Teses e Dissertações
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Teses e dissertações defendidas no contexto dos programas de pós graduação da Instituição.
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Item Caracterização de fungos filamentosos do queijo minas artesanal da região da Canastra(Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-29) CESAR, Isabel Cristina da Rocha; Martin, José Guilherme Prado; 2165251978220321Produzido desde o início do século XIX, o Queijo Minas Artesanal (QMA) constitui um dos mais antigos e tradicionais queijos produzidos no Brasil. Sua produção é caracterizada pelo uso de leite cru recém-ordenhado em propriedades rurais, geralmente sendo submetido à maturação. De grande importância econômica, a fabricação do QMA é responsável pela geração de renda de inúmeros produtores rurais. Durante o processo de maturação, o complexo ecossistema microbiano dos queijos começa a se desenvolver, sendo que a diversidade microbiana determinará suas características organolépticas finais. Durante sua maturação, tanto os microrganismos iniciantes, que se desenvolvem primeiro, como aqueles microrganismos que não atuaram na acidificação inicial, participam ativamente desse processo. Dentre as principais fontes de microrganismos não adicionados intencionalmente no produto incluem-se a matéria- prima, os manipuladores, equipamentos, o ar e as salas de maturação. Dependendo das condições de umidade e temperatura das salas de maturação de queijos, os fungos podem se multiplicar rapidamente. Dessa maneira, a presença de fungos ambientais nesses locais constitui um fator importante, uma vez que são responsáveis por uma maturação desejável ou indesejável, uma vez que atuam alterando sabor, aparência e coloração do produto. Este estudo teve como objetivo caracterizar a micobiota de fungos filamentosos de QMA produzidos nos nove municípios produtores da região da Serra da Canastra. Para a obtenção dos isolados, técnicas como isolamento direto e suabe foram utilizadas. Os mesmos foram identificados por meio de sequenciamento da região ITS utilizando-se os primers ITS1 e ITS4. Dentre os isolados presentes no QMA, o fungo predominante foi Fusarium solani (21,8%), seguido de Geotrichum candidum (16,4%), Aspergillus versicolor (16,4%), Penicillium westerdijkiae (11%), Penicillium steckii (7,3%), Mucor circinelloides (3,6%), Mucor sp. (3,6%), Penicillium citrinum (3,6%), Fusarium oxysporum (3,6%), Fusarium lichenicola (1,81%), Aspergillus nomius (1,81%), Diaporthe infecunda (1,81%), Trichothecium roseum (1,81%), Debaryomyces hansenii (1,82%), Kodamaea ohmeri (1,82%) e Moniliella sp. (1,82%). A partir desses resultados, foi possível observar a variação da diversidade de espécies presentes no QMA da Serra da Canastra dentre as propriedades produtora.Item Isolamento e caracterização de fungos promotores de crescimento da rizosfera de eucalipto(Universidade Federal de Viçosa, 2018-07-19) Reis, Helbert Rocha; Costa, Maurício Dutra; 814948057932269O uso excessivo de fertilizantes causa grandes impactos econômicos e ambientais, tornando necessária a elaboração de métodos de cultivo sustentáveis. Para tal, os microrganismos promotores de crescimento e, especial, os fungos revelam-se como promissora ferramenta biotecnológica, por participarem de processos importantes no solo. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar fungos com potencial de promoção de crescimento da rizosfera de eucalipto. As amostras de solo rizosféricos foram coletadas das raízes de Eucalyptus grandis no setor de Silvicultura do Departamento de Engenharia Florestal da Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, MG, Brazil. O isolamento resultou na obtenção de 62 isolados fúngicos de interesse, diferenciados pelas características morfológicas das colônias. Os isolados foram testados quanto seu potencial de promoção de crescimento in vitro de Eucalyptus grandis e os