Fisiologia Vegetal
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Item Caracterização anatômica e bioquímica da hiperidricidade em morangueiro (Fragaria x ananassa Duch.) e videira (Vitis vinifera L. x Vitis rotundifolia) propagados in vitro(Universidade Federal de Viçosa, 2006-02-24) Barbosa, Letícia Mascarenhas Pereira; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4733928U9; Motoike, Sérgio Yoshimitsu; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728221T8; Finger, Fernando Luiz; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783681Y0; Silva, Luzimar Campos da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799707J8; Peixoto, Paulo Henrique Pereira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4780011D1Plantas propagadas in vitro são freqüentemente afetadas por condições de estresse que podem levar ao desenvolvimento de hiperidricidade. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivos investigar a influência de agentes gelificantes, da citocinina 6-benzilaminopurina (BAP) e do tipo de vedação dos frascos sobre a indução de hiperidricidade em videira e morangueiro. Para tal, foram utilizadas plantas de morangueiros Dover e Burkley e do porta-enxerto de videira VR043 43 , mantidas in vitro em sala de crescimento a 25 ± 2 ºC, sob fotoperíodo de 16 h e irradiância 36 mmol m-2 s-1. Explantes de morangueiro foram cultivados em meio contendo sais e vitaminas de MS, 30 g L-1 de sacarose, 100 mg L-1 de inositol, acrescido de Ágar (6,5 g L-1) ou Phytagel® (2,5 g L-1) e BAP em diferentes concentrações (0,5; 1,0; 2,0 e 3,0 mg L-1). Segmentos de entrenós de videira foram transferidos para meio MS meia força ou para meio Q & L, com as mesmas quantidades de sacarose e mioinositol, acrescidos de Ágar (6,5 g L-1) ou Phytagel® (2,5 g L-1) e BAP (1,0 ou 2,0 mg L-1). Foram mensurados os níveis de etileno no interior dos frascos aos 5, 10, 20, e 30 dias de cultivo, para morangueiro, e aos 3, 7, 14, 20, 30 e 40 dias, para videira. Após 35 dias, foram realizadas analisadas bioquímicas (SOD, CAT, POD, isoenzimas, peroxidação de lipídios, teor de clorofila), estruturais (microscopia fotônica e eletrônica de varredura), além da análise das caracteristicas morfológicas da hiperidricidade. Para estudar a influência do tipo de vedação no desenvolvimento de hiperidricidade, plantas de videira e morangueiro foram transferidas para frascos contendo meio indutor e não indutor de hiperidricidade. Os frascos foram vedados com tampa rígida de polipropileno, com e sem membrana permeável a trocas gasosas ou duas camadas de filme pástico de PVC. Foram mensurados os níveis de etileno aos 7, 20 e 40 dias de cultivo e, após 35 dias, foram analisados massas fresca e seca dos brotos, peroxidação de lipídios, sistemas enzimáticos (MDH, ADH e POD), extravasamento de solutos e características ultraestruturais. A adição de BAP no meio de cultivo induziu ao estresse oxidativo que, por sua vez, causou mudanças no estado fisiológico de plantas de morangueiro e videira, caracterizadas por aumento da atividade de enzimas antioxidantes e da peroxidação de lipídios, alterações em nível celular, malformações de estômatos e de células epidérmicas, além de aumento na produção de etileno no interior dos frascos de cultivo. O tipo de vedação utilizado influenciou o ambiente interno dos frascos e, conseqüentemente, o desenvolvimento de hiperidricidade. Nos frascos vedados com membrana permeável, mesmo em meio indutor de hiperidricidade, não foram observadas características morfológicas desse fenômeno, embora tenha sido observado aumento da atividade de peroxidases e de extravasamento de eletrólitos em plantas de videira, submetidas a este tratamento. A vedação de frascos com tampa rígida de polipropileno ou com filme de PVC, em presença de BAP, promoveram maior índice de hiperidricidade, confirmando que o tipo de vedação dos frascos, em combinação com componentes do meio e com condições de cultivo, estão relacionados ao surgimento dessa desordem fisiológica em plantas cultivadas in vitro.Item Germinação in vitro, organogênese em explantes radiculares e transformação genética de Passiflora cincinnata e P. edulis(Universidade Federal de Viçosa, 2009-08-13) Silva, Crislene Viana da; Silva, Luzimar Campos da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799707J8; Kasuya, Maria