Navegando por Autor "Martins, Leonardo Franco"
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Item Avaliação de diferentes osmolaridades de soluções hiposmóticas e tempos de incubação no teste hiposmótico do sêmen de touros Nelore(Revista Brasileira de Zootecnia, 2010-08-27) Martins, Leonardo Franco; Pinho, Rogério Oliveira; Paraizo, Renan Moreira; Oliveira, Renan Reis de; Castilho, Erick Fonseca; Guimarães, José DomingosO objetivo neste estudo foi avaliar diferentes osmolaridades e tempos de incubação durante o teste hiposmótico e suas correlações com a congelabilidade do sêmen de touros zebuínos. Foram utilizados 30 ejaculados de seis touros adultos da raça Nelore. No sêmen in natura foi feita avaliação física e morfológica, classificação quanto à coloração supravital e o teste hiposmótico. No teste hiposmótico foram utilizadas soluções com osmolaridades de 60, 100, 150 mOsm/kg e água destililada (19 mOsm/kg) om 15, 30 e 60 minutos de período de incubação a 37ºC. Após a criopreservação, as amostras foram descongeladas e avaliadas quanto aos testes hiposmótico, à coloração supravital, ao teste de termorresistência lento e à coloração fluorescente. Não foram detectadas interações entre os tempos e as osmolaridades. Não houve diferenças para os valores médios de espermatozoides reativos incubados nas soluções com diferentes osmolaridades para o sêmen congelado/ descongelado. Apenas a utilização de água destilada determinou diferença nos valores médios obtidos no teste hiposmótico realizado no sêmen in natura. Não houve diferença entre os valores médios de espermatozoides reativos incubados com diferentes tempos de incubação, tanto no sêmen in natura como no sêmen congelado/descongelado. O teste hiposmótico pode ser realizado com 15 minutos de incubação, e com uma solução que varie a osmolaridade de 60 a 150 mOsm/kg, tanto no sêmen in natura como no sêmen congelado/descongeladoItem Avaliação do sêmen e proteínas solúveis do plasma seminal de bodes da raça Parda Alpina(Universidade Federal de Viçosa, 2001-10-23) Martins, Leonardo Franco; Guimarães, José Domingos; http://lattes.cnpq.br/7221736096112265O objetivo deste trabalho foi estudar a qualidade seminal in vitro analisada por meio de testes complementares e sua relação com os aspectos físicos, morfológicos e bioquímicos do sêmen de bodes da raça Parda Alpina. O 1º experimento foi realizado durante os meses de janeiro e fevereiro de 2001 e foram utilizados quatro reprodutores adultos criados em condições intensivas. As coletas de sêmen foram realizadas empregando-se o método de vagina artificial. Em todas as coletas além do exame físico e morfológico do sêmen foi realizado o teste hipoosmótico e incubação isoosmótica como grupo controle. Os bodes apresentaram diferença nos aspectos físicos e morfológicos, no teste hipoosmótico e teste de termorresistência (p < 0,05). Os resultados dos testes de termorresistência lento tiveram correlação alta com o percentual de espermatozóides reativos ao meio hipoosmótico (0,67). O 2º experimento foi realizado durante final do mês de fevereiro até inicio do mês de abril de 2001 no mesmo local. Foram realizadas as coletas de quatro reprodutores adultos que se encontravam em regime de monta controlada. Em todas as coletas além do exame físico e morfológico do sêmen foram realizados os testes hipoosmóticos, isoosmóticos e a determinação da concentração protéica total do plasma seminal. Foi detectada diferença entre os bodes na concentração protéica total do plasma seminal (p < 0,05), mas não foram detectadas diferenças no teste hipoosmótico e coberturas por prenhez (p > 0,05). De acordo com os dados obtidos neste estudo pode-se concluir que o teste hipoosmótico pode ser uma importante ferramenta para a avaliação de sêmen caprino e a concentração protéica total do plasma seminal não pode ser utilizada como parâmetro para predizer a qualidade seminal de bodes da raça Parda Alpina.Item Avaliação espermática e da concentração de proteínas solúveis no plasma seminal de bodes da raça Alpina em regime de monta controlada(Revista Brasileira de Zootecnia, 2006-03-03) Martins, Leonardo Franco; Pereira, Maria Cristina Baracat; Guimarães, José Domingos; Costa, Eduardo Paulino da; Silveira, Thiago da Silva; Torres, Ciro Alexandre Alves; Rodrigues, Marcelo Teixeira; Braz, Vandberg BarbosaForam estudadas as relações entre a concentração de proteínas solúveis do plasma seminal, o teste hipoosmótico, a análise física e morfológica do sêmen e o desempenho reprodutivo de bodes da raça Alpina em regime de monta controlada. O experimento foi realizado durante os meses de fevereiro a abril de 2001. Foram realizadas 40 coletas de sêmen em quatro reprodutores adultos em