mais promissores tiverem seus mecanismos de promoção testados. O teste de promoção de crescimento in vitro evidenciou o potencial de promoção de crescimento dos isolados testados, apresentando incremento de matéria seca total das plantas de 20 a 620%. Os isolados selecionados produziram ácido indol acético e giberelinas em proporções que variaram de 0,96 a 64,33 µg mL-1. Quanto à solubilização de fosfato, apenas um dos isolados foi capaz de solubilizar os diferentes tipos de fosfato utilizados. Todos os isolados produziram sideróforos do tipo hidroxamato, no intervalo entre 15 e 56,67 µg mL-1. No teste de compostos voláteis, apenas efeitos inibitórios ao desenvolvimento das plantas foram estatisticamente significativos. Portanto, os isolados demonstraram potencial de promoção de crescimento em diferentes níveis e por mecanismos distintos, possibilitando a exploração desses potenciais para o desenvolvimento de tecnologias aplicáveis no cultivo de eucalipto.Item Produção, purificação e caracterização de enzimas lignocelulolíticas e lipolíticas fúngicas produzidas em resíduo de macaúba (Acrocomia aculeata)(Universidade Federal de Viçosa, 2018-07-27) Lopes, Leandro de Souza; Kasuya, Maria Catarina Megumi Kasuya; http://lattes.cnpq.br/2140571383618706Espécies de basidiomicetos possuem a capacidade de crescer em uma série de resíduos agrícolas produzindo um complexo enzimático composto por várias enzimas lignocelulolíticas. Neste trabalho os fungos Lentinula edodes isolado UFV 73, Pleurotus ostreatus isolados PLO 02 e PLO 06, e Pleurotus eryngii isolado PLE 05, foram avaliados quanto a capacidade de produzirem enzimas lignocelulolíticas e lipolíticas quando crescidos em resíduo de coco de macaúba, e se essa produção era afetada pelo tempo de crescimento nesse substrato. Foi realizada a extração da proteína bruta (EEB) e este extrato foi submetido à purificação por cromatografia por exclusão molecular e posterior caracterização das enzimas quando à temperatura, pH, concentração do substrato e estabilidade térmica. Também foi avaliado se os fungos deste estudo apresentariam crescimento em meio mineral sólido no qual a única fonte de carbono foi óleo de oliva. Todos formaram halo alaranjado em meio com rodamina B, indicando a capacidade desse fungo em produzir enzimas com atividade lipolítica. O isolado UFV 73 apresentou atividade máxima de celulase, xilanase, lipase, lacase e manganês peroxidase (MnP) aos 37 dias de incubação. Após as etapas de purificação foram obtidos rendimentos de 489% (Lacase), 264% (MnP), 105% (celulase) e 9,5% (xilanase) em relação ao EEB. A faixa de pH ótimo variou entre as enzimas, sendo que lacase e lipase tiveram atividade máxima em pH 3 e 7, respectivamente. MnP, lacase e lipase tiveram atividade diretamente proporcional ao aumento da temperatura, enquanto, a atividade de celulase e xilanase não teve alteração em função desse parâmetro. A temperatura de maior atividade para MnP e lacase foi de 30 ºC, 42 ºC para lipase, 45 ºC para xilanase, e a celulase manteve-se estável em todas as temperaturas analisadas. Entre os isolados de Pleurotus, o isolado PLO 02 foi o que apresentou maiores atividades de lacase e xilanase, enquanto o isolado PLO 06 foi o que apresentou maiores atividades de lignina peroxidase, manganês peroxidase, celulase e lipase. O melhor resultado na purificação foi para a lacase alcançando rendimento de 105% (PLO 02), 315% (PLE 05) e 504% (PLO 06). As enzimas dos fungos do gênero Pleurotus apresentaram atividade constante em todas as temperaturas analisadas, na qual apenas lignina peroxidase e lipase tiveram picos de atividade em temperaturas próximas a 30 ºC. As melhores atividades para as enzimas lacase, celulase e lipase de Pleurotus ssp. foram em pH 3. A xilanase permaneceu constante em todas as faixas de pH analisadas. A LiP e a MnP tiveram pico de atividade em pH 7. De uma forma geral, a atividade das enzimas de todos os