Catarina Megumi; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4721444T5; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; http://lattes.cnpq.br/2297061991181541; Bruckner, Claudio Horst; http://lattes.cnpq.br/8023964479574271; Xavier, Aloisio; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782565D0; Dias, Leonardo Lucas Carnevalli; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4764363H5O presente trabalho teve por objetivo o estudo da influência de diferentes vedações na germinação in vitro, o estabelecimento de um protocolo de regeneração in vitro de explantes radiculares, a implementação de um protocolo de transformação genética mediada por Agrobacterium rhizogenes e A. tumefaciens, além de testar diferentes concentrações do surfactante Pluronic® F68 na regeneração de duas espécies de maracujazeiros (Passiflora cincinnata Masters e P. edulis Sims f. flavicarpa Degener. Quanto a germinação in vitro, os sistemas de vedação mais efetivos para proporcionar maior comprimento de hipocótilos e de raízes foram as embalagens sanfonadas de polipropileno com filtro microbiano e placa de Petri com fita hipoalergênica, por promoverem trocas gasosas mais efetivas e conseguinte produção de plântulas mais vigorosas. A organogênese em explantes radiculares em P. cincinnata e P.edulis f. flavicarpa ocorreu pela via direta, confirmada por estudos anatômicos e pela microscopia eletrônica de varredura. Ficou evidenciada a diferenciação de brotações a partir das células do câmbio vascular com intensas divisões celulares no plano periclinal e com típica conexão vascular com os explantes. As respostas dos genótipos estudados ocorreu em épocas diferentes, sendo um processo assincrônico no qual a suplementação do regulador de crescimento 6-benzilaminopurina (BA) ao meio de cultivo é indispensável para a resposta organogênica de explantes radiculares. Brotações induzidas em meio semi-sólido e alongadas em meio líquido sob agitação foram enraizadas em substrato de fibra de coco e Plantmax® (1:1), e aclimatizadas com sucesso. A citometria de fluxo indicou que não houve variação na quantidade de DNA dos regenerantes aclimatizados de todos os genótipos. A quantidade de DNA (pg) nos regenerantes de P. cincinnata (2,99 pg) e P. edulis f. flavicarpa (3,26- 3,28 pg) foram compatíveis com as quantidades de DNA das plantas controle, obtidas por via seminífera. Transformação genética de maracujazeiro utilizando Agrobacterium rhizogenes R1601 carregando a construção quimérica nos-nptII- xiiinos, o qual confere resistência à canamicina, e A. tumefaciens GV3101 carregando o gene APETALA com construção quimérica pROKII-AP1-GUSint, conferindo resistência à higromicina. Para a eliminação das agrobactérias após a fase de pré e co-cultivo, os antibióticos Meropenem e Cefotaxima foram mais efetivos na eliminação das bactérias, não interferindo na regeneração adventícia. O diagnóstico de PCR confirmou a presença do T-DNA e Ri-TDNA em todos os transformantes de P. cincinnata e P. edulis f. flavicarpa. Esse sistema mostra-se promissor para o estudo de genes com funções desconhecidas, bem como o estudo dos genes envolvidos na via da arquitetura floral, e também a facilidade de manipulação das raízes hairy root e a possibilidade de regeneração adventícia de brotações e de plantas transformadas. A utilização de Pluronic® F-68 na regeneração de brotos mostrou-se eficiente, sendo que para a espécie P. cincinnata as concentrações mais eficientes foram as mais baixas do surfactante (0,001 e 0,01%) enquanto que para P. edulis f. flavicarpa a resposta variou entre os genótipos estudados.Item Influência de 6-benzilaminopurina na morfogênese in vitro e na ocorrência de hiperidricidade no porta-enxerto VR043-43 (Vitis vinifera x Vitis rotundifolia).