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Item Concentração de proteína solúvel por bradford revela diferenças no metabolismo de plantas de ora-pro-nobis em diferentes doses de nitrogênio(Revista Brasileira de Agropecuária Sustentável, 2013-07) Guimarães, Dimitrius Santiago P. Simões Fróes; Souza, Maria Regina de Miranda; Hirano, Rafael T.; Pereira, Paulo Roberto Gomes; Baracat-Pereira, Maria CristinaO ora-pro-nobis (Pereskia aculeata Mill.) é um alimento rico em proteínas, muito utilizado no meio rural e com importância crescente na indústria de alimentos e farmacológica. O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração de proteínas pelos métodos de Bradford e Kjeldahl, em folhas de plantas de ora-pro-nobis submetidas a diferentes doses de adubação nitrogenada, comparando estes métodos. As folhas das plantas de ora-pro-nobis adubadas com diferentes doses de N (0, 50, 100, 200 e 400 kg de N/ha) foram coletadas aos 423 dias após o plantio (DAP). Para o método de Bradford, as folhas foram trituradas com nitrogênio líquido e maceradas em Tris-HCl 50 mM, pH 7,0, o homogenato centrifugado e a proteína solúvel determinada no sobrenadante. Para avaliar o perfil proteico, as amostras dos diferentes tratamentos foram separadas por SDS-Tricina-PAGE 14%. O método de Kjeldahl tradicional foi realizado usando-se o fator de correção 6,25. Os resultados por ambos os métodos indicaram que houve alterações nas concentrações e composição de proteínas presentes em função da disponibilidade de N no solo. A proteína total por Kjeldahl aumentou até a dose de 100 kg de N/ha, e a proteína solúvel por Bradford aumentou nas doses de N entre 50 e 200 kg/ha. Pelo SDS-Tricina-PAGE, verificou-se aumento da intensidade das bandas consonante com o método de Bradford. Estes resultados sugerem que a avaliação de proteínas solúveis pelo método de Bradford permite detectar diferenças no metabolismo das plantas de ora-pro-nobis, expressando informações biológicas relevantes para estudos fisiológicos e nutricionais.Item Concentração de proteína solúvel por Bradford releva diferenças no metabolismo de plantas de Ora-pro-nobis em diferentes doses de nitrogênio(Revista Brasileira de Agropecuária Sustentável, 2013-07-18) Guimarães, Dimitrius Santiago P. Simões Fróes; Souza, Maria Regina de Miranda; Hirano, Rafael T.; Pereira, Paulo Roberto Gomes; Baracat-Pereira, Maria CristinaO ora-pro-nobis (Pereskia aculeata Mill.) é um alimento rico em proteínas, muito utilizado no meio rural e com importância crescente na indústria de alimentos e farmacológica. O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração de proteínas pelos métodos de Bradford e Kjeldahl, em folhas de plantas de ora-pro-nobis submetidas a diferentes doses de adubação nitrogenada, comparando estes métodos. As folhas das plantas de ora-pro-nobis adubadas com diferentes doses de N (0, 50, 100, 200 e 400 kg de N/ha) foram coletadas aos 423 dias após o plantio (DAP). Para o método de Bradford, as folhas foram trituradas com nitrogênio líquido e maceradas em Tris-HCl 50 mM, pH 7,0, o homogenato centrifugado e a proteína solúvel determinada no sobrenadante. Para avaliar o perfil proteico, as amostras dos diferentes tratamentos foram separadas por SDS-Tricina-PAGE 14%. O método de Kjeldahl tradicional foi realizado usando-se o fator de correção 6,25. Os resultados por ambos os métodos indicaram que houve alterações nas concentrações e composição de proteínas presentes em função da disponibilidade de N no solo. A proteína total por Kjeldahl aumentou até a dose de 100 kg de N/ha, e a proteína solúvel por Bradford aumentou nas doses de N entre 50 e 200 kg/ha. Pelo SDS-Tricina-PAGE, verificou-se aumento da intensidade das bandas consonante com o método de Bradford. Estes resultados sugerem que a avaliação de proteínas solúveis pelo método de Bradford permite detectar diferenças no metabolismo das plantas de ora-pro-nobis, expressando informações biológicas relevantes para estudos fisiológicos e nutricionais.Item Enzimas marcadoras de indução de resistência diferencialmente reguladas em soja resistente e suscetível à ferrugem-asiática-da-soja(Pesquisa Agropecuária Brasileira, 2012-01-09) Almeida, Hebréia Oliveira; Barbosa, Meire de Oliveira; Marques, Ana Ermelinda; Pereira, Tânus Henrique Abdalla; Magalhães Júnior, Marcos Jorge; Tessarollo, Nayara Gusmão; Games, Patrícia Dias; Barros, Everaldo Gonçalves de; Stolf-Moreira, Renata; Marcelino-Guimarães, Francismar Corrêa; Abdelnoor, Ricardo Vilela; Pereira, Paulo Roberto Gomes; Baracat-Pereira, Maria CristinaO objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de enzimas marcadoras, a indução de resistência à ferrugem-asiática-da-soja em genótipos de soja contrastantes quanto à suscetibilidade a Phakopsora pachyrhizi. Aproteína total e as atividades