isolados diminuiu nas primeiras duas horas de incubação (redução média de 79 % na atividade de celulase, 64% na de xilanase, 85% na de MnP, 87% na de lacase, 75% na de lipase e 71% na de LiP), permanecendo constante após esse período até as 16 h. As enzimas de todos os isolados seguiram a cinética de Michaelis-Menten. Dentre todos os fungos testados quanto a capacidade de degradar o corante índigo, o EEPP de PLE 05 foi o que demonstrou maior potencial para descoloração, alcançando uma eficiência de 100% após 24 h. Este é o primeiro estudo utilizando resíduos de coco de macaúba para a produção de enzimas lignocelulolíticas e lipases, através da fermentação em estado sólido por estes fungos, os quais apresentam alto potencial de utilização desses resíduos para a produção de enzimas.Item Caracterização de fungos filamentosos do queijo minas artesanal da região da Canastra(Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-29) César, Isabel Cristina da Rocha; Martin, José Guilherme Prado; http://lattes.cnpq.br/2165251978220321Produzido desde o início do século XIX, o Queijo Minas Artesanal (QMA) constitui um dos mais antigos e tradicionais queijos produzidos no Brasil. Sua produção é caracterizada pelo uso de leite cru recém-ordenhado em propriedades rurais, geralmente sendo submetido à maturação. De grande importância econômica, a fabricação do QMA é responsável pela geração de renda de inúmeros produtores rurais. Durante o processo de maturação, o complexo ecossistema microbiano dos queijos começa a se desenvolver, sendo que a diversidade microbiana determinará suas características organolépticas finais. Durante sua maturação, tanto os microrganismos iniciantes, que se desenvolvem primeiro, como aqueles microrganismos que não atuaram na acidificação inicial, participam ativamente desse processo. Dentre as principais fontes de microrganismos não adicionados intencionalmente no produto incluem-se a matéria-prima, os manipuladores, equipamentos, o ar e as salas de maturação. Dependendo das condições de umidade e temperatura das salas de maturação de queijos, os fungos podem se multiplicar rapidamente. Dessa maneira, a presença de fungos ambientais nesses locais constitui um fator importante, uma vez que são responsáveis por uma maturação desejável ou indesejável, uma vez que atuam alterando sabor, aparência e coloração do produto. Este estudo teve como objetivo caracterizar a micobiota de fungos filamentosos de QMA produzidos nos nove municípios produtores da região da Serra da Canastra. Para a obtenção dos isolados, técnicas como isolamento direto e suabe foram utilizadas. Os mesmos foram identificados por meio de sequenciamento da região ITS utilizando-se os primers ITS1 e ITS4. Dentre os isolados presentes no QMA, o fungo predominante foi Fusarium solani (21,8%), seguido de Geotrichum candidum (16,4%), Aspergillus versicolor (16,4%), Penicillium westerdijkiae (11%), Penicillium steckii (7,3%), Mucor circinelloides (3,6%), Mucor sp. (3,6%), Penicillium citrinum (3,6%), Fusarium oxysporum (3,6%), Fusarium lichenicola (1,81%), Aspergillus nomius (1,81%), Diaporthe infecunda (1,81%), Trichothecium roseum (1,81%), Debaryomyces hansenii (1,82%), Kodamaea ohmeri (1,82%) e Moniliella sp. (1,82%). A partir desses resultados, foi possível observar a variação da diversidade de espécies presentes no QMA da Serra da Canastra dentre as propriedades produtoras.Item Prospecting of endophytic fungi producing volatile organic compounds: taxonomy, identification of volatiles and potential uses for the biological control of postharvest diseases(Universidade Federal de Viçosa, 2017-02-17) Gomes, André Angelo Medeiros; Pereira, Olinto Liparini; http://lattes.cnpq.br/2862163921055255In the search for alternative strategies to control of postharvest diseases in fruits and vegetables aimed at reducing the use of fungicides, was conducted a prospection to endophytic fungi capable of