Ciências Exatas e Tecnológicas
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Item Isolamento, caracterização e uso de bacteriófagos no biocontrole de Salmonella Typhimurium(Universidade Federal de Viçosa, 2011-07-15) Albino, Luiz Augusto Aguiar; Chaves, José Benício Paes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787754A9; Donzele, Juarez Lopes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787766D0; Mendonça, Regina Célia Santos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790986E3; http://lattes.cnpq.br/4168457529901881; Fontes, Edimar Aparecida Filomeno; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4792339T8O Brasil é o quarto maior produtor e quinto maior consumidor mundial de carne suína. Sua cadeia produtiva está em constante evolução a fim de fornecer produtos de qualidade tanto para o mercado interno quanto externo. Entretanto a presença de Salmonella em praticamente todas as etapas de produção constitui um problema de saúde pública e de grande prejuízo econômico para o setor. O uso indiscriminado de antimicrobianos promoveu diversos mecanismos de resistência à Salmonella, dificultando o controle e a eliminação deste patógeno. Desta forma, há uma necessidade de desenvolvimento de práticas terapêuticas e os bacteriófagos ressurgem como uma alternativa de controle. O objetivo deste trabalho foi isolar, caracterizar e testar bacteriófagos no biocontrole de Salmonella Typhimurium em suínos. Foram isolados e selecionados seis bacteriófagos em oito propriedades das regiões de Viçosa, Teixeiras e Coimbra no Estado de Minas Gerais. Os bacteriófagos selecionados foram avaliados quanto à especificidade em relação a várias estirpes de micro-organismos, quanto à morfologia e quanto a atividade sobre Salmonella Typhimurium foram utilizados em forma de pool in vitro . Foi possível o isolamento de bacteriófagos em 75 % das propriedades e após propagação eles alcançaram contagem entre 1010 e 1011 PFU/mL. Os bacteriófagos apresentaram atividade sobre diferentes estirpes de Salmonella. Em relação à morfologia, todos apresentaram cabeça icosaédrica e pequenas caudas o que indica serem da ordem Caudovirales e da família Podoviridae. O efeito dos bacteriófagos sobre a contagem de Salmonella em meio de cultura foi dependente da concentração de bacteriófago utilizada. As maiores reduções de células viáveis de Salmonella foram de, aproximadamente, 2,5 log UFC/ mL obtidas nos cultivos de bacteriófagos com MOI: 10000. Embora não tenha sido totalmente eliminado, o resultado demonstrou uma considerável redução da contagem de Salmonella Typhimurium, sugerindo o potencial que os bacteriófagos possuem para o biocontrole deste patógeno. Um pool com os seis bacteriófagos isolados foi testado em suínos experimentalmente infectados com Salmonella Typhimurium e avaliar sua eficiência na forma de biocontrole. Trinta animais foram infectados experimentalmente com 105 UFC/ mL de Salmonella Typhimurium e posteriormente tratados com diferentes MOIs: 0,01, 1, 100 e 10000. Estes animais foram abatidos e foram realizadas coletas do material fecal do íleo, ceco e das excretas para quantificar a contagem de Salmonella, utilizando os meios de cultura Rambach e XLT4. O baço, rim, fígado e linfonodo mesentérico dos amimais do tratamento de MOI: 10000 foram removidos para avaliar a translocação de bacteriófagos. A administração de Salmonella Typhimurium gerou quadro de salmonelose em nove animais (30 %). O meio de cultura Rambach foi mais especifico e o XLT4 mais sensível. Houve redução na contagem de Salmonella do íleo e ceco em MOIs: 100 e 10000, mas não houve redução nas fezes em nenhum dos tratamentos. O quadro clínico de salmonelose não permitiu a translocação do bacteriófago, sugerindo que o tratamento com bacteriófagos deve ser na forma preventiva e não corretiva da infecção por Salmonella. Conclui-se que a metodologia aplicada neste trabalho mostrou-se eficaz na redução da contagem de Salmonella, em suínos experimentalmente infectados, entretanto deve-se considerar a necessidade de proteger os bacteriófagos contra os