regime de monta controlada. Em todas as coletas, além do exame físico e morfológico do sêmen, foram realizados os testes hipoosmóticos, isoosmóticos e a determinação da concentração de proteínas solúveis do plasma seminal. Foi detectada diferença entre os bodes na concentração de proteínas solúveis do plasma seminal, mas não houve diferença no teste hipoosmótico e no número de coberturas por prenhez. O teste hipoosmótico pode ser uma importante ferramenta para a avaliação de sêmen caprino, mas a concentração de proteínas solúveis do plasma seminal não pode ser utilizada como parâmetro para predizer a qualidade seminal e a fertilidade de bodes da raça Alpina utilizados em regime de monta natural.Item Differential abundances of four forms of binder of SPerm 1 in the seminal plasma of Bos taurus indicus bulls with different patterns of semen freezability(Theriogenology, 2016-02-27) Magalhães Jr, Marcos Jorge; Martins, Leonardo Franco; Senra, Renato Lima; Santos, Thaís Ferreira do; Okano, Denise Silva; Pereira, Paulo Roberto Gomes; Faria-Campos, Alessandra; Campos, Sérgio Vale Aguiar; Guimarães, José Domingos; Baracat-Pereira, Maria CristinaThe Binder of SPerm 1 (BSP1) protein is involved in the fertilization and semen cryopreservation processes and is described to be both beneficial and detrimental to sperm. Previously, the relationship of BSP1 with freezability events has not been completely understood. The objective of this work was to determine the differential abundance of the forms of the BSP1 protein in cryopreserved seminal plasma of Bos taurus indicus bulls with different patterns of semen freezability using proteomics. A wide cohort of adult bulls with high genetic value from an artificial insemination center was used as donors of high quality, fresh semen. Nine bulls presenting different patterns of semen freezability were selected. Two-dimensional gel electrophoresis showed differential abundance in a group of seven protein spots in the frozen/thawed seminal plasma from the bulls, ranging from 15 to 17 kDa, with pI values from 4.6 to 5.8. Four of these spots were confirmed to be BSP1 using mass spectrometry, proteomics, biochemical, and computational analysis (Tukey's test at P < 0.05). The protein spot weighing 15.52 ± 0.53 kDa with a pI value of 5.78 ± 0.12 is highlighted by its high abundance in bulls with low semen freezability and its absence in bulls presenting high semen freezability. This is the first report showing that more than two forms of BSP1 are found in the seminal plasma of Nelore adult bulls and not all animals have a similar abundance of each BSP1 form. Different BSP1 forms may be involved in different events of fertilization and the cryopreservation process.Item Testes complementares em sêmen e avaliação da síntese diferencial de proteínas e peptídeos aniônicos em plasma seminal de touros da raça Nelore classificados em aptos e inaptos à reprodução(Universidade Federal de Viçosa, 2009-10-19) Martins, Leonardo Franco; Costa, Eduardo Paulino da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787237D6; Pereira, Maria Cristina Baracat; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4780021E6; Guimarães, José Domingos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782270U6; http://lattes.cnpq.br/7221736096112265; Fonseca, Jeferson Ferreira da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4703690H8; Torres, Ciro Alexandre Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787213D4As principais análises realizadas como rotina para avaliar a qualidade seminal são a motilidade espermática progressiva retilínea e morfologia para a mensuração da fertilidade de touros. Diversas técnicas complementares são utilizadas para melhorar avaliação da fertilidade de touros. Cada técnica está relacionada com diferentes aspectos da qualidade seminal e seus resultados ainda não são totalmente compreendidos. Foram realizados quatro experimentos. O experimento 1 teve como objetivo estudar as relações entre os aspectos físicos e morfológicos do sêmen com o teste hiposmótico em sêmen in natura de touros jovens e adultos. Foram utilizados 626 touros da raça Nelore, sendo 420 touros jovens e 206 touros adultos. Os touros jovens com idades variando de 18 a 22 meses e touros adultos com idades variando de 3 a 10 anos, foram submetidos a exame andrológico. Após a palpação das glândulas vesiculares e mensurações testiculares foi realizada a coleta de sêmen pelo método de eletroejaculação. Após a análise física e morfológica do sêmen foi realizado o teste hiposmótico. Após a classificação andrológica, 83% dos touros jovens e 94% dos touros adultos foram classificados em aptos à reprodução. Não houve diferenças entre as médias