Biologia Celular e Estrutural
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Item Avaliação da expressão em células Vero dos candidatos vacinais pCID2EtD2prM e pCID2EtD3prM de DNA recombinante para o vírus Dengue-2(Universidade Federal de Viçosa, 2009-02-12) Dutra, Nina Rocha; Neves, Clóvis Andrade; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785611E1; Salcedo, Joaquín Hernán Patarroyo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783313T4; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://lattes.cnpq.br/0736837605452273; Oliveira, Leandro Licursi de; http://lattes.cnpq.br/0578231392218162; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8Os dengue vírus são vírus de genoma RNA fita simples polaridade positiva que codifica as proteínas em uma longa open reading frame . Contém aproximadamente 11 kb, responsáveis pela codificação de três proteínas estruturais denominadas Capsidial (C), de Membrana (M), e Envelope (E), sendo esta última uma glicoproteína. Adicionalmente a estas proteínas estruturais, o genoma viral expressa ainda sete proteínas não-estruturais denominadas NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b, e NS5. Estes vírus pertencem à família Flaviviridae, sendo os patógenos humanos de maior importância desta família. São transmitidos através do mosquito Aedes aegypti, causando a dengue. As manifestações da dengue variam desde infecções assintomáticas até quadros graves de doença hemorrágica que são responsáveis pelos altos índices de morbidade e mortalidade. Ainda não há terapia antiviral específica.Vários pesquisadores têm se lançado à busca de uma vacina eficaz para o controle da dengue, e consequentemente, diversas estratégias têm sido levantadas para a produção da mesma, lançando mão de desde métodos clássicos como atenuação viral até a expressão de antígenos recombinantes em vetores de expressão, tais como vírus e bactérias. No entanto, os resultados obtidos no desenvolvimento destas vacinas têm frustrado a comunidade científica mundial. Uma nova estratégia vacinal, a vacina de DNA, está atualmente sob intensa investigação. Neste contexto, foi construído um candidato vacinal contra o dengue, utilizando-se para tanto um plasmídeo pCI Vector expressando a proteína E truncada do vírus dengue-2, sem a expressão concomitante de prM, com a finalidade de reduzir o tamanho do inserto a ser clonado, facilitando a produção de uma vacina tetravalente em um único plasmídeo. Testes demonstraram que a proteína E truncada foi corretamente expressa pelo plasmídeo, porém em quantidade reduzida e que existe uma boa resposta específica contra o vírus da dengue gerada pelo clone recombinante, mas apenas uma pequena porcentagem de camundongos imunizados com o plasmídeo foi protegida quando desafiados com vírus dengue-2. Estes resultados justificam a busca de um aprimoramento deste candidato vacinal contra o dengue-2, a fim de aumentar a expressão da proteína E clonada no plasmídeo vacinal e assim proporcionar uma imunização mais eficaz. O presente trabalho visa o aprimoramento desse plasmídeo através da inserção das proteínas prM/DENV-2 e prM/DENV-3, a fim de verificar se a presença de prM na construção vacinal aumentaria a expressão de E. Os novos plasmídeos recombinantes contruídos foram denominados pCID2EtD2prM e pCID2EtD3prM. Os resultados obtidos provaram a correta clonagem e expressão das proteínas prM/E por células Vero transfectadas, e indicam que houve um aumento de expressão relativo de 67,02% por pCID2EtD3prM com relação a pCID2EtD2prM, resultados esses que ainda deverão ser corroborados por testes absolutos.Item Construção de um sistema de expressão da proteína não estrutural (NS1) do vírus dengue-2 em Nicotiana tabacum "Havana" e análise da expressão do transgene(Universidade Federal de Viçosa, 2009-12-15) Amaro, Marilane de Oliveira Fani; Oliveira, Leandro Licursi de; http://lattes.cnpq.br/0578231392218162; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://lattes.cnpq.br/8475779445932134; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8; Fietto, Juliana