Bioquímica e Biologia Molecular
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Item Estudo ecogeográfico da poaia [Psychotria ipecacuanha (Brot.) Stokes](Revista Brasileira de Plantas Medicinais, 2009) Oliveira, L. O.; Vieira, I. J. C.; Maia, J. T. L. S.; Martins, E. R.Este estudo foi conduzido com 13 populações amostradas nos estados RJ, MG, ES e BA para a coleta de dados ecogeográficos da poaia (Psychotria ipecacuanha). Foi conduzida a análise de freqüência de ocorrência de características ambientais, tais como: altitude, pluviosidade, temperaturas máxima, média e mínima absolutas, latitude e longitude. A análise etnobotânica consistiu no levantamento de formas terapêuticas, homeopáticas e as crendices relacionadas à utilização da poaia. Os teores dos alcalóides emetina e cefelina foram determinados, utilizando-se cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Aproximadamente 87% das reboleiras ocorreram em solo distrófico. Dentre os micronutrientes analisados, Fe, Mn, e Cu apresentaram correlações significativas com número de hastes por reboleira (NH) e peso de raízes secas (PR). O comprimento, em 65% das reboleiras, foi inferior a 2 m, sendo que as dimensões médias das reboleiras foram de 1,8 x 1,3 m. A porcentagem da radiação fotossiteticamente ativa variou entre 0,14 e 17%. Dos locais onde ocorreram as reboleiras, cerca de 69% foram consideradas com pequena inclinação. A caracterização química revelou que em cerca de 65% das amostras de raízes analisadas, foram observados teores de emetina entre 1 e 2%, e o teor de cefelina, em 61% das amostras, foi inferior a 0,3%. As características morfológicas e químicas foram analisadas pela técnica de componentes principais, concluindo-se que os resultados obtidos são pouco informativos sobre a diversidade genética, possibilitando o descarte de características cuja variação é pequena e, também, aquelas altamente correlacionadas entre si.Item Protective effect of ions against cell death induced by acid stress in Saccharomyces(FEMS Yeast Research, 2009-08) Sant’Ana, Gilzeane dos Santos; Paes, Lisvane da Silva; Paiva, Argentino F. Vieira; Fietto, Luciano Gomes; Totola, Antônio Helvécio; Trópia, Maria J. Magalhães; Silveira- Lemos, Denise; Lucas, Cândida; Fietto, Juliana L. Rangel; Brandão, Rogelio L.; Castro, Ieso de MirandaSaccharomyces boulardii is a probiotic used to prevent or treat antibiotic-induced gastrointestinal disorders and acute enteritis. For probiotics to be effective they must first be able to survive the harsh gastrointestinal environment. In this work, we show that S. boulardii displayed the greatest tolerance to simulated gastric environments compared with several Saccharomyces cerevisiae strains tested. Under these conditions, a pH 2.0 was the main factor responsible for decreased cell viability. Importantly, the addition of low concentrations of sodium chloride (NaCl) protected cells in acidic conditions more effectively than other salts. In the absence of S. boulardii mutants, the protective effects of Na 1 in yeast viability in acidic conditions was tested using S. cerevisiae Na 1 -ATPases (ena1-4), Na 1 /H 1 antiporter (nha1D) and Na 1 /H 1 antiporter prevacuolar (nhx1D) null mutants, respectively. Moreover, we provide evidence suggesting that this protection is determined by the plasma membrane potential, once altered by low pH and low NaCl concentrations. Additionally, the absence or low expression/activity of Ena proteins seems to be closely related to the basal membrane potential of the cells.Item Complete inventory of soybean NAC transcription factors: Sequence conservation and expression analysis uncover their distinct roles in stress response(Gene, 2009-09-01) Pinheiro, Guilherme L.; Marques, Carolina S.; Costa, Maximiller D.B.L.; Reis, Pedro A. B.; Alves, Murilo S.; Carvalho, Claudine M.; Fietto, Luciano G.; Fontes, Elizabeth P. B.We performed an inventory of soybean