de perímetro escrotal dos touros classificados como aptos e inaptos à reprodução (P>0,05). Houve diferenças entre as médias de todos os aspectos físicos e morfológicos do ejaculado de touros inaptos e aptos à reprodução (P<0,05), mas não foram observadas no percentual de espermatozóides reativos ao teste hiposmótico (P>0,05). Com estes resultados, pode-se concluir que o teste hiposmótico não pode ser utilizado isoladamente para predizer o potencial reprodutivo de touros jovens e adultos da raça Nelore, pois não houve diferenças entre os percentuais de espermatozóides reativos do sêmen de touros aptos e inaptos à reprodução, e não houve relações com os principais aspectos de qualidade seminal. O experimento 2 teve como objetivo identificar proteínas diferencialmente sintetizadas em plasma seminal de touros jovens e adultos da raça Nelore classificados em aptos e inaptos à reprodução. Após o exame andrológico, os touros jovens foram classificados em aptos (117) e inaptos (49) à reprodução, e os touros adultos (56), em aptos à reprodução. As amostras de plasma seminal, conservadas em palhetas finas sob -196ºC, foram descongeladas à temperatura ambiente para serem realizadas as análises proteômicas. Foi realizada a MDLC offline, sendo a primeira dimensão a cromatografia de troca catiônica e a segunda a de fase reversa. Foram coletadas seis frações eluídas nas condições de equilíbrio (pH 7,0) na cromatografia de troca catiônica, que correspondem às frações de peptídeos e proteínas com caráter aniônico e neutro. As frações correspondentes aos picos eluídos obtidos na cromatografia de fase reversa foram analisadas em um espectrômetro de massa do tipo MALDI-TOF/TOF para a determinação da massa molecular das proteínas. Foram selecionados e analisados 96 eluatos coletados na cromatografia de fase reversa para a espectrometria de massa, com síntese protéica diferencial entre os tratamentos. Dezoito massas moleculares foram identificadas por espectrometria de massa, entre 4.233 e 13.560 Da. A proteína de 12.910 Da, com massa molecular e características semelhantes à aSFP (acidic seminal fluid protein), foi obtida em maior concentração nos touros aptos adultos, seguidos pelos aptos jovens e inaptos. Os perfis cromatográficos protéicos foram diferentes entre os grupos, sugerindo que a proteínas aniônicas podem ser estudadas visando identificar marcadores protéicos para a aptidão reprodutiva de touros da raça Nelore, pela análise proteômica do plasma seminal. Nos experimentos 3 e 4 foram estudadas as relações do teste hiposmótico com os aspectos físicos e morfológicos do sêmen, e testes complementares em sêmen in natura e congelado/descongelado de touros adultos da raça Nelore. No sêmen in natura foi feita a avaliação física e morfológica, a coloração supravital e o teste hiposmótico. Nas amostras congeladas/descongeladas, foram realizados os testes hiposmótico, coloração supravital, teste de termoresistência lento e a coloração fluorescente. No experimento 3 foram utilizados trinta ejaculados de seis touros adultos da raça Nelore. Foram utilizadas soluções com osmolaridades de 60, 100, 150 mOsm/kg e água destilada (19 mOsm/kg) com 15, 30 e 60 minutos de período de incubação a 37 ºC no teste hiposmótico. Apenas a água destilada apresentou diferença em relação aos valores médios obtidos no teste hiposmótico realizado no sêmen in natura (P<0,05). Não houve diferença entre os valores médios de espermatozóides reativos incubados com diferentes tempos de incubação, tanto no sêmen in natura como no congelado/descongelado (P>0,05). No experimento 4, foram utilizados 15 ejaculados de 3 touros adultos da raça Nelore. Foram utilizados 10, 20, 50 e 100μL de sêmen em 1mL de solução hiposmótica. Não houve diferença entre os valores médios de espermatozóides reativos nas diferentes concentrações de sêmen no teste hiposmótico (P>0,05). Nenhum teste de integridade de membrana plasmática dos espermatozóides foi capaz de classificar os touros quanto à sua congelabilidade do sêmen nos experimentos 3 e 4. O teste hiposmótico correlacionou-se com as principais características de qualidade seminal e com os valores obtidos nos testes complementares (P<0,05). No experimento 3, concluímos que o teste hiposmótico pode ser realizado com 15 minutos de período de incubação e uma solução hiposmótica entre 60 e 150 mOsm/kg, tanto em sêmen in natura como em congelado/descongelado. De acordo com os resultados do experimento 4, o teste hiposmótico pode ser realizado com 20 a 100μL em sêmen in natura, e 10 a 100 μL de sêmen congelado/descongelado em 1mL de solução hiposmótica, sem interferir em seus resultados, mas preferencialmente deve-se optar por 100μL, tanto para sêmen in natura