Ciências Biológicas e da Saúde
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Item Avaliação do potencial de sorodiagnóstico bovino de antígenos de Trypanosoma vivax contendo epítopos identificados por phage-display(Universidade Federal de Viçosa, 2018-02-23) Pereira, Higor Sette; Mendes, Tiago Antônio de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/5802455114309894A pecuária bovina está diretamente relacionada ao crescimento econômico nacional, uma vez que esta atividade movimentou uma quantia superior a 400 bilhões de reais entre 2012 e 2017. Doenças como a tripanossomíase bovina, causada pelo protozoário Trypanosoma vivax, acometem os rebanhos acarretando enormes prejuízos à bovinocultura. Atualmente, o diagnóstico da doença é baseado na detecção do protozoário através de técnicas parasitológicas ou moleculares. No Brasil, a tripanossomíase bovina é considerada crônica e as técnicas disponíveis para o diagnóstico se mostram insuficientes para o controle e diagnóstico da patologia. Neste trabalho, técnicas de phage display, bioinformática e imunológicas foram utilizadas para identificar peptídeos e proteínas recombinantes com alta afinidade a anticorpos do soro de animais infectados. Dentre os peptídeos clones de fagos testados, 25 foram reativos com as amostras de bovinos infectados, sendo que 11 apresentaram valor máximo de sensibilidade e especificidade. Isto posto, utilizou-se da sequência dos fagos reativos para mapear proteínas de T.vivax e expressá-las em Escherichia coli. Duas proteínas foram identificadas, sendo que a Tv2 foi isolada, purificada e titulada com as amostras infectadas. Este screening inicial indicou que a proteína Tv2 possui potencial antigênico a ser explorado, visto que os valores de absorbância foram distintos entre as amostras saudáveis, as de animais infectados com demais patologias e de tripanossomíase bovina. Logo, faz-se necessário mais ensaios para avaliar e elucidar o potencial de diagnóstico da proteína Tv2.Item Desenvolvimento de moléculas aplicadas no diagnóstico sorológico e molecular de doenças bovinas(Universidade Federal de Viçosa, 2021-04-01) Pereira, Higor Sette; Mendes, Tiago Antônio de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/5802455114309894Falhas reprodutivas que afetam animais de produção geralmente são causadas por agentes infecciosos e geram enormes prejuízos aos produtores. Entre estes patógenos estão os protozoários da tripanossomíase e neosporose bovina. As principais técnicas de diagnóstico se baseiam na percepção dos sinais clínicos, que são inespecíficos. Logo, buscamos estabelecer metodologias eficientes e de baixo custo para desenvolvimento de moléculas que possam ser aplicadas em plataformas de diagnóstico destas duas protozooses. Primeiro, utilizamos da tecnologia do phage-display para rastrear epítopos que diferenciassem soros de animais tripanossomíase positivo daqueles coletados de animais saudáveis, a fim de selecionar uma proteína de Trypanosoma vivax para uso no diagnóstico sorológico da infecção. As análises sorológicas indicaram sensibilidade de 88,9% e especificidade de 89,3%, no diagnóstico da tripanossomíase. No segundo capítulo, foi aplicado um rastreio computacional no desenho de uma proteína quimérica para o diagnóstico da neosporose. As análises dos testes sorológicos indicaram sensibilidade de 96,6% e especificidade de 97% na diferenciação dos soros. Na terceira parte, foi estabelecida uma metodologia para seleção de aptâmeros específicos para proteínas-alvo, através de uma metodologia de baixo custo, aplicada para prospecção de aptâmeros que detectem diretamente o patógeno. Um total de cinco sondas de oligonucleotídeos foram identificadas pelo método de Evolução Sistemática de Ligantes por Enriquecimento Exponencial (SELEX) aplicado a alvos proteicos. As evidências experimentais encontradas sugerem que as três metodologias são promissoras e permitem a triagem de novos testes para o diagnóstico de baixo custo, otimizados para uma detecção Point-of-care (POC). Palavras-chave: Phage-display. Aptâmero. Proteína quimérica. Triagem computacional