Navegando por Autor "Breves, Sâmera de Souza"
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Item Domínios da proteína antiviral WWP1: formação de corpos nucleares e interação com proteínas pro-virais(Universidade Federal de Viçosa, 2022-08-29) Breves, Sâmera de Souza; Fontes, Elizabeth Pacheco Batista; http://lattes.cnpq.br/1522576129801988A proteína WW domain-containing protein (AtWWP1) possui 463 aminoácidos e contém dois domínios de triptofano conservados que reconhecem motivos ricos em prolina (PRM) e sítios de serina/treonina-prolina fosforilados. AtWWP1 atua como proteína antiviral promovendo a translocação da proteína pro-viral citoplasmática NSP- interacting GTPase (NIG) para corpos nucleares, diminuindo o processo infeccioso contra begomovirus. A rede de interações proteína-proteína de Arabidopsis thaliana ligada ao hub imune da proteína COP9 signalosome complex subunit 5 (CSN5A) revelou que, além de NIG, AtWWP1 também se conecta com Methyl CpG binding domain 2 protein (AtMBD2), uma proteína capaz de reconhecer regiões metiladas das ilhas CpG. A proteína formadora de corpos nucleares, designada ciclina dependente de quinase 2 (CDKC2), também foi co-localizada com AtWWP1 nos corpos nucleares. Sabendo que CDKC2 fosforila a porção C-terminal (CTD) da RNA polimerase II e AtMBD2 está associado a fatores de repressão transcricional e desmetilação do DNA, levantou-se a hipótese de que os corpos nucleares formadores de AtWWP1 são transcricionalmente ativos. Para identificar como a proteína AtWWP1 interage com as proteínas CDKC2 e AtMBD2, ensaios in vitro e in planta de proteínas mutantes e truncadas de AtWWP1 foram realizados, concluindo que AtWWP1 interage com CDKC2, em leveduras, via seus domínios de triptofano conservados e com AtMBD2 via porção C-terminal in vitro e in vivo. Estudos funcionais da proteína AtMBD2 sugerem seu envolvimento no processo de infecção contra begomovirus. Inicialmente foi demonstrado que, além de participar do hub imune de CSN5A, AtMBD2 é induzida por infecção com Cabbage leaf curl virus (CabLCV) similarmente a AtWWP1 e NIG. Além disso, foi demonstrado que a superexpressão de AtMBD2 aumentou a suscetibilidade ao vírus, enquanto inativação de AtMBD2 no nocaute mbd2 – Salk 069448 diminuiu significativamente o acúmulo do DNA viral comparado com as linhagens controle, Col-0. Estes resultados indicam que AtMBD2 participa do processo de infecção viral e exibe atividade pró-viral. Como NIG, AtMBD2 não forma corpos nucleares mas é redirecionada para corpos nucleares quando expressa com AtWWP1, confirmando a atividade imune intrínseca dos corpos nucleares derivados de AtWWP1. Palavras-Chave: Domínio WW. AtWWP1. AtMBD2. Corpos nucleares. Atividade pro-viralItem An improved method for genomic DNA extraction from strawberry leaves(Ciência Rural, 2011-08) Nunes, Claudinéia Ferreira; Ferreira, Juliano Lino; Fernandes, Mônique Carolina Nunes; Breves, Sâmera de Souza; Generoso, Andressa Leal; Soares, Bárbara Dantas Fontes; Dias, Mário Sérgio Carvalho; Pasqual, Moacir; Borem, Aluízio; Cançado, Geraldo Magela de AlmeidaSeveral extraction methods of genomic DNA for identification and characterization of genetic diversity in different plant species are routinely applied during molecular analysis. However, the presence of undesirable compounds such as polyphenols and polysaccharides is one of the biggest problems faced during the isolation and purification of high quality DNA in plants. Therefore, achievement of fast and accurate methods for DNA extraction is crucial in order to produce pure samples. Leaves of strawberry genotypes (Fragaria ananassa) have high contents of polysaccharides and polyphenols which increase the sample viscosity and decrease the DNA quality, interfering with the PCR performance. Thereby, in this study we evaluated the quality and amount of genomic DNA extracted from young leaves of strawberry after tissue lyophilization and maceration in presence of polivinilpirrolidone (PVP). The CTAB method was used as reference procedure and it was modified to improve the DNA extraction. The modifications consisted of tissue lyophilization overnight until it was completely freeze-dried and addition of PVP during the tissue maceration in liquid nitrogen. The results showed the efficiency and reliability of the modified method compared to the unmodified method, indicating that combination of lyophilization and PVP improve the quality and amount of the DNA extracted from strawberry leaves.