Lopes Rangel; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790238D0A dengue é a doença mais importante causada por arbovírus no mundo, sendo observado nos últimos vinte anos um aumento significativo na atividade epidêmica, expansão da distribuição geográfica, transmissão contínua de vários sorotipos e emergência da Febre hemorrágica (DHF) em áreas onde a doença não era prevalente. Apesar dos processos metodológicos de diagnóstico da dengue estar na atualidade em profundo desenvolvimento e aperfeiçoamento, um empecilho na realização de testes diagnósticos para dengue reside na dificuldade de produção em grande escala de antígenos a serem usados na captura do anticorpo presente no soro de pacientes infectados. Devido a este fator, o objetivo é a obtenção de antígeno em grandequantidade e qualidade utilizando um sistema de expressão heteróloga de proteínas em plantas. Para tanto, foi extraído o RNA total do sobrenadante de cultura de células infectadas e a partir deste foi sintetizado o cDNA. O gene da proteína não estrutural (NS1) do sorotipo dengue 2 foi obtido através de Reações em Cadeia da Polimerase (PCR), separado por eletroforese e purificado. O gene foi, então, clonado em vetores pGEM-T e pCAMBIA. Bactérias Escherichia coli DH5α foram transformadas, selecionadas em meio seletivo e estocadas a -80º C. O vetor pCAMBIA foi anteriormente clivado com as mesmas enzimas e o gene da proteína NS1 foi ligado a este por enzima T4 ligase. Nova transformação de E. coli DH5α foi realizada e as colônias foram, então, analisadas quanto a presença do gene que codifica a proteína NS1 através de Reações em Cadeia da Polimerase (PCR). As colônias transformantes recombinantes foram selecionadas e estocadas. Este vetor recombinante, pCAMBIA 3301/NS1, foi utilizado para transformação de Agrobacterium tumefaciens e, posteriormente, de Nicotiana tabacum para expressão da proteína não-estrutural NS1. A extração do DNA e do RNA proveniente das plantas do tabaco foi realizada. A integração do gene da proteína NS1 no genoma vegetal e sua transcrição foram confirmadas por PCR. Análises subsequentes serão realizadas para verificar a expressão efetiva da mesma, que será purificada e concentrada.Item Construção e expressão heteróloga de domínio III da proteína de envelope (E) dos vírus dengue -1e - 3 em Pichia pastoris(Universidade Federal de Viçosa, 2014-02-26) Paixão, Vinicius Ferreira da; Cardoso, Silvia Almeida; http://lattes.cnpq.br/6041368188542057; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://lattes.cnpq.br/6080985490443187; Silva, Cynthia Canedo da; http://lattes.cnpq.br/7077220592875119; Silveira, Wendel Batista da; http://lattes.cnpq.br/7361036485940798A dengue é a arbovirose mais importante do mundo colocando em risco quase metade da população mundial, classificada como uma Doença Tropical Negligenciada. É de suma importância o desenvolvimento e melhoramento das metodologias de diagnóstico bem como vacinas para dengue. Entretanto o desenvolvimento dessas são limitados pela dificuldade de produção em grande escala de antígenos a serem usados na captura do anticorpo presente no soro de pacientes infectados e para a imunização de cobaias. Devido a este fator limitante, este trabalho teve como objetivo produzir antígeno em grande quantidade e qualidade do domínio III da proteína E dos VÍRUS DENGUE. Para tanto, a P. pastoris foi utilizada por ser uma levedura que tem por natureza um padrão de modificações pós-traducionais em suas proteínas semelhantes dos padrões de mamíferos quando comparamos este gênero (Pichia) com outros gêneros de leveduras já utilizados em expressão heteróloga. Sequências de DNA correspondes ao domínio III da proteína E de DENV-1 e -3 foram inseridos na construção pTZ/domIIIDENV1 e pTZ/domIIIDENV3 e clonadas em E. coli, e os insertos domIII DENV-1 e de -3 foram liberados por digestão com as enzimas de restrição EcoRI e NotI e, posteriormente ligados ao vetor de expressão pPICzαA em leveduras. As construções resultantes pPICzαA/domIIIDENV1 e pPICzαA/domIIIDENV3 também foram