emitting volatile compounds with antimicrobial properties. Through parallel growth technique, directed towards the isolation of fungi producing volatile antimicrobials, endophytic isolates of coffee and carqueja plants were obtained and in preliminary test inhibited the growth of Aspergillus ochraceus by the emission of volatile compounds. The presence of at least three distinct species of Muscodor was verified, and a new taxon of Simplicillium by clarifying the identity of the endophytic isolates obtained through comparative studies of morphological structures, BLAST of gene sequences and phylogenetic analyzes. M. yucatanensis, Muscodor sp. and M. coffeanum isolates were obtained from coffee branches, the latter also isolated in leaves of carqueja. The antimicrobial activity of these isolates was demonstrated against Aspergillus species frequently associated with coffee beans by in vitro mycofumigation. In addition, mycofumigation with M. coffeanum CDA 741 inhibited the growth of A. ochraceus inoculated in coffee beans. The compounds present in the volatile mixture emitted by each isolate were identified by solid-phase micro-extraction gas chromatography and mass spectroscopy. Simplicillium sp. CDA 734, a new species of endophytic Cordycipitaceae from coffee plants, will be proposed through comparative studies of its morphology combined with phylogenetic analyzes. Simplicillium sp. CDA 734 inhibited the growth of A. ochraceus, A. tubingensis, A. sydowii and A. niger by mycofumigation. Among the compounds identified in the volatile mixture emitted by Simplicillium sp. CDA 734, 1-Propanone, 1-(5-methyl-2-furanyl)-, Cyclopropane, 1- ethoxy-2,2-dimethyl-3-(2-phenylethynyl)-, and 2-Propenoic acid, 3-(2-formyl-4- methoxyphenyl)-, ethyl ester, (E)- were those with the highest percentage of peak per area. In mycofumigation of organic strawberries inoculated with Colletotrichum acutatum e Botrytis cinerea, M. coffeanum CDA 739 decreases 100 and 81% the incidence of anthracnose and gray mold in the fruits, respectively. Mycofumigation through sachets containing rye grains colonized by M. coffeanum CDA 739 significantly reduced the incidence of anthracnose in fruits inoculated with C. acutatum, making possible its use in large-scale to control postharvest strawberry diseases through mycofumigation.Item Diversidade de micro-organismos endofíticos em eucalipto(Universidade Federal de Viçosa, 2015-05-29) Miguel, Paulo Sérgio Balbino; Costa, Maurício Dutra; http://lattes.cnpq.br/8644923911722035Árvores pertencentes ao gênero Eucalyptus estão entre as mais cultivadas em todo o mundo. O rápido crescimento do eucalipto e a sua adaptabilidade a vários ambientes podem ser compreendidos pelo estudo da comunidade microbiana presente nessa planta. Essa comunidade é composta por micro-organismos endofíticos e epifíticos. Endofíticos colonizam os tecidos internos de plantas saudáveis sem causar sintomas ou efeitos negativos à planta. Neste estudo, foram avaliadas a diversidade e a distribuição de fungos endofíticos em folhas e exsudatos xilemáticos de plantas de eucalipto com 18 e 72 meses de idade. As coletas foram realizadas no início do período chuvoso e durante os períodos chuvoso e seco. Avaliou-se, também, a diversidade de bactérias, fungos e leveduras em plantas provenientes de diferentes fases de desenvolvimento: jardim clonal, sombreamento, recém-saídas do sombreamento, expedição e campo. A diversidade microbiana foi relacionada à concentração de açúcares. Após extração de DNA de folhas e exsudatos xilemáticos, os amplicons obtidos por amplificação das subunidades do rRNA 16S, 18S e 26S foram utilizados na DGGE e as bandas eluídas dos géis foram sequenciadas. A avaliação da composição da comunidade bacteriana em folhas do jardim clonal, sombreamento, recém-saídas do sombreamento, expedição e campo também foi comprovada pelo isolamento e sequenciamento do rRNA 16S das colônias. A