Navegando por Autor "Sufiate, Bruna Leite"
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Item Enzimas vegetais e fúngicas com potencial nematicida(Universidade Federal de Viçosa, 2018-03-02) Sufiate, Bruna Leite; Queiroz, José Humberto de; http://lattes.cnpq.br/2650132859878837Fungos e plantas produzem enzimas que possuem as mais diversas aplicações biotecnológicas. Uma possível e promissora aplicação dessas enzimas é o controle de nematoides, em substituição aos nematicidas químicos prejudiciais à saúde humana e animal, ao meio ambiente e à microbiota do solo. Outra possível aplicação das enzimas de fungos é o uso da dextranase na redução de dextrana na indústria sucroalcooleira. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo investigar a produção de enzimas pelo fungo Pleurotus eryngii e pelas plantas Euphorbia milii e E. trigona, purificar e caracterizar as enzimas de E. milii, E. trigona e Pochonia chlamydosporia, e testar a atividade nematicida das enzimas das plantas E. milii, E. trigona e do fungo P. eryngii. O fungo P. eryngii e seu extrato reduziram significativamente (p<0,01) o número de larvas intactas de Panagrellus sp. após 24 horas de tratamento em 60 e 90%, respectivamente. Este efeito não está relacionado à atividade enzimática, mas sim à presença de outros metabólitos. Os ovos de Meloidogyne javanica, quando tratados com o extrato de P. eryngii, mostraram redução de 53% (p<0,01) no número de ovos intactos. A redução de ovos intactos de M. javanica é atribuída à atividade enzimática, uma vez que o extrato apresentou atividade quitinolítica e proteolítica de, respectivamente, 32,74 e 3,57 U/mL. A purificação do látex de E. trigona por cromatografia de exclusão molecular permitiu a purificação de três proteases distintas. O peso molecular das proteases foi estimado em aproximadamente: 36, 31 e 29 kDa, para a trigonina 1, 2 e 3, respectivamente. O pH e a temperatura que proporcionaram maior atividade de protease foram 4,0, 6,0 e 9,0, e temperatura de 70 °C. As proteases foram inibidas por fluoreto de fenilmetilsulfonila e iodoacetamida. O pool das três proteases presentes no látex de E. trigona reduziram significativamente (p<0,01) o número de J 2 vivas de M. incognita em 96% após 24 horas de tratamento. A purificação parcial das proteases presentes no látex de E. milii indicou que estas proteases correspondem à milina e miliina. Estas enzimas reduziram em 65,59% e 96,46% o número de larvas de Panagrellus redivivus após 24 e 48 h, respectivamente (p<0,01). A dextranase produzida pelo fungo P. chlamydosporia foi purificada à homogeneidade em duas etapas, com rendimento de 152%, fator de purificação de 6,84 e atividade específica de 358,63 U/mg. Seu peso molecular foi estimado por SDS-PAGE em 64 kDa. A enzima apresentou maior atividade a 50 °C e pH 5,0, usando tampão citrato-fosfato 100 mM, foi inibida por Ag 1+ , Hg 2+ , Cu 2+ , Mg 2+ , e apresentou K M de 1,77 g/L. A dextranase madura é composta por 585 resíduos de aminoácidos, com peso molecular predito de 64,38 kDa e pI 5,96. Esta dextranase demonstrou forte semelhança filogenética em comparação à dextranase de Trichoderma harzianum. Sua estrutura consiste de dois domínios: o primeiro composto por 15 cadeias beta, e o segundo composto por uma β-hélice paralela. Esses resultados evidenciam o potencial biotecnológico desses fungos, plantas e suas enzimas extracelulares informações acerca no da controle dextranase de nematoides, produzida pelo e fornecem fungo P. chlamydosporia, que podem ser utilizadas para futuras aplicações industriais desta enzima.Item Minimum cocktail of cellulolytic multi-enzyme complexes obtained from white rot fungi via solid-state fermentation(3 Biotech, 2018-01) Soares, Filippe Elias de Freitas; Queiroz, Paula Viana; Tavares, Gabriella Peterlini; Sufiate, Bruna Leite; Queiroz, José