Navegando por Autor "Soares, Marcos Antônio"
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Item Development of a transformation system for Penicillium brevicompactum based on the Fusarium oxysporum nitrate reductase gene(Brazilian Journal of Microbiology, 2005-04) Queiroz, Marisa Vieira de; Pereira, Jorge Fernando; Ribeiro, Ronney Adriano; Soares, Marcos Antônio; Ribeiro, João Batista; Araújo, Elza Fernandes de; Varavallo, Maurílio AntônioPenicillium brevicompactum is a filamentous fungus that presents a potential for industrial use due its efficient pectinase production. A heterologous transformation system was developed for P. brevicompactum based on the complementation of a nitrate reductase mutant. Nitrate reductase mutants were obtained by resistance to chlorate in a rate of 23.24% when compared to other mutations that lead to the chlorate resistance. One mutant named 4457-18X was chosen for the transformation experiments with the pNH24 vector containing de Fusarium oxysporum nitrate reductase gene. A frequency of approximately 3 transformants/µg DNA was obtained using the circular vector pNH24. This frequency was multiplied about 10 fold using the linearized vector with the Xba I restriction enzyme. Southern analysis of the transformants showed a tendency of the linearized vector to diminish the number of integrations compared to the use of the circular vector. The integration was random and stable in the analyzed transformants. The establishment of a transformation system for P. brevicompactum is fundamental for genetic manipulation of this microorganism.Item Genes determinantes de patogenicidade e virulência e análise parcial do genoma mitocondrial de Colletotrichum lindemuthianum, agente causal da antracnose do feijoeiro comum(Universidade Federal de Viçosa, 2007-03-23) Soares, Marcos Antônio; Araujo, Elza Fernandes de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783675E2; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Queiroz, Marisa Vieira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785812Z5; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4776663D4; Rodrigues, Fabrício de ávila; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4709080E6; Souza, Elaine Aparecida; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782465Z5Colletotrichum lindemuthianum é um dos principais patógenos do feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris) em regiões tropicais. Nesse trabalho são descritos três mutantes de C. lindemuthianum obtidos por mutagênese insercional usando a técnica REMI (Integração Mediada por Enzima de Restrição), com a capacidade alterada de infectar o hospedeiro, e a caracterização parcial dos genes mutados; é determinado o papel do gene pacC1 no crescimento vegetativo e na patogenicidade; além da caracterização parcial do genoma mitocondrial desse fitopatógeno. A utilização de enzima de restrição NarI na transformação de C. lindemuthianum aumentou aproximadamente 10X a eficiência de transformação com o plasmídeo pAN7.1. Os mutantes mut5, mut29 e mut 65, isolados do banco de 580 transformantes, apresentaram alteração na capacidade de infecção do feijoeiro. Não foi observada a penetração das linhagens mut29 e mut65 no tecido do hipocótilo, apesar dessas linhagens causarem sintomas da antracnose nas folhas do feijoeiro. Esse resultado indica que as linhagens mut29 e mut65 apresentam fenótipo variável de acordo com o tecido vegetal utilizado nas observações de infecção. Após o sequenciamento dos plasmídeos recuperados de mut29 e mut65, pôde-se comprovar que a integração do vetor pAN7.1 foi mediada pela enzima NarI, o que caracteriza eventos REMI. As análises das seqüências mostraram que o gene que codificam tetrahidrofolato sintase (tlsCl) foi interrompido pelo vetor no mut65. Um putativo gene codificador para fosfolipaseC (plcCl) está etiquetado no mut29. Essa ultima linhagem possui uma segunda integração na região terminal 3 do gene com homologia ao transportador do tipo MSF (msfCl). Esse é o primeiro relato desses genes em C. lindemuthianum. Os fatores de transcrição da família PacC/Rim101 de fungos e leveduras são responsáveis pela ativação ou repressão de genes em resposta ao pH extracelular. A ativação desses fatores de transcrição depende de uma via de transdução de sinal capaz de perceber variações do pH externo, e transmitir esse sinal até a ativação do fator de transcrição. Foi descrita a seqüência do cDNA do gene pacCl, isolada a partir de uma banco genômico de EST de C. lindemuthianum. A proteína predita de 581 aminoácidos possui alta similaridade com proteínas da família de reguladores de transcrição PacC/Rim101 e sua região N-terminal possui 3 motivos dedo de zinco, do tipo Cys2Hys2. A transcrição de pacC1 aumentou à medida que o pH ambiental tornou-se mais alcalino. O crescimento do mutante nulo mutpac2 foi inibido em ambientes mais alcalinos, apresentando secreção de pequena quantidade de lipase, e este não foi capaz de causar maceração do tecido do hospedeiro, indicando o seu papel na patogenicidade de C. lindemuthianum. A transcrição de pacCl foi detectada por RT-PCR na linhagem selvagem, 18 h após a inoculação de plantas de feijoeiro e aumentou progressivamente com a biomassa fúngica durante a cinética de infecção. Outros dois cDNAs, codificando proteínas homólogas às famílas protéicas PalA/Rim20 e PalF/Rim8 de fungos e leveduras, que fazem parte da via de transdução de sinais, também foram descritos. A detecção de genes regulados positivamente por PacCl, na transição da fase biotrófica para a necrotrófica, poderá auxiliar o entendimento dos mecanismos moleculares que levam a essa transição em fungos hemibiotrófico, e, consequentemente, a proposição de estratégias de controle da doença. Utilizando-se uma técnica de hibridização diferencial capaz de identificar DNA altamente repetido, foi isolado um fragmento de 9.456 pb correspondendo à seqüência parcial do genoma mitocondrial de C. lindemuthinum. Esse fragmento possui alto conteúdo A+T (66%), e nele estão presentes os genes cox1, cox3, nad6, rnl, rns, e 12 outros genes codificando para tRNA. Os genes codificadores de proteínas nesse fragmento utilizam códons preferenciais. Somente o gene cox1 foi interrompido por um intron do grupo I contendo uma ORF para endonuclease do tipo LAGLIDADG, envolvida no processo de homing . A comparação da sintenia dos genes presentes nesse fragmento e análise filogenética utilizando-se três proteínas mitocondriais concatenadas de diversos fungos agrupou C. lindemuthianum com outros fungos da ordem Filacorales.Item PacCl, a pH-responsive transcriptional regulator, is essential in the pathogenicity of Colletotrichum lindemuthianum, a causal agent of anthracnose in bean plants(European Journal of Plant Pathology, 2014-08-08) Nogueira, Guilherme Bicalho; Soares, Marcos Antônio; Bazzolli, Denise Mara Soares; Araújo, Elza Fernandes de; Langin, Thierry; Queiroz, Marisa Vieira deIn fungi, the expression of genes encoding proteins related to parasitism is regulated by several factors, including pH. This study reports the structural and functional characterization of the pacCl gene, which encodes the transcription factor PacC of C. lindemuthianum. The pacCl gene showed reduced expression in acidic pH, and its transcription was activated by elevated extracellular pH. The importance of this gene was demonstrated by the development of a pacC1 disruption mutant line of C. lindemuthianum. The mutant line was able to penetrate the host tissue through differentiation of primary hyphae. However, it was not able to cause maceration on the infected plant tissue. The results suggest that PacCl is a regulator of gene activation, and its expression is required for fungal growth in alkaline conditions, as well as for the transcription of genes necessary for the passage from the biotrophic to the necrotrophic phase.