comunidade de fungos endofíticos foi afetada pela idade das plantas e pela sazonalidade. A análise filogenética mostrou a dominância de fungos dos filos Ascomycota e Basidiomycota. Neste estudo, foi apresentado o relato inédito de Marasmius alliaceus, Ganoderma boninense, Alloclavaria purpurea, Coniophora puteana, Boletus rubropunctus, Dichomitus squalens, Fusarium solani, Wallemia sebi e Teratosphaeriaecea sp. como habitantes dos exsudatos xilemáticos em plantas. No viveiro, a colonização endofítica da parte aérea de eucalipto foi dependente das fases de desenvolvimento da planta. Neste estudo, foi relatada pela primeira vez a presença das leveduras dos gêneros Pichia sp., Candida, Nilaparvata, Saturnispora sp., Malassezia, Bensingtonia e das espécies Rhodosporidium fluviale e Aureobasidium pullulans como endofíticas em eucalipto. Bactérias dos filos Firmicutes, Proteobacteria, classes Alfa, Beta e Gamma, e Actinobacteria foram identificadas na comunidade investigada. Nessa comunidade, as espécies Novosphingobium barchamii, Rhizobium grahami, Stenotrophomonas panacihumi, Paenibacillus terrigena, Paenibacillus darwinianus e Terrabacter lappili foram identificadas pela primeira vez como endofíticas. Proteobacteria foi o filo mais representativo em folhas de mudas nas fases de sombreamento e recém-saídas do sombreamento; e Firmicutes, em plantas a campo. Observaram-se correlações negativas entre os teores de glicose, frutose e sacarose e os índices de diversidade e riqueza microbianas. A distribuição das espécies de fungos, leveduras e bactérias endofíticas em eucalipto mostrou ser distinta e específica para as fases de desenvolvimento da planta. Algumas espécies bacterianas encontradas apresentam potencial para fixação de nitrogênio.Item Effects of the fungus Syncephalastrum (Mucorales: Syncephalastraceae) in nests of leafcutter ants (Formicidae: Attini)(Universidade Federal de Viçosa, 2020-02-20) Bautz, Keminy Ribett; Elliot, Simon Luke; http://lattes.cnpq.br/0133354041914015Leafcutter ants form a symbiotic nutritional mutualism with a basidiomycete fungus, growing in fungus gardens. This symbiosis interacts naturally with a range of microrganisms including some fungi that may be antagonist. Among these is the fungus Syncephalastrum, which is considered a pathogen of the fungus garden. Studies of the effects of potentially antagonist fungi on the ant-fungus mutualism are mostly performed in colonies in the absence of the queen, which may result in unrealistic conclusions about the negative effects of the fungi on the mutualist. Thus, the present study aimed to investigate the effects of Syncephalastrum sp. in the fungus garden of colonies of the leafcutter ant Acromyrmex subterraneus subterraneus in two levels of colony complexity (presence and absence of the queen). We tested the following hypothesis: that although Syncephalastrum sp. is found naturally in healthy colonies, it can cause negative effects to colonies when we apply a high concentration of its spores to the colony. Further, we hypothesized that the negative effects increase with reduced colony complexity. Thus, colonies of leafcutter ants of the species Ac. subterraneus subterraneus were divided into two levels of complexity: queenright colonies (fungus garden, queen and workers) and queenless colonies (fungus garden and workers). They were inoculated with spores of Syncephalastrum sp. or blank controls. Dependent variables measured were weight – leaves cut by ants; midden production; colony weight; presence of Syncephalastrum sp. in the midden; and survival of colonies. Our results showed that, in general, Syncephalastrum sp. negatively affected leaf cutting, waste production and the weight of colonies, with effects greater in queenless colonies. These effects, however, were not enough to compromise the survival of these colonies – all queenright and queenless colonies survived the experimental period