Navegando por Autor "Andre, Cleriane"
Agora exibindo 1 - 2 de 2
- Resultados por Página
- Opções de Ordenação
Item Adesão, formação e composição de biofilme por Staphylococcus aureus em poliestireno na presença de nisina(Universidade Federal de Viçosa, 2015-02-24) Andre, Cleriane; Vanetti, Maria Cristina Dantas; http://lattes.cnpq.br/7047442323047711Staphylococcus aureus é um patógeno humano oportunista que apresenta riscos a saúde humana, é capaz de aderir em superfícies bióticas e abióticas e formar biofilmes, tornando as células mais protegidas e de difícil remoção. Células liberadas do biofilme podem se constituir em importante fonte de contaminação de alimentos, comprometendo a qualidade e a segurança dos mesmos. O objetivo deste estudo foi verificar o efeito da bacteriocina nisina e dos sanitizantes hipoclorito de sódio e ácido peracético, em concentrações subinibitórias, sobre a hidrofobicidade da superfície de poliestireno, sobre o crescimento e formação de biofilmes por estirpes de S. aureus e ainda, verificar a interferência da nisina sobre a composição e estrutura do biofilme desse patógeno. Células de Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 foram usadas como referência para formação de biofilmes. O cultivo das bactérias foi feito em caldo Luria-Bertani (LB) ou em meio sintético (MS). A presença de genes de adesão foi determinada pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e os três genes avaliados, icaA, icaD e clfB, foram encontrados nas estirpes COL e FRI 722 de S. aureus, enquanto a estirpe Embrapa 4018 de S. aureus e em S. epidermidis, apenas o gene icaA foi identificado. A hidrofobicidade da superfície de poliestireno foi avaliada por meio da medida do ângulo de contato e constatou-se que o meio LB reduziu a hidrofobicidade da superfície, dificultando a observação do efeito dos antimicrobianos sobre a mesma. O tratamento da superfície de poliestireno com MS adicionado de 1,34 mg/L de nisina reduziu a adesão de S. aureus. Concentrações subinibitórias de 2,01 mg/L; 1.500 mg/L e 0,40 mg/L respectivamente dos antimicrobianos nisina, hipoclorito de sódio e do ácido peracético foram adicionadas isoladamente ou combinadas entre si ao caldo LB e constatou-se a diminuição da formação de biofilmes pela cultura mista de estirpes de S. aureus e por S. epidermidis em microplacas de poliestireno quando os antimicrobianos agiram isoladamente. A composição de polissacarídeos e DNA nos biofilmes de S. aureus e S. epidermidis foi alterada quando o cultivo ocorreu na presença de 2,01 mg/L de nisina. Entretanto, o conteúdo em proteínas nos biofilmes formados pela cultura viiimista das estirpes de S. aureus estudadas ou por S. epidermidis não foi alterado pela presença de nisina no meio de cultura em concentração subinibitória. A estrutura do biofilme de S. aureus e S. epidermidis foi avaliada por microscopia confocal a laser, confirmando os resultados quantitativos de que a presença de concentração subinibitória de nisina reduz a formação de biofilmes por estas espécies. Estes resultados demonstram que a investigação de produtos alternativos para auxiliar no controle e combate aos biofilmes é estratégia promissora além de contribuir com informações sobre a composição do biofilme de S. aureus.Item Effect of bioengineered nisin on Staphylococcus aureus cells and biofilm(Universidade Federal de Viçosa, 2019-02-22) Andre, Cleriane; Vanetti, Maria Cristina Dantas; 7047442323047711Nisin is the most studied lantibiotic, used as a food preservative all around the world, and its structure is composed of five lanthionine rings (A, B, C, D and E). This peptide is characterized by a dual mode of action, consisting of the inhibition of cell wall biosynthesis and the formation of pores in the bacterial cell membrane, due to its ability to interact with the target molecule, lipid II. Due its structure and its gene encoding nature, nisin can be used by bioengineering to generate new derivatives with improved antimicrobial activity. In this study, the molecular structure of nisin A and three derivatives N20P, S29A and M21V were characterized in silico and the antimicrobial effect on S. aureus cells was validated by experimental methods. Sequentially, the antimicrobial activity of nisin A and its derivatives was evaluated against the S. aureus biofilm by detection of the biomass content and metabolic activity using the violet crystal test and 2,3-bis[2- methyloxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-2H-tetrazolium-5-carboxanilide (XTT), respectively. The results obtained by in silico analysis showed that the point mutations caused steric alterations in the nisin molecule, become it more planar, and possibly facilitating the molecular interactions of the C, D and E rings involved in the formation of pores. Cell leakage assays showed greater loss of NADPH and ATP over a short period of time from nisin treated cells. Modifications in the cytoplasmic membrane were observed by analysis of atomic force microscopy. Changes in position 21 of the nisin molecule may result in a peptide with higher activity and greater interaction with membrane molecules, facilitating the formation of pores and promoting greater loss of intracellular ATP. The N20P, S29A and M21V derivatives of nisin A presented greater capacity to inactivate the S. aureus biofilm, both by the removal of cells and inactivation of the sessile cells. The influence of the dltA and mprF genes, which are involved in the cationic peptide resistance mechanism, such as nisin, was also evaluated using the S. aureus ΔdltA and ΔmprF mutants. The deletion of the dltA and xmprF genes did not alter the ability of these strains to form a biofilm, but it made the action of more sensitive to bacteriocins. The results showed the increased antibiofilm potential of modified nisin and suggest that improvement by bioengineering techniques may be a strategy to produce a better antimicrobial to control growth and to remove S. aureus biofilm