Humberto de; Cardoso, Wilton Soares; Santos, Fernando Almeida; Kasuya, Maria Catarina MegumiThe objective of this work was to optimize the total cellulase activity of the crude extract cocktails from five white rot fungi produced by solid-state fermentation, by means of the central composite design. The white rot fungi Pleurotus ostreatus PLO 06, Pleurotus eryngii PLE 04, Trametes versicolor TRAM 01, Pycnosporus sanguineus PYC 02 and Phanerochaete chrysosporium PC were tested. For optimization process aiming at the maximum value of total cellulase activity (FPAse), the multi-enzyme cellulase complexes (crude extracts) of each fungus were mixed simultaneously in different proportions. There was increase in FPAse activity for the cocktails formed by the extracts of the five fungi together, compared to the extracts of each fungus alone. The model presented the minimum cocktail of enzymes for maximum total cellulase activity, with 100.00 μL PYC; 100.00 μL PC; 100.00 μL PLO06; 100.00 μL PLE04 and 200 μL TRAM01. The maximum value found was of 304.86 U/L. The result of the cocktails was very relevant, showing that there is an enzymatic complementation in the extracts that should be further studied. Concentrated extract cocktails should also be evaluated for biomass saccharification.Item Nematicidal action of Pleurotus eryngii metabolites(Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 2017-10) Sufiate, Bruna Leite; Soares, Filippe Elias de Freitas; Moreira, Samara Silveira; Gouveia, Angélica de Souza; Monteiro, Thalita Suelen Avelar; Freitas, Leandro Grassi de Freita; Queiroz, José Humberto dePleurotus eryngii is one of the most cultivated and consumed mushroom species in North Africa, Europe and Asia. Fungi from Pleurotus genus have demonstrated nematophagous activities, however most of the literature reports are focused on Pleurotus ostreatus. The aim of this work was to evaluate P. eryngii action on Panagrellus sp. and to evaluate the effect of this fungus culture extract on Meloidogyne javanica eggs. P. eryngii fungus and its extract significantly reduced (p < 0.01) the number of intact Panagrellus sp. larvae after 24 h treatment in 60% and 90%, respectively. This effect is not related to enzymatic activity, but to the presence of other metabolites. M. javanica eggs, when treated with P. eryngii extract, showed a 53% reduction (p < 0.01) in the number of intact eggs. The M. javanica intact eggs reduction is attributed to enzymatic activity, once the extract showed proteolytic and chitinolytic activities of, respectively, 32.74 and 3.57 U/mL. P. eryngii fungus has predatory activity against Panagrellus sp. larvae due to toxins production and negatively affects M. javanica eggs and juveniles development due to chitinases and proteases production, evidencing this fungus potential to be used in biological control.Item Nematicidal activity of proteases from Euphorbia milii(Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 2017-04) Sufiate, Bruna Leite; Soares, Filippe Elias de Freitas; Freitas, Filippe Elias de; Queiroz, José Humberto deThe present work aimed to characterize the proteases present in Euphorbia milii latex and to evaluate the nematicidal potential of these enzymes. Results suggest that proteases present in E. milii latex concentrate samples are milin and miliin. Difference (p < 0.01) between larvae number in the different groups was found, with 65.59% and 96.46% Panagrellus redivivus larvae reduction after 24 and 48 h, respectively.Item Non-phytate phosphorus requirement for broilers from 8 to 21 days of age under heat stress conditions(Tropical Animal Health and Production, 2017-10-03) Cardoso, Evandro Ferreira; Donzele, Juarez Lopes; Donzele, Rita Flávia Miranda de Oliveira; Sufiate, Bruna Leite; Silva, Amanda Dione; Tizziani, TarcisoTwo trials were conducted