Navegando por Autor "Ramírez López, Camilo José"
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Item Análise proteômica e bioquímica do plasma seminal de touros da raça Nelore classificados como aptos e inaptos à reprodução(Universidade Federal de Viçosa, 2018-11-30) Ramírez López, Camilo José; Guimarães, José Domingos; http://lattes.cnpq.br/2019925307607771Este estudo foi realizado com o objetivo de determinar o perfil proteômico e bioquímico do plasma seminal de touros jovens da raça Nelore e sua relação com as características físicas e morfológicas do sêmen. Foram usados 20 touros com idades compreendidas entre 19,8 e 22,7 meses. Todos os touros foram submetidos à avaliação andrológicas e classificados segundo suas características reprodutivas em touros aptos e inaptos à reprodução. Foi coletada uma amostra de sêmen de cada touro pelo método de eletroejaculação e foram avaliados os aspectos físicos e morfológicos dos ejaculado por meio de microscopia óptica convencional e de contraste de fase. Depois das análises, os ejaculados foram centrifugados e os sobrenadantes (plasma seminal) foram usados para determinar as concentrações de glicose, albumina, proteínas totais, triglicerídeos, colesterol, HDL, LDL, ureia, cálcio, fósforo, cloreto, ferro, sódio e potássio por meio de um analisador bioquímico e fotometria de chama. Depois da centrifugação, as proteínas do plasma seminal foram quantificadas pelo método de Bradford e analisadas por meio de eletroforeses monodimensional e bidimenensional e espectrometria de massas (MALDI TOF/TOF e LC-MS/MS). As proteínas foram identificadas pelo MASCOT e validadas estatisticamente usando o software SCAFFOLD Q+. As proteínas foram caracterizadas de acordo a suas classes e processos biológicos pelo PANTHER usando os termos de ontologia gênica depositados no banco de dados UniprotKB. As proteínas diferencialmente abundantes foram quantificadas pelo método emPAI considerando unicamente aquelas proteínas com foldchange superior a 1,5 vezes. As redes de interação entre as proteínas identificadas no plasma seminal foram obtidas por meio do STRING. Os dados foram analisados pelo software estatístico SAEG - UFV, e foram usadas as correlações de Pearson para estudar a correlação entre as características estudadas. Não foram obsevadas diferenças (p>0,05) nos valores medios das características do aspecto físico do sêmen e perímetro escrotal entre os grupos de animais. A porcentagem de defeitos espermáticos apresentou diferença (p<0,05) entre os dois grupos de touros sendo maior no grupo de reprodutores classificados como inaptos à reprodução. Também foram observadas diferenças nas concentrações de colesterol, triglicerídeos e ferro (p<0,05), sendo maiores para os animais classificados como aptos à reprodução. Foram observadas correlações médias, positivas e negativas, entre os componentes do perfil bioquímico do plasma seminal. Usando LC-MS/MS foram identificadas 298 proteínas com pelo menos dois peptídeos validados. A Spermahesin 1 foi a proteína mais abundante representando 39,6 % do total das proteínas identificadas no plasma seminal, seguida pela BSP PDC-109 (4,6 %) e Serine protease inhibitor clade E member 2 (4,0 %). De acordo com a classificação dos processos biológicos, 94 proteínas apresentaram atividade realacionadas com processos celulares, 85 com processos metabólicos e 39 com resposta a estímulos, sendo as categorias com maior numero de proteínas classificadas. As proteínas do plasma seminal foram categorizadas em 21 classes de proteínas diferentes, em que a classe das hidriolases (49) e modulares enzimáticos (29) foram os grupos com maior número de proteínas enquadradas. Das 298 proteinas identificadas, 34 foram diferencialmente abundantes, e delas 26 apresentaram mais abundantes no grupo de touros classificados como aptos à reprodução e 8 no grupo de touros classificados inaptos à reprodução.Item Association of sperm oxidative stress, proteomics and fatty acid profiles in nellore bulls at sexual rest(Universidade Federal de Viçosa, 2023-03-31) Ramírez López, Camilo José; Guimarães, Simone Eliza Facioni; http://lattes.cnpq.br/2019925307607771Association of sperm oxidative stress, proteomics and fatty acid profiles in nellore bulls at sexual rest. Adviser: Simone Eliza Facioni Guimarães. This study was carried out with the objective of determining the effect of sexual rest on the oxidative status of spermatozoa from adult Nellore bulls and its effect on the fatty acid composition and protein profile. Six bulls were used, which were submitted to Breeding Soundness Evaluation and consecutive semen collection by the electroejaculation method. For each semen collection, the physical and morphological characteristics of the ejaculates were evaluated using conventional optical microscopy and phase contrast microscopy. After analyzing the semen qualitative parameters, the first and last ejaculate of each were centrifuged to separate the spermatozoa from the seminal plasma. From sperm aliquots, the enzymatic activity of Super Oxido Dismutase, Catalase and Glutathione S-Transferase was determined by colorimetric methods. The markers of lipid peroxidation, malondialdehyde and nitric oxide were also determined. Using gas chromatography, the fatty acids of sperm from the first and last ejaculate were identified. For proteomic analysis, total sperm proteins were extracted and precipitated in a 4% CHAPS solution, then quantified by the Bradford method and subsequently analyzed by monodimensional short-run electrophoresis and mass spectrometry (LC-MS/MS). Proteins were identified using PEAKS software version 7.0. Proteins were functionally classified by the RPSBLAST tool of BLAST version 2.13.0 into categories from the KOG database. For the label-free quantitative proteomics analysis, proteins identified in at least three technical replicates of each group with a fold-change greater than 1.5 times were included. Data were analyzed using GraphPad Prisma software version 9.1. Four semen collections were necessary so that the bulls at sexual rest presented sperm parameters compatible with reproductive fitness. Differences (p<0.05) were observed between all physical and morphological characteristics of the first and last ejaculate. A total of 974 proteins were identified, of which 735 were common between the two groups and 123 and 116 proteins were unique to spermatozoa from the first and last ejaculate, respectively. Functional classification analysis revealed that KOG categories with the highest number of classified proteins were Posttranslational modification, protein turnover, chaperones and Cytoskeleton and Signal transduction mechanisms. The protein abundance profile showed that 6 proteins were differentially abundant in spermatozoa from the first ejaculate and 30 proteins weredifferentially abundant in spermatozoa from the last ejaculate. In addition, gas chromatography analysis allowed the identification of 19 fatty acids, 47.3% of the saturated type and 52.7% of the unsaturated type. The C12:0 and C18:0 fatty acids showed difference between the two groups, being more abundant in the spermatozoa of the last ejaculate. The results indicate that oxidative stress may be related to sperm characteristics displayed by bulls at sexual rest, since the accumulation of by-products of lipid peroxidation can cause alterations in the metabolic pathways used by spermatozoa to generate energy used for motility and alter fluidity. of the membrane causing sperm abnormalities. Keywords: Bovine. Semen. Antioxidants. Lipids. Proteins.