clonadas em E. coli e com elas P. pastoris GS115 foram transformadas por eletroporação e selecionadas em meio com ZeocinTM. Todas as construções e a transformação foram confirmadas através de PCR. Uma vez obtidas a as linhagens recombinantes foi feita a expressão da proteína domIIIDENV1, e por técnicas sorológicas como ELISA indireto com IgM e IgG de pacientes soropositivos para Dengue foi confirmada a grande similaridade da proteína heteróloga expressa e a proteína nativa, uma vez que estas técnicas são extremamente sensíveis e específicas por dependerem da ligação antígeno-anticorpo. Este trabalho vem demonstrar o grande potencial para produção em larga escala do antígeno Domínio III da proteína de Envelope dos vírus dengue 1 e 3 para construção de kits diagnóstico e melhorias no controle da dengue.Item Controle de biofilmes em membranas de osmose inversa através de bacteriófagos(Universidade Federal de Viçosa, 2014-09-03) Dias, Roberto Sousa; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://lattes.cnpq.br/5264236284944155; Ramos, Javier Vega; http://lattes.cnpq.br/4360229725538200; Silva, Cláudio Mudado; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727931T6; Merzel, Valéria Maia; Silva Júnior, Abelardo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4771645P8Alguns segmentos industriais são conhecidos por produzir grandes quantidades de efluentes salinos, entre eles pode-se destacar o setor petroquímico. Com a crescente busca por tecnologias que permitam a reciclagem da água, os sistemas de osmose inversa (OI) tem ganhado grande atenção por parte do setor industrial e de pesquisadores em todo o mundo. As incrustações (fouling) são o principal entrave encontrado nesses sistemas por causarem redução expressiva no fluxo e podem ter diversas origens, sendo a bioincrustação, caracterizada pela formação de biofilme de origem microbiana na superfície da membrana, a mais importante. Neste trabalho foi avaliadaa capacidade do fago vB_AspP-UFV1, específico contra bactérias do gênero Arthrobacter, submetidoà analises morfológicas e moleculares e isolado a partir de sistemas de lodos ativados,no controle de biofilmeformado por bactérias obtidas da água de alimentação de sistemas de osmose inversa de refinarias de petróleo. Os resultados mostraram se tratar de um fago da família Podoviridae, ordem Caudovirales, com genoma de aproximadamente 22 Kb. As técnicas de cristal violeta e microscopia eletrônica de varredura demonstraram a capacidade do fago em reduzir a formação do biofilme na maioria das bactérias avaliadas, chegando a 87% de redução em alguns isolados, o que demonstra a viabilidade do uso de bacteriófagos como alternativa aos atuais métodos de controle microbiológico em sistemas industriais.Foi avaliada a formação de biofilme na superfície de membranas, operadas por 30 dias em um sistema piloto de osmose inversa, na filtração de efluente industrial proveniente de refinaria de petróleo. Foi observada a presença de biofilme espesso após 15 dias de operação, além da quase completa ausência de células viáveis no trigésimo dia . Foram isolados outros 5 fagos específicos contra as bactérias encontradas na água de alimentação do sistema de osmose inversa, visando assim a constituição de um coquetel fágico contendo fagos específicos e inespecíficos com potencial aplicação no controle de biofilme em sistemas de osmose inversa.Item Efeito da fibra como alimento funcional na prevenção da incidência de focos de criptas aberrantes (FCA) no cólon de camundongos induzida por 1,2- dimetilhidrazina(Universidade Federal de Viçosa, 2010-08-30) Gomides, Antônio Frederico de Freitas; Peluzio, Maria do Carmo Gouveia; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723914H4; Oliveira, Leandro Licursi de; http://lattes.cnpq.br/0578231392218162; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4768675U0; Leite, Jacqueline Isaura Alvarez; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723009A8; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8A utilização de dietas saudáveis tem sido um grande