como congelado/ descongelado, porque melhora a leitura das lâminas. De acordo com os resultados deste trabalho o teste hipósmótico não pode ser utilizado para predizer o potencial reprodutivo de touros da raça Nelore. Mas, o teste hiposmótico avalia outro aspecto da membrana plasmática dos espermatozóides e possue relações com os principais aspectos da qualidade seminal e outros testes complementares, por isso deve ser empregado para uma melhor compreensão dos seus resultados. A análise proteômica do plasma seminal em associação à avaliação andrológica pode ser uma ferramenta promissora para predizer a aptidão reprodutiva em touros, por meio da identificação de moléculas protéicas no plasma seminal.Item Testicular echotexture and seminal quality of young Montana Tropical Compound bulls classified as sound and unsound for breeding(Revista Brasileira de Zootecnia, 2012-05-04) Pinho, Rogério Oliveira; Costa, Deiler Sampaio; Siqueira-Batista, Jeanne Broch; Chaya, Alberto Yukio; Miranda Neto, Tamires; Martins, Leonardo Franco; Guimarães, Simone Eliza Facioni; Guimarães, José DomingosThe objective of this study was to investigate the relationship between testicular echotexture and seminal quality, in addition to evaluate the testicular parenchyma echogenicity pattern in young Montana bulls classified as sound and unsound for breeding. Fifty-two young Montana Tropical Compound bulls from 22 to 33 months of age were used. The animals were previously evaluated by breeding soundness evaluation and thereafter divided into two groups of breeding soundness classes: 1 = 16 animals sound for breeding; 2 = 36 animals unsound for breeding by means of physical and morphological analysis of semen. All animals underwent an ultrasound examination of the testes, and the images were analyzed with the software "Image J". ANOVA was used for statistical analysis, to determine the effect of groups in relation to testicular measurements, physical and morphological semen features and ultrasound pixel analysis. There was a difference between scrotal circumference between classes, with 39.7±2.1 cm and 37.3±3.1 cm for sound and unsound animals, respectively. Regarding testicular echotexture, mean values for the pixel intensity were 95.7 and 94.0 for sound and unsound animals for breeding, respectively, with no difference between the classes. None of the studied parameters were correlated with each other, indicating that the quantification of the pixel intensity in testicular echotexture was not effective in determining the degree of sexual maturity in Montana Tropical Compound bulls.Item Uso de própolis e ácido ascórbico na criopreservação do sêmen caprino(Revista Brasileira de Zootecnia, 2008-12-29) Castilho, Erick Fonseca de; Guimarães, José Domingos; Martins, Leonardo Franco; Pinho, Rogério Oliveira; Guimarães, Simone Eliza Facioni; Espeschit, Cláudio José BorelaOs objetivos neste estudo foram verificar se a própolis e o ácido ascórbico têm efeito sobre a integridade da membrana plasmática dos espermatozoides de caprinos e investigar o potencial desses antioxidantes no uso de meios diluidores de criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco bodes adultos das raças Alpina (n = 2) e Saanen (n = 3). Após a coleta de sêmen, realizaram-se o exame físico do sêmen e morfológico dos espermatozoides, o teste supravital e o teste hiposmótico. Em seguida, o sêmen fresco foi diluído com o diluidor Bioxcell® (controle); Bioxcell® + 0,25% de extrato liofilizado de própolis; Bioxcell® + 0,5% de extrato liofilizado de própolis; Bioxcell® + 0,05% de ácido ascórbico; ou Bioxcell® + 0,25% de ácido ascórbico. Após as diluições finais, foram avaliados a motilidade e o vigor espermático obtidos com cada diluidor e posteriormente o sêmen foi submetido a envase, resfriamento e congelamento. No sêmen fresco, os aspectos físicos e morfológicos e os resultados dos testes supravital e hiposmótico não diferiram entre os animais nem entre raças. As médias gerais de motilidade e vigor espermático e dos testes supravital e hiposmótico obtidos logo após o descongelamento e após 3 horas de teste de termorresistência diferiram entre si, de modo que o diluidor contendo ácido ascórbico e o controle foram similares e superiores àqueles contendo própolis. O ácido ascórbico mantém a integridade estrutural da membrana dos espermatozoides durante o processo de criopreservação, bem como sua viabilidade após o teste de termorresistência, e pode ser uma alternativa na composição de diluentes para criopreservação de sêmen caprino; a própolis não é eficaz na manutenção da integridade e da viabilidade espermática pós-descongelamento e é tóxica aos espermatozoides nas concentrações de 0,25 e 0,5%.