NAC transcription factors, in which 101 NAC domain-containing proteins were annotated into 15 different subgroups, showing a clear relationship between structure and function. The six previously described GmNAC proteins (GmNAC1 to GmNAC6) were located in the nucleus and a transactivation assay in yeast confirmed that GmNAC2, GmNAC3, GmNAC4 and GmNAC5 function as transactivators. We also analyzed the expression of the six NAC genes in response to a variety of stress conditions. GmNAC2, GmNAC3 and GmNAC4 were strongly induced by osmotic stress. GmNAC3 and GmNAC4 were also induced by ABA, JA and salinity but differed in their response to cold. Consistent with an involvement in cell death programs, the transient expression of GmNAC1, GmNAC5 and GmNAC6 in tobacco leaves resulted in cell death and enhanced expression of senescence markers. Our results indicate that the described soybean NACs are functionally non-redundant transcription factors involved in response to abiotic stresses and in cell death events in soybean.Item Treatment of soy milk with Debaryomyces hansenii cells immobilised in alginate(Food Chemistry, 2009-05-15) Souza Júnior, Waldeck Campanha de; Rezende, Sebastião Tavares de; Viana, Pollyanna Amaral; Falkoski, Daniel Luciano; Reis, Angélica Pataro; Machado, Solimar Gonçalves; Barros, Everaldo Gonçalves de; Guimarães, Valéria MontezeWhole cells of Debaryomyces hansenii UFV-1 were permeabilised with ethanol and immobilised in calcium alginate hydrogel. The optimum pH and temperature for α-galactosidase activities of permeabilised free (PFC) and permeabilised immobilised cells (PIC) were 4.5 and 60 °C; and 4.0 and 70 °C, respectively. PIC α-galactosidase was more stable than that of PFC. The incubation of PIC at 60 and 70 °C promoted an increase in α-galactosidase activity. The α-galactosidase activity was maintained when PIC was used in three repeated batches. The Km values for PIC and PFC α-galactosidases, with ρNPαGal, were 0.82 mM and 0.30 mM, respectively. Soy milk treatment with PIC for 6 h at 60 °C promoted 100% hydrolysis of raffinose oligosaccharides.Item Adaptação da lagarta de soja Anticarsia gemmatalis Hübner (Lepidoptera: Noctuidae) ao inibidor de protease Benzamidina(Revista Ceres, 2009-11) Pilon, Anderson Martins; Oliveira, Maria Goreti Almeida; Pilon, Franciny Martins; Guedes, Raul Narciso Carvalho; Oliveira, Joel Antônio; Fazollo, AndersonO inibidor de serino protease benzamidina inibe a hidrólise protéica das proteases digestivas do tipo tripsina, no intestino médio das larvas de Anticarsia gemmatalis. No presente trabalho, lagartas de A. gemmatalis recém-eclodidas foram alimentadas com o inibidor de tripsina benzamidina nas concentrações 0; 0,25; 0,50; e 0,75% (p/p de dieta artificial). As diferentes concentrações do inibidor causaram impactos negativos ao desenvolvimento larval do inseto, como aumento do período larval e maior porcentagem de mortalidade. Entretanto, observou-se que, mesmo nas maio- res concentrações testadas de benzamidina, o inseto consegue se adaptar ao inibidor por remodelagem na quantidade e no tipo de enzima presentes durante a digestão da dieta artificial.Item Debaryomyces hansenii UFV-1 intracellular α-Galactosidase characterization and comparative studies with the extracellular enzyme(Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2009-02-18) Rezende, Sebastião T. de; Viana, Pollyanna A.; Passos, Flávia Maria Lopes; Oliveira, Jamil S.; Teixeira, Kádima N.; Santos, Alexandre M. C.; Bemquerer, Marcelo P.; Rosa, José C.; Santoro, Marcelo M.; Guimarães, Valéria M.Debaryomyces hansenii cells cultivated on galactose produced extracellular and intracellular α-galactosidases, which showed 54.5 and 54.8 kDa molecular mass (MALDI-TOF), 60 and 61 kDa (SDS−PAGE) and 5.15 and 4.15 pI values, respectively. The extracellular and intracellular deglycosylated forms presented 36 and 40 kDa molecular mass, with 40 