aliado na prevenção e tratamento de diversas enfermidades, incluindo o câncer colorretal (CCR), uma doença que afeta grande parte da população mundial, configurando-se como um problema de saúde pública. Fatores genéticos e ambientais são apontados como as principais causas do CCR. Dentre os ambientais podemos destacar os dietéticos. O uso de prebióticos como uma das alternativas na prevenção do CCR vem ganhando cada vez mais o apoio da comunidade científica. Prebióticos são fibras solúveis que reduzem o risco de desenvolvimento de CCR pela produção de metabólitos protetores, como por exemplo, os ácidos graxos de cadeia curta como o acetato, propionato e o butirato. Os prebióticos influenciam também no crescimento de bactérias ácido-lácticas e bifidobactérias proporcionando efeito inibitório em muitas bactérias que produzem enzimas carcinogênicas. A linhaça também é um alimento benéfico na prevenção do CCR sendo um componente alimentar rico em ácidos graxos essenciais que podem funcionar como antiinflamatório, proporcionar a diminuição da proliferação celular e induzir a apoptose em células cancerosas. Outro componente da linhaça são as fibras e compostos associados que podem ser convertidos em fitoquímicos biologicamente ativos, por bactérias aeróbias facultativas presentes no cólon de mamíferos podendo diminuir a atividade de enzimas pró-carcinogênicas e aumentar a atividade de enzimas que atuam no processo de detoxificação celular e proteção contra o câncer. A linhaça está disponível no mercado na forma de grãos integrais, farelo e similares. O objetivo desse estudo foi investigar os efeitos das fibras (frutooligossacarídeo e inulina) e farelo de linhaça desengordurado no cólon de camundongos Balb/C e do farelo de linhaça desengordurado comparando camundongos C57BL/6 macho e fêmea induzidos ao aparecimento de focos de criptas aberrantes (FCA) com 1,2-dimetilhidrazina (DMH) sendo realizadas técnicas histológicas, bioquímicas e de biologia molecular para a avaliação dos resultados. Nos camundongos Balb/C os resultados desse estudo permitiram concluir que a inulina possui maior eficácia na prevenção do aparecimento de FCA com número menor ou igual a três criptas no cólon proximal, médio e distal. No cólon médio e distal a inulina também mostrou-se eficaz na prevenção da incidência de FCA com número maior que três criptas. A baixa expressão das proteínas p53, p21 e p16 no cólon distal no tratamento com inulina não afetou o seu efeito preventivo desse prebiótico, sugerindo que outros mecanismos de prevenção de FCA podem estar envolvidos. Para o aparecimento de FCA com número memor ou igual três criptas no cólon proximal, médio e distal o frutooligossacarídeo foi eficaz. Para FCA com número maior que três criptas no cólon médio e distal o frutooligossacarídeo também mostrou-se eficaz. Essa eficácia pode ser atribuída à expressão aumentada do gene da proteína p16 no cólon distal dos camundongos. Para o cólon médio e distal o farelo de linhaça desengordurado mostrou-se eficaz na prevenção do aparecimento de FCA com número menor ou igual a três criptas. Para a incidência de FCA com número maior que três criptas no cólon médio e distal o farelo de linhaça desengordurado também possui efeitos preventivos. Essa eficácia no cólon distal pode ser atribuída à expressão aumentada do gene da proteína p53. Quando comparamos os diferentes sexos de camundongos C57BL/6 utilizando somente o farelo de linhaça desengordurado, esse alimento apresentou efeitos preventivos no cólon proximal, médio e distal dos camundongos machos diminuindo a incidência de FCA com número menor ou igual a três criptas. Para o cólon distal essa eficácia pode ser atribuída ao aumento da expressão do gene da proteina p53. Nas fêmeas o farelo de linhaça desengordurado não protegeu o cólon distal da incidência de FCA com número menor ou igual a três criptas. Para FCA com número maior que três criptas em ambos os sexos o farelo de linhaça desengordurado não previniu o aparecimento de FCA. Diante de tais evidências encontradas no presente estudo concluímos