of 28 days and indeed 96 days after that when maintained in the laboratory. To conclude, the isolate of Syncephalastrum sp. used in the present study caused negative effects to colonies of the leafcutter ant Ac. subterraneus subterraneus but did not compromise the survival of the colonies. However, our results highlight the importance of each element (fungus garden, queen and workers) in the symbiosis of leafcutter ants, mainly in studies that investigate the effect of antagonist microrganisms on leafcutter ant’s fungal cultivars. Keywords: Leafcutter ant. Fungus garden. Microrganisms. Host-parasite interactions. Acromyrmex. Leucoagaricus gongylophorus.Item Sistemática e Filogenia de Diaperinae (Coleoptera: Tenebrionidae)(Universidade Federal de Viçosa, 2020-02-28) Aloquio Junior, Sergio Zucateli; Andrade, Cristiano Lopes; http://lattes.cnpq.br/3093176817291533Tenebrionidae é a sétima maior família de besouros, com cerca de 20.000 espécies descritas, classificadas em nove subfamílias. Uma dessas subfamílias, Diaperinae, é o objeto central dessa tese. Diaperinae é uma subfamília diversa em número de espécies, mais de 2.000, em hábitats, que abrangem desde basidiomes de fungos em florestas tropicais até dunas de areias nos litorais e ambientes xéricos. Essa diversidade de hábitats reflete na imensa diversidade morfológica dessa subfamília, e em grandes problemas de classificação dessa, que é a subfamília mais taxonomicamente problemática dentro de Tenebrionidae, perdendo somente para Tenebrioninae. O objetivo com esse trabalho está em buscar caracteres de importância taxonômica e filogenética, bem como resgatar uma hipótese de relações filogenéticas para Diaperinae. Almejando atingir esses objetivos, a presente tese foi dividida em quatro capítulos. No capítulo I, uma nova espécie de Lelegeis é descrita, com descrição detalhada de estruturas pouco usadas na taxonomia do grupo, tais como terminálias abdominais de macho e fêmea, bem como dados de sua biologia. No capítulo II, Neanopidium mexicanum é redescrito, adicionando detalhes da morfologia das terminálias de macho e fêmea, além de estruturas do aparelho bucal não mencionadas na descrição original. No capítulo III, foi realizado um estudo comparativo das terminálias de fêmeas de táxons supragenéricos de Diaperinae, listando 19 caracteres com possível sinal filogenético e descrevendo as terminálias abdominais de fêmeas para cada tribo de Diaperinae. No capítulo final, 29 espécies, incluindo grupos interno e externo, foram analisadas, gerando uma matriz com 123 caracteres morfológicos, dos quais 120 foram utilizados na análise filogenética que resultou em uma única árvore. Diaperinae apareceu como polifilético e Nilioninae, uma subfamília que já foi classificada como tribo de Diaperinae, apareceu como proximamente relacionada à Diaperini. Os detalhes das relações entre os táxons estudados são discutidos no capítulo. Palavras-chave: Caracteres morfológicos. Morfologia comparada. Nova espécie.Item Micobiota core de queijos de leite cru produzidos na região da Serra da Canastra(Universidade Federal de Viçosa, 2020-07-31) Silva, João Marcos Maia; Martin, José Guilherme Prado; http://lattes.cnpq.br/1515341810497098O Queijo Minas Artesanal (QMA) da Canastra apresenta relevância histórica, sócio-cultural e econômica para o Estado de Minas Gerais. Além de ser caracterizado por uma produção exclusivamente artesanal, que tem perdurado ao longo dos últimos dois séculos, o processo de produção do QMA da Canastra também é um dos principais responsáveis por sua assinatura organoléptica, principalmente decorrente da ação de microrganismos presentes na matéria- prima e no ambiente de produção, caracterizando o terroir do QMA da Canastra. A identificação dessa comunidade microbiana, portanto, é um desafio complexo, tendo em vista a grande variedade de microrganismos presentes, bem como a não culturabilidade de grande parte da