edulis por mais de 20 dias, totalizando um período experimental de 50 dias. Para os estudos toxicológicos, 24 animais foram divididos em quatro grupos, seguindo o modelo anterior dos dias e inserção dos extratos. O sangue e o fígado foram analisados para os parâmetros bioquímicos, atividade das enzimas antioxidantes, expressão de citocinas e características histopatológicas. A dieta de cafeteria foi eficiente em induzir a esteatose hepática observada pelo acúmulo de lipídeos no interior do hepatócitos. A administração de LEDE 10% foi mais eficaz na redução da atividade da enzima antioxidante. Os resultados demonstram que a atividade do extrato de E. edulis está relacionada à concentração de antocianimas e às fibras presentes nos extratos. O presente estudo indica que a suplementação dietética com os três extratos de E. edulis em ratos Wistar não tem efeitos secundários nocivos e pode ser benéfico, especialmente no extrato com concentrações elevadas de antocianina.Item Obtenção de hibridomas para a produção de anticorpos monoclonais contra a proteína E-NTPDase-2 de Leishmania major(Universidade Federal de Viçosa, 2010-07-27) Freitas, Rodrigo de Barros; Salcedo, Joaquín Hernán Patarroyo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783313T4; Lamêgo, Márcia Rogéria de Almeida; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782197P4; Fietto, Juliana Lopes Rangel; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790238D0; http://lattes.cnpq.br/3286511632112171; Lima, Luciana Moreira; http://lattes.cnpq.br/2013048264104100; Afonso, Luis Carlos Crocco; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4789739U0; Bressan, Gustavo Costa; http://lattes.cnpq.br/1153853218347720As Leishmanioses são doenças parasitárias causadas por protozoários da ordem Kinetoplastida, família Trypanossomatidae e gênero Leishmania que atualmente representam um problema de saúde pública no Brasil e em outros países do mundo. As E-NTPDases ou apirases, presentes nesses parasitos, têm como principal função a degradação de nucleotídeos, especialmente extracelulares di e/ou trifosfatados, permitindo ao parasito a modulação da resposta imune do hospedeiro, que necessecita da sinalização purinérgica, e favorecendo o desenvolvimento celular por sua participação na via de recuperação de purinas das quais os parasitos são dependentes. Os anticorpos monoclonais são oriundos de um hibridoma para reconhecimento de um determinado antígeno e podem ser selecionados para uma especificidade desejada, produzidos em grande quantidade e com boa qualidade. Este trabalho teve como objetivo a expressão heteróloga da proteína E-NTPDase-2 de L.major e produção de hibridomas secretores de anticorpos monoclonais contra esta proteína. Para isso foi feito o desenho de iniciadores específicos visando a amplificação da região codificante da porção solúvel (ecto-domínio) da E-NTPDase-2, sem a porção codificante para a região do peptídeo aminoterminal, perfazendo um DNA com 1053 pares de base. O amplicom foi obtido com amplificação por PCR, clonado em vetor de amplificação (pJET-bunt) e de expressão (pET-21b) em sistema bacteriano (E.coli DH5α). A expressão da proteína E-NTPDase-2 foi realizada em sistema bacteriano (E.coli BL-21) e a purificação foi feita por cromatografia de afinidade em coluna de Ni2+-agarose (Ni-NTA). Com a proteína purificada procedeu-se as imunizações dos camundongos e consequente confirmação da produção de anticorpos anti- NTPDase 2 por DOT ELISA. A fusão da células B dos camundongos imunizados, com as células de mieloma (Sp20) foi realizada para obteção dos hibridomas. Desta maneira foram isolados hibridomas anti-E-NTPDase-2 de L.major que poderão ser utilizados em várias aplicações futuras, como o diagnóstico e tratamento da Leishmaniose canina.