(Universidade Federal de Viçosa, 2010-03-31) Fernandes, Katryne Rates Goulart; Silva, Luzimar Campos da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799707J8; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; http://lattes.cnpq.br/2567037472204692; Costa, Franciscleudo Bezerra da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4765235U9; Ribeiro, Dimas Mendes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4778644J9; Buselli, Reginaldo Alves Festucci; http://lattes.cnpq.br/8711829719442865A utilização de citocininas no cultivo in vitro de plantas pode induzir, em variadas concentrações, a ocorrência de alterações estruturais e morfológicas, comprometendo o desenvolvimento e viabilidade do material obtido. Este trabalho objetivou caracterizar a influência da 6-benzilaminopurina (BAP) na morfogênese e nutrição do porta-enxerto de videira VR043-43 (Vitis vinifera x Vitis rotundifolia). Utilizou-se plantas obtidas a partir do cultivo de segmentos nodais em meio indutor de hiperidricidade e em meio indutor de calogênese, suplementados com BAP, e em meio sem regulador. Em meio indutor de calogênese foram mensurados a massa fresca e seca das plantas, os teores de macro e micronutrientes e os níveis de oxigênio e dióxido de carbono na atmosfera dos frascos aos 15, 30 e 45 dias. Em meio indutor de hiperidricidade determinou-se os teores de macro e micronutrientes aos 45 dias de cultivo, além da análise estrutural das folhas obtidas. Os resultados demonstraram que o BAP comprometeu a organogênese, promovendo calogênese e inibindo a rizogênese, o alongamento dos entrenós e a expansão foliar. Além disso, o BAP alterou a relação da massa fresca e seca da parte aérea/sistema radicular em detrimento dos ramos; alterou a nutrição da parte aérea das plantas, induzindo a formação de calos, os quais representaram uma barreira mecânica à absorção dos elementos do meio de cultivo. Houve maior acúmulo de CO2 e consumo de O2 na atmosfera dos frascos com citocinina, em meio indutor de calogênese, refletindo a elevada taxa respiratória dos calos, o que comprometeu o crescimento e o desenvolvimento. Em meio indutor de hiperidricidade, o BAP promoveu alterações na morfologia das plantas de videira, como múltiplas brotações, espessamento da lâmina foliar e calejamento na base dos explantes; e alterações estruturais, como desorganização das células parenquimáticas no mesofilo e estômatos dispostos acima das demais células da epiderme. As folhas desenvolvidas em meio contendo BAP não acumularam amido em relação ao controle, no entanto houve maior lignificação nos feixes vasculares e maior acúmulo de compostos de coloração esverdeada em reação com azul de toluidina, concomitante ao aumento na concentração desta citocinina. Conclui-se que o BAP promoveu alterações na morfogênese e no desenvolvimento das plantas. Os calos formados em meio com BAP promoveram alteração da absorção e translocação de nutrientes para a parte aérea das plantas, bem como alteração das taxas respiratórias. Houve indução de hiperidricidade pelo BAP, evidenciada por alterações morfológicas, e alteração estrutural das folhas e da forma e disposição das células-guarda.Item Influência de trocas gasosas, do etileno e de poliaminas na morfogênese in vitro de pimenteira ornamental (Capsicum annuum L.)(Universidade Federal de Viçosa, 2012-02-16) Batista, Diego Silva; Rêgo, Mailson Monteiro do; http://lattes.cnpq.br/5835503195495055; Dias, Leonardo Lucas Carnevalli; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4764363H5; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; http://lattes.cnpq.br/1993758836984909; Saldanha, Cleber Witt; http://lattes.cnpq.br/1342735370027332O presente trabalho teve por objetivo avaliar a influência do etileno, das poliaminas e das trocas gasosas na morfogênese in vitro de pimenteira ornamental. Sementes de Capsicum annuum L. foram desinfestadas e inoculadas em meio MS suplementado com vitaminas B5, mio-inositol, sacarose e ágar. Para a organogênese, explantes cotiledonares e hipocotiledonares foram cultivados no meio descrito, porém adicionado de 6-benziladenina (BA) e ácido indolacético (AIA). O efeito das trocas gasosas foi avaliado utilizando três tipos de vedações dos frascos: tampas de polipropileno rígido sem membrana, com uma e com duas membranas (MilliSeal® AVS-045 Air Vent). Análises histológicas, de pigmentos fotossintéticos e de características morfológicas foram realizadas. Também foram realizados tratamentos com inibidores (aminoetoxivinilglicina AVG, tiossulfato de prata - STS), sequestrador (perclorato de mercúrio PM) e promotor da produção de etileno (ácido 1-carboxílico 1-aminociclopropano - ACC), além da adição de poliaminas (putrescina, espermidina e espermina) e de seu inibidor (metilglioxal-bis-guanil hidrazona MGBG) ao meio de regeneração. Plântulas