Clonagem da sequência da poliproteína estrutural do vírus Mayaro para produção de Virus-Like Particles em Komagataella phaffii

Abstract

O vírus Mayaro (MAYV) é um arbovírus emergente pertencente à família Togaviridae e gênero Alphavirus e causador da febre Mayaro em humanos. A doença é caracterizada por febre aguda, dores articulares e musculares, vômito e diarreia. Os sintomas possuem uma alta similaridade com outras arboviroses, o que afeta o diagnóstico correto da doença. No Brasil, é endêmico na região Norte onde causa surtos pontuais. Seu principal vetor é o mosquito Haemagogus janthinomys, restrito ao ciclo silvestre, porém já foi observado que espécies adaptadas ao ciclo urbano, como mosquitos do gênero Aedes, apresentam capacidade vetorial para transmitir o vírus. Esse fato gera uma grande preocupação visto que são vetores urbanizados e circulam em áreas com alta densidade populacional. Outras questões também se tornam pertinentes na dispersão viral como a intensa globalização, o aumento de desmatamentos e consequentemente as rápidas mudanças climáticas. Além disso, até o momento, não há vacinas disponíveis para o vírus Mayaro, deixando a população exposta devido à ausência de imunidade prévia. Logo, o MAYV possui um alto potencial de emergência, e risco de epidemias. Este cenário reforça a necessidade do desenvolvimento de alternativas ao combate ao vírus que visem a proteção da população. As virus-like particles (VLPs) são estruturas que mimetizam a conformação do vírus sem conter seu material genético, se mostrando uma opção segura para aplicação médica. Neste sentido, a proposta deste trabalho foi realizar a clonagem da sequência da poliproteína estrutural de MAYV em vetor de expressão pPICZα A em Komagataella phaffii para produção de VLPs para fins terapêuticos. Foi realizada a construção do plasmídeo pPICZαA/E-MAYV contendo a sequência codificadora da poliproteína estrutural (C, E1, E2, E3 e 6k) de MAYV. A transformação do plasmídeo foi feita em Escherichia coli e sua confirmação através de uma reação da polimerase em cadeia. Após a confirmação, o DNA plasmidial foi extraído por lise alcalina e quantificado por leitura da absorbância. O plasmídeo extraído foi linearizado em reação de digestão e utilizado para transformação de K. phaffii KM71H. Observou-se a transformação em E. coli TOP10F via PCR e a confirmação da extração do DNA plasmidial. Não foram observados clones transformantes de K. phaffii KM71H. A partir disso, foi feito um novo design de plasmídeo contendo apenas a proteína E2, mas não foi observado colônias transformantes de E. coli. Palavras-chave: vírus Mayaro, Virus-like particles, Komagaetella phaffii, plasmídeo.