que os prebióticos frutooligossacarídeo ou inulina e o farelo de linhaça desengordurado são fibras dietéticas efetivas na prevenção do desenvolvimento do CCR, no entanto mais estudos, devem ser realizados para elucidar outros mecanismos que possam estar envolvidos nesse processo tanto na linhagem de camundongos Balb/C que receberam prebióticos e farelo de linhaça desengordurado na dieta, bem como nos camundongos C57BL/6 que foram alimentados com o farelo de linhaça desengordurado.Item Expressão dos genes sintéticos prM e E do vírus dengue-3 em Pichia pastoris: avaliação do uso em diagnóstico da dengue e análise do potencial imunogênico das proteínas(Universidade Federal de Viçosa, 2014-09-09) Teixeira, Michelle Dias de Oliveira; Cardoso, Silvia Almeida; http://lattes.cnpq.br/6041368188542057; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://lattes.cnpq.br/0612903958610514; Damaso, Clarissa; http://lattes.cnpq.br/3900177177421722; Eller, Monique Renon; http://lattes.cnpq.br/4821785523906789; Siqueira-batista, Rodrigo; http://lattes.cnpq.br/7992589011048146; Gomes, Andréia Patrícia; http://lattes.cnpq.br/2722908704781524A dengue é a principal arbovirose que acomete humanos da atualidade. Com o número de casos cada vez maior é essencial a produção em larga escala de antígenos para o desenvolvimento de kits de diagnóstico rápidos para a detecção de pacientes infectados pelos vírus e a consequente intervenção médica adequada para os mesmos. Além disso, não há vacina eficaz disponível contra esta moléstia que acomete grande parte da população mundial. Assim, neste trabalho nós expressamos as proteínas prM e E do vírus dengue-3 em leveduras Pichia pastoris KM71H. As proteínas foram produzidas de forma solúvel no sobrenadante da cultura sob a forma de vírus- like particles (VLPs). O sobrenadante da cultura de leveduras foi submetido à purificação de proteínas através de cromatografia de afinidade usando uma coluna de níquel, porém sem êxito. Assim, o mesmo foi submetido a precipitações com concentrações de saturação crescentes de sulfato de amônio. Após confirmação por Western Blot, a fração de 20% de sulfato de amônio foi utilizada como antígeno em teste de ELISA indireto utilizando soros de pacientes, fornecendo sensibilidade de 73,91% e especificidade de 82,61%. Já a fração proveniente da precipitação com 80% mostrou-se mais satisfatória, fornecendo um teste com 82,61% de sensibilidade e 89,25% de especificidade para a detecção de anticorpos IgM específicos. Ainda, a fração e 80% foi utilizada para a pesquisa de anticorpos IgG específicos contra o vírus, fornecendo 76,09% de sensibilidade e 84,78% de especificidade. As frações de 20% e 80% foram avaliadas também quanto à sua capacidade de gerar respostas imunes contra o vírus dengue-3 em camundongos. Foi observada uma indução de resposta imune Th2, verificado pelo aumento da produção de IL-4 e IL-10 quando as células dos baços dos animais previamente imunizados foram estimuladas com o vírus dengue-3. Também foi induzida a produção anticorpos específicos nestes animais, mostrado através de imunofluorescência indireta utilizando-se os soros dos camundongos imunizados. Além disso, foi determinada a capacidade neutralizante de tais anticorpos, com um título de 512 de anticorpos neutralizantes. Também foi detectado nos animais imunizados com as proteínas recombinantes um aumento na população de células TCD4 ativadas e TCD4 de memória central. Dessa forma, a metodologia aqui proposta mostrou-se promissora para a obtenção de antígenos dos vírus dengue na busca por um candidato vacinal eficaz e criação de testes diagnósticos rápidos e baratos, o que é de grande valia uma vez que grande parte das áreas atingidas pela dengue são economicamente negligenciadas.Item Expressão heteróloga da proteína não estrutural (NS1) do vírus dengue-2 visando a produção de antígenos para kits diagnósticos(Universidade Federal de Viçosa, 2013-07-26) Amaro, Marilane de Oliveira Fani; Cardoso, Silvia