to determine the non-phytate phosphorus (nPP) requirement for broiler under heat stress. In both trials, birds were distributed in a completely randomized 4 × 2 factorial design with four nPP concentrations: 0.25, 0.35, 0.45, and 0.55%, and two Ca supply techniques: Ca fixed at 0.899% (CaF) or varying along with nPP aiming a 2:1 Ca to nPP ratio (CaV). Both trials had eight pens/treatment, with nine and five birds/pen for exp. 1 and exp. 2, respectively. nPP concentration had no effect on feed intake (FI), body weight gain (BWG), feed conversion ratio (FCR), nor fat deposition ratio (FDR). nPP levels showed a linear effect on protein deposition ratio (PDR) only for CaF diets. The nPP levels had a significant effect, regardless the technique adopted, on tibia phosphorus (TibP), which varied quadratically, on tibia calcium (TibCa) that increased quadratically and linearly, respectively, on CaF and CaV diets, and on tibia ash (TibAsh) that showed a quadratic effect for both. No effect was observed on Ca to P ratio in the tibia (TibCa:TibP). The nPP levels showed a linear increase effect over phosphorus intake (PI), phosphorus excreted (PE), and phosphorus retained (PR), and a linear decrease effect on phosphorus retention coefficient (PRC). Therefore, the nPP requirement for broilers from 8 to 21 days of age that provided better performance and bone variables were 0.250 and 0.484%, respectively, for CaF diets and 0.250 and 0.511%, respectively, for CaV diets.Item Produção, purificação e caracterização parcial da dextranase de Pochonia chlamydosporia (VC4) e sua aplicação na remoção de dextrana do caldo de cana(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-17) Sufiate, Bruna Leite; Queiróz, José Humberto de; http://lattes.cnpq.br/2650132859878837Dextranases (EC 3.2.1) são enzimas que hidrolisam ligações α-(1,6), α-(1,2), α-(1,3) e α-(1,4) em polissacarídeos de dextrana, sendo produzidas por fungos, bactérias e algumas leveduras. São utilizadas na produção de dextrana para aplicações clínicas, na produção de isomaltooligossacarídeos e oligodextranas prebióticos, em produtos de higiene bucal para o tratamento e a prevenção de cáries e para remoção de dextranas na indústria de açúcar. O objetivo deste trabalho foi produzir, purificar e caracterizar parcialmente a dextranase produzida pelo fungo Pochonia chlamydosporia (VC4) e avaliar sua aplicação na remoção de dextranas em caldo de cana. Os efeitos de diferentes componentes do meio de cultura na produção de dextrana foram analisados através do delineamento de Plackett-Burman e do delineamento composto central. A superfície de resposta foi utilizada para determinar quais os níveis, dentre as variáveis que influenciam a produção de dextranase, proporcionam maior produção desta enzima pelo fungo P. chlamydosporia. Avaliou-se, ainda, a aplicação da dextranase na remoção de dextrana do caldo de cana. O extrato bruto foi parcialmente purificado em resina de troca iônica DEAE-Sepharose. A atividade de dextranase foi avaliada em diferentes pHs, temperaturas e na presença de íons metálicos. Apenas dois componentes do meio de cultura, NaNO 3 e pH, demonstraram efeito significativo (p<0,05) sobre a produção de dextranase. Os níveis de NaNO 3 e pH que proporcionaram maior produção desta enzima foram, respectivamente, 5 g/L e 5,5. A dextranase de P. chlamydosporia mostrou-se eficaz em remover a dextrana presente no caldo de cana, reduzindo em 75% o teor de dextrana após 12 horas, quando comparado com o controle. O rendimento da purificação foi 128%, o fator de purificação foi 2,58, e a atividade específica de 114,66 U/mg. A temperatura e a faixa de pH que resultaram em maior atividade foram, respectivamente, 50 °C, e 5,0 a 6,0. O íon Cu 2+ inibiu a atividade da dextranase em 55%, e o íon Mg 2+ aumentou a atividade em 24%, em relação ao controle.