microbiota. Dessa forma, a abordagem por metagenômica se mostra uma importante ferramenta na compreensão da estrutura e função da microbiota do QMA. Este estudo teve como objetivo comparar a micobiota de queijos artesanais de leite cru produzidos nos 9 municípios que compreendem a região da Serra da Canastra, bem como identificar a existência de uma micobiota core. Para obtenção dos dados de metagenômica, foi realizada a extração de DNA total dos queijos esequenciamento da região ITS1 pela plataforma Illumina, USA. Foram analisadas 585.614 sequências, agrupadas em 211 OTUs. Um padrão de aumento dos índices de diversidade alfa em relação à altitude das propriedades produtoras foi detectado. Os gêneros Debaryomyces, Trichosporon, Fusarium e Candida foram os prevalentes nas amostras analisadas. A estrutura das comunidades microbianas dos queijos artesanais foi diversificada em todas as amostras. Foram revelados diversos padrões de co-exclusão e co-ocorrência importantes para o equilíbrio da micobiota dos queijos, além de vias metabólicas responsáveis por produzirem compostos voláteis que estão relacionados às características organolépticas previamente descritas nos queijos da Canastra. A partir desses resultados, foi possível caracterizar a micobiota core dos queijos artesanais da Canastra, além de relacionar os potenciais papéis desses microrganismos na construção da identidade organoléptica do produto. Palavras-chave: Queijos. Metagenômica. Fungos.Item Infection by Neopestalotiopsis spp. occurs on unwounded eucalyptus leaves and is favored by long periods of leaf wetness(Universidade Federal de Viçosa, 2018-07-23) Belisário, Renata; Furtado, Gleiber Quintão; http://lattes.cnpq.br/4152204343718404Brazil is the leader in the global ranking of forest productivity; however, one of the major challenges to eucalyptus production is the existence of fungal diseases. A severe epidemic caused by pestalotiopsis-like fungi was continuously observed in a forest nursery in Brazil, causing a huge impact on the eucalyptus micropropagation stages. The aims of the present study were (i) to identify the causal agent associated with pestalotiopsis leaf spot and dieback in eucalyptus; (ii) to assess the pathogenicity of the isolates to different commercial clones; (iii) to evaluate the wetness conditions that were favorable for both conidial germination and infection by the pathogen; (iv) to evaluate if pestalotioid fungi obtained from different host species could infect eucalyptus; and (v) to elucidate the fungal penetration process on eucalyptus leaves. Results showed that Neopestalotiopsis spp. are capable of causing symptoms on unwounded eucalyptus leaves and that disease development strongly requires specific environmental conditions. Therefore, our data demonstrate that long leaf wetness periods (≥ 72 h) were required to establish successful host–fungus relationships, causing expanded lesions to eucalyptus seedlings. Moreover, conidia germinated within 6 hours after inoculation and there was a tendency of direct germ tube penetration on host leaf tissues to reach a suitable infection. All of the four commercial clones tested were susceptible to the pathogen and the set of data disputes the assumption that pestalotioid fungi are weak and opportunistic. Our data imply that single- gene phylogenetic trees constructed from ITS and TEF regions showed unresolved polytomies (multifurcating branches) and poor resolution. Only TUB and multi-locus phylogenies were stable and provided sufficient resolution tree topologies. This is the first report of different phylogenetic species of Neopestalotiopsis causing dieback, leaf and stem lesions in eucalyptus seedlings. Considering the importance of this pathogen on aerial parts of eucalyptus, comprehension of the favorable conditions required for disease progress may provide a basis for developing novel management strategies in forest nurseries.