Almeida; http://lattes.cnpq.br/6041368188542057; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://lattes.cnpq.br/8475779445932134; Siqueira-batista, Rodrigo; http://lattes.cnpq.br/7992589011048146; Oliveira, Leandro Licursi de; http://lattes.cnpq.br/0578231392218162; Eller, Monique Renon; http://lattes.cnpq.br/4821785523906789; Paiva, Aline Dias; http://lattes.cnpq.br/6496294850014934A dengue é uma das doenças mais importantes causada por arbovírus no mundo, sendo observado nos últimos vinte anos um aumento significativo na distribuição geográfica, transmissão contínua de vários sorotipos e emergência da Febre hemorrágica em áreas onde a doença não era prevalente. Apesar dos processos metodológicos de diagnóstico da dengue estarem na atualidade em profundo desenvolvimento e aperfeiçoamento, um empecilho para a realização de testes diagnósticos para dengue reside na dificuldade de produção em grande escala de antígenos a serem utilizados em testes diagnósticos. Devido a esta demanda, os objetivos deste trabalho foram a obtenção da proteína não estrutural 1(NS1) do sorotipo dengue 2, através da expressão heteróloga em Nicotiana tabacum e a construção de um vetor otimizado para expressão em plantas com o intuito de elevar os níveis de expressão da proteína recombinante nas plantas transgênicas e facilitar sua purificação. Após a confirmação da expressão em Nicotina tabacum, a proteína heteróloga foi caracterizada por imunoblot. Em ensaio imunoenzimático a proteína NS1 recombinante, apresentou potencial como antígeno para desenvolvimento de Kits de diagnóstico da dengue e foi confirmado a transformação de Agrobacterium tumefaciens com o vetor otimizado. Estudos posteriores verificarão a expressão da proteína NS1 recombinante em Arabidopsis thaliana e sua potencial utilização em Kits diagnósticos.Item Expressão heteróloga do domínio III da proteína de envolope (E) do vírus dengue-1 e 2 em Pichia pastoris(Universidade Federal de Viçosa, 2011-06-08) Oliveira, André Silva de; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://lattes.cnpq.br/8338259645103980; Silva, Cynthia Canedo da; http://lattes.cnpq.br/7077220592875119; Honda, Eduardo Rezende; http://lattes.cnpq.br/5804623453858115Anualmente os vírus dengue (DENV) são responsáveis por 100 milhões de infecções em todo o mundo. O vírus apresenta quatro sorotipos diferentes, DENV-1, 2, 3 e 4, e é constituído por três proteínas estruturais (C, prM e E) e sete nãoestruturais. A proteína de envelope (E) é responsável pela ligação do vírus à célula hospedeira, sendo composta por três domínios (I, II e III), onde destaca-se o domínio III (DIII) por apresentar conformação “imunoglobulina-like”, sendo considerado o componente mais imunoestimulador. O diagnóstico definitivo da infecção pelos vírus dengue pode ser feito somente no laboratório e depende do isolamento desses vírus, detecção de antígenos virais ou RNA em soro ou tecidos, ou detecção de anticorpos específicos no soro dos pacientes. Esse processo é demorado, o que dificulta a intervenção clínica e epidemiológica. Os kits de diagnóstico rápido e barato resolveriam esta questão, porém o maior entrave para a sua produção tem sido a obtenção de proteínas com função imunoestimulatória em quantidade e qualidade. Neste trabalho, usamos um sistema de expressão heteróloga para a produção do domínio III da proteína de envelope (E) do vírus dengue-1 e 2 como antígeno recombinante. . A levedura Pichia pastoris foi adotada para a expressão deste domínio proteico por apresentar um padrão de modificações pós-traducionais semelhante a de mamíferos. Em nossos resultados, testes moleculares confirmaram a integração do gene do DIII da proteína E ao genoma da levedura. Os testes preliminares quanto a expressão mostraram resultados animadores evidenciando que a expressão heteróloga em Pichia pastoris é promissora quanto a produção de antígenos de interesse biotecnológico.Item Isolamento e caracterização de bacteriófagos líticos de bactérias patogênicas associadas com mastite bovina(Universidade Federal de Viçosa, 2010-08-25) Pereira, Angelo Liparini; Mantovani, Hilário