cultivadas em frascos com tampas com membranas apresentaram estruturas anatômicas diferenciadas e crescimento mais vigorosos comparados ao controle. Estes tratamentos resultaram em plântulas maiores, com folhas mais expandidas, maior número de folhas, maior massa fresca, maior teor de massa seca e maior quantidade de pigmentos fotossintéticos. Todavia, na indução de organogênese os tipos de vedação não foram significativos, tendo o tipo de explante sido mais determinante na formação de gemas e calos. AVG, STS e o PM induziram alta frequência de regeneração. O ACC e o MGBG induziram menor taxa de regeneração, elevada calogênese e apresentaram níveis mais altos de etileno. Por outro lado, quando se adicionou as poliaminas ao meio de cultura, os níveis de etileno foram mais baixos que o controle e a frequência de regeneração foi mais alta. Os resultados deste estudo mostram que maiores trocas gasosas são benéficas no cultivo in vitro de Capsicum annuum L. e que os níveis endógenos de etileno e poliaminas interferem diretamente nas respostas morfogênicas durante a regeneração in vitro desta espécie.Item Influência do etileno e de poliaminas sobre a morfogênese in vitro do maracujá (Passiflora sp.)(Universidade Federal de Viçosa, 2006-02-21) Dias, Leonardo Lucas Carnevalli; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4764363H5; Floh, Eny Iochevet Segal; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788368T5; Barros, Raimundo Santos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787859T6; Picoli, Edgard Augusto de Toledo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4768537Z5; Vieira, Gerival; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783681P2O presente trabalho teve por objetivo investigar as possíveis interrelações entre etileno e poliaminas sobre a capacidade morfogênica de explantes de hipocótilo de duas espécies de maracujazeiro (Passiflora cincinnata Masters e Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Degener população FB-100). Explantes de hipocótilo retirados de plântulas germinadas in vitro foram cultivados em meio contendo sais MS, complexo vitamínico B5, 30 g.L-1 de sacarose, 100 mg.L-1 de inositol, 10% (v/v) de água de coco, 0,5 mg.L-1 6-benzilaminopurina (BAP) e solidificado com 2,5 g.L-1 de Phytagel. Os níveis de etileno e poliaminas foram mensurados ao longo do período de indução da organogênese. Concomitantemente, foi realizada a histologia com a fixação do material vegetal em F.A.A. 50% e acompanhamento da ontogênese das gemas adventícias, de forma a se caracterizar os diferentes eventos envolvidos na rediferenciação celular e a regulação dos níveis de poliaminas e etileno. Também foram realizados tratamentos com inibidores (aminoetoxivinilglicina AVG, tiossulfato de prata - STS), seqüestrador (perclorato de mercúrio PM) e promotor da produção de etileno (ácido 1-carboxílico 1-aminociclopropano - ACC), além da adição de poliaminas (putrescina, espermidina e espermina) e de seu inibidor (metilglioxal-bis-guanil hidrazona MGBG) ao meio de cultivo. Foi observado atraso nas respostas morfogênicas em P. edulis f. flavicarpa em comparação com P. cincinnata, sendo coincidente com o atraso observado nas concentrações de poliaminas e etileno mensurados naquela espécie. As respostas morfogênicas dos explantes foram semelhantes nos tratamentos com inibidores e seqüestrador, sendo observado comprometimento da organogênese apenas no meio de cultivo com adição isolada de ACC. Nos tratamentos com poliaminas não foi observada diferença em relação ao tratamento controle. Todavia, o tratamento com MGBG apresentou respostas semelhantes àquele com ACC levando à redução da resposta morfogênica. Observou-se que culturas em estádios de rediferenciação, caracterizadas por apresentarem altas taxas de expansão e alongamento, apresentaram níveis elevados de etileno associados a altos níveis de poliaminas, sugerindo que a competição entre as duas rotas biossintéticas é altamente regulada e plástica, e que a interação seria a peça chave para a definição da diferenciação.Item Morfogênese in vitro e transformação genética de citros mediada por Agrobacterium tumefaciens(Universidade Federal de Viçosa, 2008-04-16) Oliveira, Maria Luiza Peixoto de; Finger, Fernando Luiz; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783681Y0; Costa, Márcio