Navegando por Autor "Freitas, Rejane do Livramento"
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Item Evidence for the sucrose-binding protein role in carbohydrate metabolism and transport at early developmental stage(Physiologia Plantarum, 2006-10-18) Waclawovsky, Alessandro Jaquiel; Loureiro, Marcelo Ehlers; Rocha, Carolina da Silva; Freitas, Rejane do Livramento; Cano, Marco Antonio Oliva; Fontes, Elizabeth Pacheco BatistaDespite the large amount of data regarding sucrose‐binding proteins (SBP), their functions remain largely unknown and controversial. In this investigation we performed a detailed temporal and spatial characterization of the phenotypes related to photosynthesis, sucrose exudation and carbohydrate metabolism in SBP antisense plants to gain insights into the physiological role of SBP. Significant reductions in net photosynthesis and in stomatal conductance were observed in the SBP antisense lines but were restricted to the vegetative phase, and persisted during a daily time course at this phase. Photosynthesis was saturated at a substantially lower irradiance in source leaves of the antisense lines, suggesting that light utilization is decreased in these plants. A slight reduction in soluble sugars was observed throughout the development of source leaves, partially overlapping a decrease in sucrose synthase activity (EC 2.4.1.13); whereas a transient increase in starch and adinosine diphosphate (ADP)‐glucose pyrophosphorylase activity (EC 2.7.7.27) as well as decreased leaf sucrose exudation were detected in the beginning of the vegetative phase. These changes in source leaves were accompanied by reductions in sucrose and starch in sink leaves, hexoses and sucrose in roots and hexoses in shoot apex, which were observed before the occurrence of a significant reduction in height and in leaf number in the transgenic lines. These alterations in growth parameters did not persist throughout the development, but were associated with a delay in flowering time and leaf senescence in the SBP antisense lines. A likely involvement of SBP in sink strength is discussed.Item Identificação de regiões no promotor do gene SBP2 (sucrose binding protein) de soja que conferem expressão espacial específica(Universidade Federal de Viçosa, 2007-03-29) Freitas, Rejane do Livramento; Almeida, Andréa Miyasaka de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4792501H4; Loureiro, Marcelo Ehlers; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4780851Y3; Fontes, Elizabeth Pacheco Batista; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781848H2; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4737720E9; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8; Carvalho, Claudine Márcia; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4794965T6O promotor do gene SBP2 (sucrose binding protein) de soja é capaz de dirigir a expressão tecido vascular-específica de genes repórteres em plantas transgênicas de tabaco. Esta regulação se deve à presença de domínios cisregulatórios distais (CRD-A, posição -2000 a -700) presentes no promotor. Neste trabalho, a atividade tecido-específica de CRD-A foi confirmada por meio de experimentos de ganho-de-função, nos quais o fragmento CRD-A foi diretamente fusionado ao gene repórter GUS e às construções -136pSBP2-GUS e -92pSBP2-GUS e sua atividade avaliada no sistema heterólogo de tabaco. CRDA foi capaz de reduzir a atividade de GUS em todos os órgãos analisados, restaurando, em alguns casos, o padrão tecido-específico do promotor completo. Além disso, observou-se que CRD-A é capaz de promover a transcrição de GUS, independente de promotor mínimo, indicando a presença de cis-elementos capazes de promoverem a transcrição basal. De fato, nessa região (-2000 a -700) foram identificados vários elementos TATA box, localizados nas posições -790, -783 e -761, que podem potencialmente funcionar como TATA boxes alternativos. No intuito de delimitar os cis-elementos responsáveis pelo padrão tecido-específico do promotor SBP2, a seqüência -2000 a -700 foi dividida em cinco fragmentos, os quais foram inseridos na construção -92pSBP2-GUS, e utilizados para obtenção de plantas transgênicas. Análises histoquímicas revelaram que todos os fragmentos foram capazes de reduzir a atividade do promotor SBP2, uma vez que sua inserção na extremidade 5 de -92pSBP2 alterou o padrão de expressão constitutiva do mesmo. Com base nestes resultados, diversas regiões potencialmente regulatórias foram identificadas. A região compreendida entre -1765 e -945 deve conter fortes elementos repressores para o ápice caulinar, capazes de abolir totalmente a atividade do promotor, enquanto que a região entre -944 e -705 demonstrou conter elementos repressores mais fracos, que restringiram a expressão ao tecido vascular. Foram encontrados vários elementos silenciadores para a raiz, tanto para o meristema radicular (região entre -1765 e -705), quanto para a zona de alongamento (de -1765 a -1485 e de -1211 a -945). Além disso, a região de -1765 a -1485 também apresenta um forte repressor para raiz, cujo efeito deve ser atenuado por ciselementos presentes entre -1485 e -705. Por fim, foi identificado um elemento responsável por restringir a expressão apenas ao floema interno no caule, na região entre -1485 e -1212. A funcionalidade dos cis-elementos identificados foi avaliada através do ensaio de mudança na mobilidade eletroforética (EMSA), tendo sido observada a interação seqüência-específica entre possíveis transfatores presentes em extratos nucleares de soja e de tabaco e o fragmento -1765/-1485 (fragII) de GmSBP2. A fim de verificar se o acúmulo da proteína SBP2 correlaciona-se com a atividade do promotor em tecidos específicos, foi obtida a proteína quimérica SBP2-GFP, sob o controle do promotor SBP2, em tabacos transgênicos. A análise de fluorescência revelou que a proteína SBP2 está, de fato, localizada na região de tecido vascular, consistente com o padrão de atividade do gene repórter e com seu envolvimento nos processos fisiológicos dependentes de translocação de sacarose.