Cuquetto; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727026Z7; Oliveira, Leandro Licursi de; http://lattes.cnpq.br/0578231392218162; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4762339E6; Araujo, Elza Fernandes de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783675E2; Faria, Bolivar Nóbrega de; http://lattes.cnpq.br/7302273371706589A mastite bovina é a principal doença que acomete os rebanhos de gado de leite no Brasil e no mundo, sendo responsável por imensos prejuízos. Diversos microrganismos são causadores da doença, tais como Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Streptococcus epidermidis, Corynebacterium bovis, Corynebacterium pyogenes e Candida albicans. De todos esses microrganismos S. aureus é o mais prevalente. Apesar da antibioticoterapia ainda ser o procedimento mais utilizado no tratamento da mastite bovina, buscam-se meios alternativos para o tratamento devido à crescente preocupação com a presença de resíduos de antibióticos no leite e com a seleção de cepas bacterianas resistentes. Os resíduos de antibiótico, além de interferirem na produção dos derivados, inviabilizando muitas vezes a produção destes, representam também riscos à saúde pública, existindo relatos de reações de hipersensibilidade após o consumo de leite com presença de penicilina. A utilização de bacteriófagos como ferramenta real no controle de patógenos é uma alternativa ao tratamento. Para tanto, esse trabalho averiguou a prevalência da mastite bovina na região da zona da mata mineira, que apresentou uma porcentagem de 19,19%. Foi realizado o isolamento e a identificação das bactérias a partir do leite mastístico. Pôde-se perceber que as bactérias do gênero Staphylococcus foram as mais prevalentes, representando 77,22% dos isolados. Algumas cepas isoladas foram submetidas ao teste de antibiograma, para a averiguação da susceptibilidade dessas bactérias a determinados antibióticos. Verificou-se que 65% e 60% das cepas de Staphylococcus aureus testadas eram resistentes à penincilina e à ampicilina, respectivamente. Foram isolados 10 bacteriófagos capazes de infectar S.aureus. Esses fagos foram avaliados quanto ao seu potencial lítico, sua especificidade e sua termoestabilidade. Além disso, foi feita a caracterização desses fagos quanto ao tipo de material genético, ao tamanho desse genoma e ao perfil protéico que eles apresentam. Todos os fagos isolados apresentaram o mesmo perfil protéico e com um genoma de DNA de aproximadamente 175 kb. Por meio da microscopia eletrônica, verificou-se que os fagos eram caudados, sendo classificados na família Myoviridae.Item Isolamento, purificação e caracterização molecular de bacteriófagos específicos para Escherichia coli causadora de mastite bovina(Universidade Federal de Viçosa, 2011-06-29) Dias, Roberto Sousa; Zerbini Júnior, Francisco Murilo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783743U5; Oliveira, Leandro Licursi de; http://lattes.cnpq.br/0578231392218162; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://lattes.cnpq.br/5264236284944155; Mantovani, Hilário Cuquetto; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727026Z7; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; http://lattes.cnpq.br/9196320705613169A mastite bovina causa sérios prejuízos tanto ao produtor, quanto à indústria de produtos lácteos. É causada por diversos patógenos, divididos em dois grupos principais: ambientais e contagiosos. Enquanto o número de casos de mastite contagiosa vem diminuindo, os casos causados por patógenos ambientais aumentam, sendo a Escherichia coli o principal agente etiológico. Há um significativo aumento no número de novos casos causados por essa bactéria, sendo atualmente o principal responsável por casos de mastite que culminam com a morte do animal. O surgimento cada vez mais freqüente de linhagens multidroga resistentes e altamente patogênicas torna necessário o estudo de alternativas ao uso da antibioticoterapia. Assim os bacteriófagos, vírus que infectam bactérias e são altamente específicos, surgem como uma opção viável devido principalmente