Gilberto Cardoso; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4762603P4; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4778992A7; Dias, José Maria Moreira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783068Z8; Picoli, Edgard Augusto de Toledo; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4768537Z5; Motoike, Sérgio Yoshimitsu; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728221T8Os protocolos utilizados para transformação genética de citros têm resultado numa baixa eficiência de transformação, com obtenção de pequeno número de plantas transgênicas, além de utilizarem material juvenil como fonte de explantes necessitando de um longo período para frutificação e conseguinte avaliação de uma característica de interesse introduzida. Um protocolo ideal para a transformação de citros seria baseado na utilização de tecido adulto como fonte de explantes, que reduziria o longo período de juvenilidade, e abreviria o tempo para a análise da característica transgênica incorporada. O objetivo inicial do presente trabalho foi o estabelecimento de um sistema de regeneração in vitro a partir de segmentos internodais de plantas adultas de três variedades de laranja doce (Citrus sinensis L. Osb.) e limão Cravo (Citrus limonia Osb.), visando à otimização da metodologia de transformação. Para a indução de organogênese, investigamos diferentes meios de cultura associados a reguladores de crescimentos (BAP e ANA) e antibióticos β- lactâmicos (timentim, cefotaxima, meropenen e augmentina), utilizados na supressão do crescimento bacteriano e na resposta morfogênica de tecidos adultos de C. sinensis e C. limonia. Demonstrou-se que a indução in vitro de brotações em tecidos adultos de citros foi afetada pelo genótipo, reguladores de crescimento, formulação do meio e a pela incorporação de antibióticos no meio de cultura. Além disso, foram adequados protocolo otimizados para a transformação genética de segmentos de epicótilo e cotilédones imaturos via Agrobcaterium tumefaciens. Para a otimização do protocolo envolvendo explantes provenientes de segmentos de epicótilo, alguns fatores foram investigados, como; o uso de sonicação, infiltração a vácuo e sonicação associada com infiltração a vácuo, comparando-se ao método tradicional de transformação envolvendo Agrobacterium (co- cultivo ou imersão na solução bacteriana) durante o co- cultivo de explantes de laranja doce Pineapple , e citrumelo Swuingle . A utilização de sonicação por 2 segundos, seguidos por 10 minutos de infiltração a vácuo, teve efeito positivo na eficiência de transformação (8.4%) para laranja Pineapple . Para citrumelo Swuingle a eficiência de transformação também foi aumentada com a combinação de sonicação e infiltração a vácuo (9,6%), mas não foi suficiente para obter uma percentagem maior que a utilização somente da metodologia tradicional de co-cultivo, com eficiência de transformação de 11,2%. Finalmente, estudou- se fatores que pudessem influenciar o processo de indução da morfogênese e a eficiência de transformação em cotilédones imaturos de grapefruit Duncan . Para a indução da organogênese a combinação de 2 mg l-1 BAP, 1 mg l-1 KIN and 1 mg l-1 AIA promoveu a maior freqüência de cotilédones produzindo brotações (96%) e número de brotações por explante (5,8), utilizando explantes cultivados dorsalmente em contato com o meio de cultura por 3 semanas no escuro, seguido por mais 3 semanas em regime de 16/8 horas (luz/ escuro). Os parâmetros analisados para aumentar a eficiência de transformação mediada por Agrobacterium resultaram em uma alta eficiência de transformação obtida quando os expantes foram submetidos a 15 minutos de infiltração a vácuo em presença da Agrobacterium (OD600nm 0,5), co- cultivados por 3 dias em meio contendo 100 μM de acetoseringona e transferidos para meio de seleção, constituído do meio MS contendo 30 mg l-1 de canamicina, 12,5 mg l-1 de meropenen, 2 mg l-1 BAP, 1 mg l-1 KIN and 1 mg l-1 AIA.Item Morfogênese in vitro em tomateiro e berinjela e silenciamento gênico da sintase do mio-inositol-fosfato por RNAi em tomateiro(Universidade Federal de Viçosa, 2009-02-18) Fernandes, Denise; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Aragão, Francisco José