and 34% carbohydrate content, respectively. The N-terminal sequences of the α-galactosidases were identical. Intracellular α-galactosidase showed smaller thermostability when compared to the extracellular enzyme. D. hansenii UFV-1 extracellular α-galactosidase presented higher kcat than the intracellular enzyme (7.16 vs 3.29 s^−1, respectively) for the p-nitrophenyl-α-d-galactopyranoside substrate. The Km for hydrolysis of pNPαGal, melibiose, stachyose, and raffinose were 0.32, 2.12, 10.8, and 32.8 mM, respectively. The intracellular enzyme was acompetitively inhibited by galactose (Ki = 0.70 mM), and it was inactivated by Cu(II) and Ag(I). Enzyme incubation with soy milk for 6 h at 55 °C reduced stachyose and raffinose amounts by 100 and 73%, respectively.Item Screening of medicinal plants for antibacterial activities on Staphylococcus aureus strains isolated from bovine mastitis(Revista Brasileira de Farmacognosia, 2009-11-21) Diaz, Marisa A. N.; Rossi, Ciro C.; Mendonça, Vítor R.; Silva, Danielle M.; Ribon, Andréa de O. B.; Aguilar, Ananda P.; Muñoz, Gaspar D.Staphylococcus aureus is the main causative agent of bovine mastitis. The activity of several extracts from ten medicinal plants traditionally used in Brazil as antiseptic was investigated against fifteen strains of Staphylococcus aureus isolated from animals with mastitis manifestation by the disc diffusion method and broth microdilution assay. The interference of the extracts on cell in the form of adherent colonies was also evaluated. MIC values ranged from 0.5 mg/mL to 1.0 mg/mL and biofilm inhibitory concentration (BIC) were between 0.25 mg/mL and 0.8 mg/mL. Results revealed the potential of extracts of Senna macranthera, Artemisia absinthium, Cymbopogon nardus and Baccharis dracunculifolia as antibacterial agents against S. aureus strains isolated from bovine mastitis and support the possible use of these phytotherapic agents in the clinical management of the disease.Item Perfil da aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase e biometria do fígado de codornas japonesas(Revista Brasileira de Zootecnia, 2009-02-12) Barbosa, Anderson de Almeida; Müller, Elisa Sialino; Moraes, George Henrique Kling de; Umigi, Regina Tie; Barreto, Sergio Luiz de Toledo; Ferreira, Ronaldo MartinsObjetivou-se determinar o perfil da aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase e a biometria do fígado de codornas poedeiras (Coturnix coturnix japonica) de 1 a 25 dias de idade. Avaliaram-se o peso vivo e o peso do fígado e as atividades das aspartato e alanina aminotransferases no fígado utilizando-se 90 codornas de 1 dia de idade. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com seis idades e cinco repetições, considerando cada animal uma unidade experimental. Aos 1, 5, 10, 15, 20 e 25 dias de idade, cinco animais foram sacrificados e os fígados coletados, pesados, congelados em nitrogênio líquido e armazenados a -20 ºC. As alíquotas dos tecidos foram coletadas para determinação das atividades da aspartato e alanina aminotransferases no homogenato. O peso do fígado aumentou de acordo com a idade e não aumentou na mesma proporção que o peso corporal das codornas no mesmo período de crescimento. As atividades totais da aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase apresentaram crescimento linear de acordo com a idade. A enzima aspartato aminotransferase apresentou maior atividade total em relação à alanina aminotransferase. No primeiro dia de vida, as enzimas já apresentaram atividades específicas consideráveis em relação às outras idades. A atividade da aspartato aminotransferase por grama de fígado foi bem maior que a da alanina em todas as idades. A atividade da enzima alanina aminotransferase por grama de peso corporal decresceu de forma linear com a idade. Os dados do perfil das das enzimas aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase observados permitirão