ao baixo custo e a rapidez com que é possível isolar um novo fago específico a linhagens resistentes. Estudos recentes da genética dos fagos e bacteriana tornam mais seguro o uso da fagoterapia, o que torna necessário estudos moleculares, visando obter dados com relação a possível utilização dos mesmos na fagoterapia. Neste contexto, foram isolados 15 bacteriófagos específicos para linhagens de Escherichia coli isoladas em rebanhos acometidos pela mastite bovina. Os isolados foram caracterizados com relação ao seu perfil protéico, evidenciando a presença de 2 proteínas de baixo peso molecular, composição genômica de DNA dupla fita com cerca de 44 kb. Com o objetivo de reduzir os custos e o tempo na obtenção de suspensões com alto grau de pureza, foi padronizada uma metodologia de purificação por cromatografia de troca iônica em um sistema FPLC, sendo possível a obtenção de suspensões virais com grau de pureza apreciável.Item Treinamento físico para portadores de HIV submetidos a HAART: efeitos sobre parâmetros antropométricos, hemodinâmicos, funcionais, imunológicos, bioquímicos e na qualidade de vida(Universidade Federal de Viçosa, 2010-04-19) Mendes, Edmar Lacerda; Amorim, Paulo Roberto dos Santos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4784479Z2; Natali, Antônio José; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4795725H4; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4718106H2; Orsatti, Fábio Lera; http://lattes.cnpq.br/2185904879371466; Oliveira, Leandro Licursi de; http://lattes.cnpq.br/0578231392218162A terapia anti-retroviral fortemente ativa (HAART) tem melhorado a prognose em indivíduos infectados pelo HIV. No entanto, a HAART tem sido associada ao desenvolvimento de anormalidades metabólicas e na distribuição de gordura corporal conhecida como Síndrome Lipodistrófica associada ao HIV (SLHIV). Proposta: Esse estudo investigou o impacto de 24 semanas de exercício resistido com componente aeróbico (ERCA) sobre parâmetros antropométricos, hemodinâmicos, funcionais, imunológicos, bioquímicos e na qualidade de vida de portadores de HIV submetidos a HAART. Métodos: Noventa e nove indivíduos infectados pelo HIV foram randomicamente alocados em quatro grupos: exercício e lipodistrofia (n = 24; EX + LIP); exercício sem lipodistrofia (n = 21; EX + NoLIP); controle e lipodistrofia (n = 27; NoEX + LIP); controle sem lipodistrofia (n = 27; NoEX + NoLIP). Os indivíduos dos grupos exercitados (EX+LIP e EX+NoLIP) participaram de 24 semanas de ERCA. Nos momentos Pré e Pós 24 semanas de intervenção, medidas antropométricas, hemodinâmicas, bioquímicas, imunovirológicas, síndrome metabólica (SM), testes de força, aptidão cardiorrespiratória e qualidade de vida foram avaliadas. Resultados: Vinte e quatro semanas de ERCA alterou os perímetros corporais avaliados (P < 0,0001) e a relação cintura/quadril (P = 0,017) nos dois grupos exercitados. Reduções foram observadas (P < 0,0001) para o somatório das sete dobras cutâneas avaliadas, percentual de gordura corporal, massa corporal gorda, gordura subcutânea total, central e periférica em resposta ao ERCA. A massa corporal magra aumentou (P < 0,0001) nos grupos exercitados, independente do desfecho (LIP ou NoLIP). Para as variáveis hemodinâmicas, reduções foram observadas para PAS (P < 0,0001) e frequência cardíaca de repouso (P = 0,007) em resposta ao ERCA. O colesterol total reduziu (P = 0,024) apenas no grupo EX+NoLIP. O mesmo comportamento (redução) (P = 0,012) foi observado no grupo EX+LIP para o VLDL-c. As respostas imunológicas não diferiram (P > 0,05) ao longo dos 24 semanas de intervenção. A prevalência de SM reduziu de 32,5 % para 27,5 % na amostra total. Nos indivíduos exercitados, a SM reduziu de 39,5 % para 26,3 %. A força muscular, a aptidão cardiorrespiratória e os seis domínios da qualidade de vida avaliados aumentaram (P < 0,0001), para os dois grupos exercitados em resposta ao ERCA. Conclusão: Vinte e quatro semanas de ERCA impediu a manifestação das alterações decorrentes da SLHIV e contribuíram para a redução destas.