Lima; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785487A7; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; http://lattes.cnpq.br/4603403455457655; Brommonschenkel, Sérgio Hermínio; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4780948Y4; Caixeta, Eveline Teixeira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728636Z7; Buselli, Reginaldo Alves Festucci; http://lattes.cnpq.br/8711829719442865; Iarema, Lourdes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4706501P2Este trabalho teve como objetivo: i) a otimização das condições de desinfestação de seentes de tomateiros (Solanum lycopersicum Mill.) e berinjela (Solanum melongena L.); ii) a avaliação da influência do tipo de vedação sobre a qualidade das plântulas e explantes oriundos destas; iii) a avaliação do efeito da sonicação sobre a morfogênese in vitro de explantes de tomateiros e sobre a viabilidade de células de Agrobacterium tumefaciens; iv) o estabelecimento de parâmetros para possibilitar a transformação genética mediada por A. tumefaciens visando ao silenciamento gênico mediado por RNAi da sintase do mio-inositol-fosfato, utilizando-se o gene GmMIPS1. Na desinfestação das sementes de berinjela, comprovou-se que tratamentos utilizando imersão em água deionizada são mais eficientes que imersão em solução de 0,13% v/v de cloro. A utilização de desinfestação a seco, em câmara de gás cloro, não é indicada para a assepsia de sementes de tomate e berinjela, pela toxicidade do gás às sementes, comprometendo sua germinação. Observou-se que as trocas gasosas favorecem o desenvolvimento das plântulas e geram explantes em maior número e de melhor qualidade para utilização de transformação genética via Agrobacterium tumefaciens. Ao se utilizar a técnica de SAAT ( Sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation ), os explantes e a suspensão bacteriana foram expostos a tempos de exposição ao ultra-som (0, 3, 6 e 9 segundos). Verificou-se que o intervalo de 3 a 6 segundos é o indicado para se utilizar em transformação genética, pois resultou nas maiores áreas de expressão transiente avaliada pela análise histoquímica in situ do gene GUS, maior número de estruturas regeneradas e menor mortalidade nas células de A. tumefaciens. O processo foi otimizado quando a imersão em suspensão de A. tumefaciens foi realizado após 24 horas de exposição ao ultra-som. Para ser possível a seleção de transformantes foi estabelecida a curva de letalidade ao agente higromicina e a concentração encontrada para seleção de células não transformadas foi de 7,5 mg.L-1 em explantes cotiledonares, hipocotiledonares e foliares de tomateiro. Dosagens acima de 7,5 mg.L-1 mostratam-se tóxicas, resultando em explantes com áreas cloróticas e necróticas. A fim de verificar a relação do gene MIPS com o desenvolvimento de sementes, a transformação genética foi realizada com sucesso em tomateiro e berinjela, via A. tumefaciens contendo plasmídeo com construção de silenciamento por siRNA para o gene MIPS, utilizando uma seqüência conservada do gene de soja GmMIPS. A natureza transgênica dos regenerantes primários foi confirmada mediante o teste histoquímico in situ de GUS e análise de PCR com oligonucleotídeos iniciadores específicos. A análise de expresão gênica confirmou o silenciamento do gene MIPS, e a análise morfológica dos frutos confirmou a hipótese do relacionamento da mio-inositol-fosfato-sintase com o desenvolvimento de sementes. Porém, conforme detectado pela técnica de citometria de fluxo, o processo de regeneração in vitro adotado no protocolo de transformação de tomateiro, ao contrário de berinjela, induziu poliploidia em algumas plantas transgênicas.Item Propagação in vitro de antúrio (Anthurium andraeanum cv. Eidibel) via embriogênese somática(Universidade Federal de Viçosa, 2010-02-23) Pinheiro, Marcos Vinícius Marques; Carvalho, Ana Cristina Portugal Pinto de; http://lattes.cnpq.br/6523960451220526; Ventrella, Marília Contin; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763436A2; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; http://lattes.cnpq.br/2241316326554301; Xavier, Aloisio; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782565D0; Iarema, Lourdes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4706501P2O presente trabalho teve como objetivo estabelecer a propagação in vitro de Anthurium andraeanum cv. Eidibel via embriogênese somática, avaliando a indução das culturas embriogênicas (Experimento I); pré-maturação dos embriões somáticos (Experimento II); e maturação dos embriões somáticos e posterior regeneração das plantas (Experimento III). No experimento I, adotou-se a subdivisão de plantas de antúrio estabelecidas in vitro, para a obtenção das fontes de explante. Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado (DIC), em disposição fatorial 53, representados por cinco tipos de explantes (folhas inteiras e seccionadas ao meio; pecíolos; segmentos nodais com uma gema; e segmento de raiz sem o ápice radicular; cada explante com ~ 1,0 cm); cinco auxinas (AIA, ANA, AIB, 2,4-D e Picloram) em cinco concentrações (0,0; 2,5; 5,0; 7,5 e 10 μM) e cinco testemunhas adicionais, ou seja, cada fonte de explante adicionada ao tratamento sem auxina. A repetição foi composta por cinco placas de Petri (90 x 15 mm), contendo 25 mL de meio Pierik, e cada unidade experimental nove explantes/placa, mantidas em sala de crescimento, a 25 ± 2 ºC, no escuro. Após 60 dias de cultivo, avaliou-se a presença de calos embriogênicos, brotos, raízes e massa freca dos calos produzidos. A produção dos primeiros calos foi observada em explantes de pecíolo e segmento nodal, e a sua produção ocorreu, principalmente, nos meios acrescidos de ANA e Picloram, nas concentrações de 7,5 e 10,0 μM, respectivamente. Em 10,0 μM, não houve diferença estatística entre os tratamentos com as auxinas ANA, 2,4-D e Picloram, sendo superiores aos demais. Para a produção de brotos, o explante com a maior média foi o segmento nodal, em meio sem a adição de auxina. Observaram-se a proliferação de raízes em explantes de segmento nodal e radicular, principalmente em meio suplementado com AIB. A partir de análise histoquímica, determinaram-se, por meio da dupla coloração com carmim acético e azul de Evans e teste de lugol, características embriogênicas dos calos. No entanto, observou-se em cortes histológicos que os calos produzidos em meio Pierik acrescido de 10,0 μM de ANA apresentaram embriões bem desenvolvidos, com presença de procâmbio e protoderme, demostrando sinais de polarização. Para a proliferação das culturas embriogênicas, foi adotada a subdivisão dos calos selecionados, e inoculados em placas de Petri com meio de cultura Pierik acrescido de 10,0 μM de ANA, em cinco subcultivos sucessivos, com 60 dias cada. No experimento II, foram inoculados os calos produzidos na fase de proliferação, com cerca de 90 mg, em Erlenmeyers de 125 mL, contendo 25 mL de meio de cultura líquido, Pierik e AA2,com diferentes concentrações de 2,4-D (0,00; 4,52; 9,05 μM) e cinetina, (0,00; 0,47; 2,32 μM), analisados em DIC com fatorial 2 x 3 x 3, mantidos em sala de crescimento a 25 ± 2 ºC, no escuro, permanecendo sob agitação orbital de 100 rpm. Avaliadas aos 45 dias de cultivo, quanto a: massa dos calos embriogênicos; produção de embriões somáticos; produção de embriogênese somática secundária; porcentagem de oxidação; coloração, textura dos calos embriogênicos e desenvolvimento dos embriões somáticos produzidos. A produção de embriões somáticos foi superior no meio Pierik acrescido de 0,47 μM de cinetina, observando-se a menor produção de embriogênese somática secundaria, menor porcentagem de oxidação, com textura friável dos calos, sendo um dos tratamentos com maior desenvolvimento dos embriões, comprovado pelos cortes histológicos, no qual observaram embriões no estádio globular, com sinais de polarização, até embriões maturados, com a presença de folha primária e zona meristemática. No Experimento III, os calos produzidos na fase de pré-maturação foram inoculados, em Erlenmeyers contendo 25 mL de meio líquido e semi-sólido, Pierik e AA2, suplementados com as concentrações de cinetina (0,0; 1,16; 2,32; 4,64 μM), formando um DIC com fatorial 2 x 2 x 4, mantidos em sala de crescimento, a 25 ± 2 ºC, sob fotoperíodo de 16 horas, irradiância luminosa de 36 μmol m-2 s-1. Os meios líquidos permaneceram sob agitação orbital de 100 rpm. Avaliou-se aos 45 dias de cultivo quanto ao número de calos com embriões maturados; porcentagem de conversão em plantas; porcentagem de oxidação; e número de embriões com maturação completa. Recomenda-se o meio Pierik suplementado com 2,32 μM de cinetina, no qual, foi superior para o número de calos