melhor ajuste dos níveis de proteína das rações para codornas.Item Avaliação da qualidade óssea mediante parâmetros morfométricos, bioquímicos e biomecânicos em frangos de corte(Revista Brasileira de Zootecnia, 2009-04-15) Barbosa, Anderson de Almeida; Moraes, George Henrique Kling de; Torres, Robledo de Almeida; Reis, Denise Torres da Cruz; Rodrigues, Conrado de Souza; Müller, Elisa SialinoObjetivou-se determinar aspectos bioquímicos, morfométricos e biomecânicos dos fêmures de frangos de corte. Utilizaram-se 600 pintos de 1 dia de idade, machos e fêmeas, de três híbridos (Hb1 e Hb2 - UFV e Hb3 - comercial). As aves foram alimentadas à vontade com rações para as fases inicial (1 a 21 dias), de crescimento (22 a 35 dias) e final (36 a 42 dias). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 × 2, composto de três cruzamentos e dois sexos, cinco repetições e dez aves por unidade experimental (boxe). Avaliaram-se no fêmur o peso, o comprimento, a área da seção transversal, o momento de inércia, a carga máxima na flexão, a tenacidade e resistência à flexão, o conteúdo de proteínas colagenosas e não-colagenosas e o peso vivo das aves. Aos 21, 28, 35 e 42 dias de idade, foram amostrados aleatoriamente um macho e uma fêmea por boxe, num total de cinco boxes por híbrido. Entre híbridos, Hb3 apresentou maior peso vivo em todas as idades e, entre sexos, os machos foram mais pesados. A força máxima na flexão foi maior para os machos e, para os híbridos, Hb3 foi maior que Hb1 e igual a Hb2 aos 42 dias. O piores resultados de tenacidade e resistência à flexão foram observados nos machos híbridos Hb2, que não diferiram dos Hb3 quanto à resistência à flexão aos 42 dias nem quanto à tenacidade medida em todas as idades, o que caracteriza baixa qualidade óssea dos híbridos Hb3 e machos. Devem-se considerar aspectos biomecânicos como tenacidade e resistência à flexão para corrigir e evitar o aparecimento das desordens ósseas provenientes do aumento de peso em frangos de corte.Item Avaliação de óleos, carvão vegetal e vitamina E no desempenho e nas concentrações lipídicas do sangue e dos ovos de poedeiras(Revista Brasileira de Zootecnia, 2009-12-02) Fanchiotti, Flavia Escapini; Moraes, George Henrique Kling de; Barbosa, Anderson de Almeida; Albino, Luiz Fernando Teixeira; Cecon, Paulo Roberto; Moura, Adolpho Marlon Antoniol deForam estudados os efeitos de duas fontes de óleo vegetal, de carvão e de vitamina E sobre o desempenho e os níveis lipídicos do sangue e dos ovos de poedeiras comerciais. Utilizaram-se poedeiras Lohmann Brown e Lohmann LSL com 58 semanas de idade. O experimento teve duração de 84 dias, divididos em três períodos de 28 dias, e foi realizado em delineamento inteiramente casualizado em esquema de parcelas subdivididas, tendo nas parcelas um esquema fatorial 8 × 2, com oito dietas e duas marcas comerciais, e nas subparcelas os períodos. Para avaliação das características produtivas, colesterol total, triglicérides e HDL sanguíneos, utilizaram-se quatro repetições de seis aves por unidade experimental e, para determinação do colesterol total das gemas, duas repetições. As dietas foram acrescidas de 2,0% de óleo de soja ou de linhaça em combinação ou não com vitamina E (60 mg/kg de ração) e/ou carvão (2,0%). Os resultados não evidenciaram diferenças entre as dietas experimentais sobre as variáveis de desempenho. Consumo de ração, espessura da casca, colesterol total e triglicerídios no sangue foram influenciados pelas marcas comerciais e peso médio dos ovos, espessura da casca, colesterol total e triglicerídios no sangue, pelos períodos experimentais. O uso de óleos vegetais, carvão e vitamina E nas dietas experimentais não influencia as características de desempenho nem o perfil lipídico do sangue e de colesterol total da gema dos ovos. Aves Lohmann LSL apresentam maiores consumos de ração e níveis mais altos de colesterol e triglicérides no sangue.