de cinco enzimas marcadoras da indução de resistência (lipoxigenases, peroxidases, fenilalanina amônia-liase, quitinases e β-1, 3-glucanases) foram avaliadas em extratos de folhas de plantas de soja dos genótipos Embrapa 48 (suscetível) e PI 561356 (resistente), submetidas à inoculação ou não com o patógeno. Foram observadas respostas de defesa discrepantes entre os dois genótipos e entre os tempos de coleta (12, 72 e 168 horas após inoculação). A resposta de indução dessas enzimas assemelha-se à defesa bifásica, para Embrapa 48, e é consistente com o observado para outros patossistemas. No entanto, o genótipo PI 561356 respondeu com diminuição da concentração de proteína total e das atividades enzimáticas, o que indica redução do metabolismo geral das plantas infectadas. Há um importante mecanismo de resistência do genótipo PI 561356, ainda não relatado, embasado em vias que envolvem essas enzimas marcadoras e em mecanismos que utilizam menor concentração de proteínas, como os de via metabólica de resposta em cascata.Item Plantas de pimentão submetidas à injúria mecânica modificam a expressão de proteínas em plantas vizinhas não injuriadas(Revista Brasileira de Agropecuária Sustentável, 2013-07-25) Games, Patrícia Dias; Fontes, Patrícia Pereira; Carrijo, Lanna Clicia; Magalhães Júnior, Marcos Jorge; Pereira, Paulo Roberto Gomes; Baracat-Pereira, Maria CristinaA proteômica avalia eventos biológicos por análise das proteínas expressas em células ou tecidos em situações fisiológicas diferentes. Na proteômica de plantas, visando manter padrões de cultivo, plantas tratadas e não tratadas são muitas vezes cultivadas no mesmo ambiente, sem considerar alterações por plantas tratadas sobre a expressão de proteínas de plantas não tratadas. O objetivo desse trabalho foi, por proteômica, avaliar a expressão diferencial de proteínas em folhas de plantas de pimentão (Capsicum annuum L. ́Magali R‘) não-feridas (não-tratadas) e feridas (tratadas) por injúria mecânica, quando cultivadas ou não próximas fisicamente. Aos 40 dias após o plantio, parte das plantas foi submetida à injúria por ferimentos nas folhas totalmente expandidas (feridas, F), e parte foi reservada como plantas não-feridas, ou cultivadas perto das plantas F (NFP, a 0,15 m) ou cultivadas longe das plantas F (NFL, a 10 m). As folhas das plantas NFP e NFL foram coletadas às 12, 48 e 168 h após ferimentos das plantas F, e os extratos NFL e NFP foram analisados por eletroforese bidimensional (2-DE). Os perfis proteicos foram comparados por Image Master, e as proteínas identificadas usando espectrometria de massas. Houve menor concentração de proteína em extratos de NFP 12 h; em 48 h e 168 h, a proteína foi semelhante entre NFL e NFP. Por 2-DE, não houve diferenças significativas entre NFP e NFL 12 h, porém para NFP 48 h foi observada maior expressão de proteínas envolvidas na defesa de plantas. Para NFP 168 h, houve aumento da expressão de proteínas envolvidas no metabolismo normal. Esses resultados indicam ter havido respostas de defesa das plantas NFP, decorrentes da proximidade do cultivo dessas plantas com as plantas F, possivelmente por ação de voláteis. Coloca-se assim a importância da escolha das condições de cultivo dos tratamentos-controle, não apenas para análises proteômicas.Item Separomics applied to the proteomics and peptidomics of low-abundance proteins: choice of methods and challenges - a review(Genetics and Molecular Biology, 2011-01-24) Baracat-Pereira, Maria Cristina; Barbosa, Meire de Oliveira; Magalhães Júnior, Marcos Jorge; Carrijo, Lanna Clicia; Games, Patrícia Dias; Almeida, Hebréia Oliveira; Sena Netto, José Fabiano; Pereira, Matheus Rodrigues; Barros, Everaldo Gonçalves deThe enrichment and isolation of proteins are considered limiting steps in proteomic studies. Identification of proteins whose expression is transient, those that are of low-abundance, and of natural peptides not described in databases, is still a great challenge. Plant extracts are in general complex, and contaminants interfere with the identification of proteins involved in important physiological processes, such as plant defense against pathogens. This review discusses the challenges and strategies of separomics applied to the identification of low-abundance proteins and peptides in plants, especially in plants challenged by pathogens. Separomics is described as a group of methodological strategies for the separation of protein molecules for proteomics. Several tools have been used to remove highly abundant proteins from samples and also non-protein contaminants. The use of chromatographic techniques, the partition of the proteome into subproteomes, and an effort to isolate proteins in their native form have allowed the isolation and identification of rare proteins involved in different processes.