efeitos de pH e sais biliares e outros, durante sua passagem pelo sistema digestivo do animal, para aumentar sua viabilidade e eficiência no biocontrole de Salmonella Typhimurium.Item Caracterização fenotípica e genotípica de Staphylococcus spp. isolados de diferentes nichos em unidade de abate de aves(Universidade Federal de Viçosa, 2011-02-07) Ferreira, Andreza Angélica; Vanetti, Maria Cristina Dantas; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783874H3; Paula, Sérgio Oliveira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767540P4; Mendonça, Regina Célia Santos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4790986E3; http://lattes.cnpq.br/0760227709981286; Martins, Maurilio Lopes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4794520A8; Fontes, Edimar Aparecida Filomeno; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4792339T8; Carmo, Luiz Simeão do; http://lattes.cnpq.br/8665169072443690; Pinto, Cláudia Lúcia de Oliveira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783521J6O controle de patógenos de origem alimentar no processamento de alimentos não é uma tarefa simples. Staphylococcus aureus é um patógeno que pode estar presente na superfície de carcaças de animais e tem acesso à planta de abate da indústria por meio de animais vivos. Esse micro-organismo pode desencadear processos de adesão e formação de biofilme, que constitui uma estratégia de sobrevivência e importante fonte de contaminação cruzada. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar fenotípica e geneticamente estirpes do gênero Staphylococcus spp. oriundas de uma unidade de abate de aves e determinar as principais fontes e os mecanismos envolvidos na permanência deste micro-organismo na indústria. As colônias isoladas conforme descrito na Instrução Normativa n° 62, foram confirmadas como Staphylococcus spp. e S. aureus por meio da técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Avaliou-se a sensibilidade dos isolados aos antimicrobianos pelo método de discos impregnados com as seguintes substâncias: ácido clavulânico e amoxacilina (30 μg), ácido nalidíxico (30 μg), ampicilina (10 μg), cefalotina (30 μg), cefoxitina (30 μg), ciprofloxacina (5 μg), clindamicina (2 μg), cloranfenicol (30 μg), eritromicina (15 μg), estreptomicina (10 μg), gentamicina (10 μg), oxacilina (1 μg), penicilina G (10 U), rifampicina (5 μg ), sulfonamida (300 μg), tetraciclina (30 μg) e vancomicina (30 μg). As características fenotípicas e genotípicas de formação de biofilmes foram x avaliadas pelo crescimento em Ágar Vermelho Congo (CRA) e pela identificação dos genes atl, icaA e icaD. Dentre os 120 isolados estudados, 75 foram identificados como Staphylococcus, em que 63,7 % foram coagulase positiva e 37,3 % coagulase negativa. Por meio da técnica de PCR confirmouse que 86,67 % dos isolados eram do gênero Staphylococcus e 77,33 % da espécie S. aureus. Verificou-se ainda a presença do gene sec em duas estirpes, uma delas estafilococos coagulase negativa. A maioria dos isolados foram resistentes à sulfonamida (98,5 %), ácido nalidíxico (89,3 %) e penicilina G (87,70 %). Dentre os isolados resistentes à penicilina 4,60 % foram oxacilina resistentes e 1,5 % vancomicina resistentes. Das 65 estirpes de Staphylococcus spp. estudadas na produção de exopolissacarídeo (EPS) em CRA, 100 % formaram colônias de cor preta e opacas. A variação do teor de sacarose foi crítica para a produção de EPS em CRA, uma vez que em baixas concentrações de sacarose, todas as estirpes apresentaram resultado característico de não produção de EPS. O gene atl foi encontrado em todas as estirpes e os genes icaA e icaD em 97 % delas. Estes dados sugerem que Staphylococcus spp. isolados de abatedouro de aves apresentam potencial para formação de biofilme. Formas eficientes de controle desse microorganismo no ambiente de processamento de alimentos são necessárias visto que podem representar risco em potencial ao consumidor. Portanto, devem-se adotar medidas de controle higiênico-sanitário, bem como treinamento e conscientização dos profissionais envolvidos.