embriogênicos com embriões maturados, número de embriões com maturação completa e principalmente pela melhor conversão em plantas. As plantas produzidas foram aclimatizadas ex vitro na bancada do laboratório e transferidas, no final de dois meses, para casa de vegetação. O presente estudo evidenciou que a indução e proliferação de calos embriogênicos a partir de segmentos nodais de antúrio foi dependente do tipo e da concentração das auxinas. Para as fases de pré-maturação e maturação dos embriões somáticos, é necessária a retirada ou a redução da auxina no meio de cultura, adicionando concentrações ideais de citocinina para cada fase, e assim, obtendo máxima conversão dos embriões somáticos em plantas, no final do processo.Item Respostas morfofisiológicas de videiras cultivadas sob diferentes condições in vitro(Universidade Federal de Viçosa, 2007-07-20) Santos, Roniscley Pereira; Silva, Luzimar Campos da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799707J8; Cano, Marco Antonio Oliva; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787546T4; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4734986P4; Ribas, Rogério Ferreira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4777511A8; Miranda, Ricardo Motta; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787552P1O presente trabalho teve por objetivo avaliar o comportamento morfofisiológico de dois porta-enxertos de videiras, Vitis vinifera x Vitis rotundifolia VR 043-43 e Vitis riparia, quando cultivadas sob condições de estresse in vitro, para isso foram realizados três espxperimentos distintos. No primeiro foi avaliado o efeito de quatro tipos de vedações: 1) filme plástico de PVC transparente; 2) tampa rígida de polipropileno autoclavável sem orifício (TN); 3) tampa rígida de polipropileno com um (TMF1) ou dois (TMF2) orifícios de 10 mm, cobertos por membranas de 0,22 μm de poro, permeáveis às trocas gasosas, associadas à concentrações de sacarose (0; 10; 20 e 30 g.L-1), em experimento fatorial 4 x 4, em Delineamento Inteiramente Casualizado (DIC). Após 60 dias de cultivo, foram avaliadas as características número de folhas, área foliar (mm2), comprimento da parte aérea das plantas (cm), comprimento do sistema radicular (cm), teores de clorofila a, b, totais e de carotenóides, volume final do meio de cultivo (mL) e massa seca das plantas (g). No segundo experimento foi estudado o efeito do etileno sobre o comportamento morfofisiológico dessas videiras pela adição do promotor (ACC) ou do inibidor (STS) de etileno no meio de cultivo (1/2MS; 1/2MS + 10 µM de STS e 1/2MS + 3 µM de ACC). Para tal, foram avaliadas as seguintes características: número de folhas, número de entrenó, área foliar, comprimento da parte aérea, comprimento do sistema radicular, massa fresca da parte aérea, massa fresca da raiz, porcentagem de investimento em massa para a parte aérea e raiz, determinação de clorofilas a, b, totais e carotenóides, mensuração de etileno acumulado (aos 7; 14; 21; 28; 35; 42; 49 e 56 dias após inoculação dos explantes - DAI), massa seca da parte aérea, massa seca da raiz, análises anatômicas (microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura). Por último, foi montado um experimento do tipo fatorial 5 x 2, sendo cinco níveis de irradiâncias e dois meios de cultivo, com objetivo de valiar o comportamento de plantas hiperídricas e plantas normais de videiras em distintas irradiâncias. A interação entre as concentrações de sacarose até 20 g.L-1 e as vedações TMF1 e TMF2, permeáveis às trocas gasosas, infuenciou positivamente nos parâmetros fisiológicos de crescimento das plantas propagadas in vitro, conferindo-as características favoráveis à aclimatização ex vitro. O conteúdo de clorofilas totais, número de folhas, área foliar, comprimento da parte aérea, massas frescas e secas foram significativamente reduzidos quando ambas as cultivares foram desenvolvidas em meio de cultivo contendo ACC, assim como aumento na altura das estruturas anatômicas das folhas e deformações nos estômatos. Plantas induzidas à hiperidricidade apresentaram características morfofisiológicas alteradas em relação às normais, sendo que elevados níveis de irradiâncias induziram alterações em ambas as plantas. Níveis elevados de irradiância favorecem a fotoinibição em videiras cultivadas in vitro.