Navegando por Autor "Coelho, Irene da Silva"
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Item Identificação de genes expressos durante a fase pré-simbiótica da associação ectomicorrízica entre Hydnangium sp. e Eucalyptus grandis e transformação de fungos ectomicorrízicos(Universidade Federal de Viçosa, 2008-11-27) Coelho, Irene da Silva; Costa, Maurício Dutra; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728228J5; Queiroz, Marisa Vieira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785812Z5; Araujo, Elza Fernandes de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783675E2; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4735662J0; Kasuya, Maria Catarina Megumi; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4721444T5; Cascardo, Júlio Cezar Mattos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723204T2; Brommonschenkel, Sérgio Hermínio; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4780948Y4A expressão de genes do fungo ectomicorrízico Hydnangium sp. na fase pré-simbiótica foi avaliada utilizando-se a técnica de micorrização in vitro visando a construção de uma biblioteca subtrativa supressiva de cDNA. O fungo foi cultivado na presença de raízes de Eucalyptus grandis, sem, no entanto, haver contato direto das hifas com o sistema radicular da planta hospedeira. Foram identificados genes que codificam possíveis proteínas relacionadas com o metabolismo de carboidratos, de aminoácidos e energético, transcrição e síntese de proteínas, comunicação celular, transdução de sinal, resposta a estresse, transposons e proteínas relacionadas à biogênese de componentes celulares. A expressão dos genes que codificam piruvato desidrogenase, ATP sintase, proteína do canal seletivo de íon dependente de voltagem, acetil-CoA acetiltransferase e hidrofobina foi avaliada por RT-PCR quantitativo. A expressão diferencial destes genes durante a fase pré-simbiótica confirmou a ativação dos genes relacionados à beta-oxidação e ao metabolismo mitocondrial, além de validar a biblioteca subtrativa supressiva construída. A construção da biblioteca subtrativa de Hydnangium sp. possibilitará o estudo de diferentes genes relacionados à micorrização, auxiliando o entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na associação ectomicorrízica. Para a transformação de Hydnangium com PEG/CaCl2 foi necessário otimizar as condições de obtenção e regeneração de protoplastos. A maior produção de protoplastos, 1,06 x 107 protoplastos/mL, foi obtida após duas horas em KCl 0,6 M, na presença de 20 mg/mL da preparação hidrolítica Lysing Enzymes e 0,3 g de micélio fúngico com dois dias de idade. Para regeneração de protoplastos foram testados diferentes estabilizadores osmóticos, concentrações de ágar no meio MNM e tempos de incubação da preparação hidrolítica. Entretanto, até o presente momento, não foram estabelecidas as condições que permitissem a regeneração dos protoplastos de Hydnangium sp. Para o estabelecimento da transformação de Hydnangium sp. mediada por Agrobacterium tumefaciens vários parâmetros foram testados, mas não foi possível a transformação desse fungo. Uma das razões desse insucesso pode ser devido a inibição da agrobactérias testadas pelo Hydnangium sp. A transformação do fungo ectomicorrízico Laccaria laccata mediada por A. tumefaciens foi estabelecida com uma eficiência de transformação de 32,6 %. A integração do gene hph no genoma das linhagens transformantes foi confirmada pela detecção de um fragmento de DNA de 690 pb que corresponde ao tamanho esperado. Os transformantes, com cópia única do T-DNA inserida no genoma, serão testados quanto à capacidade de formar micorrizas, visando a seleção de mutantes.Item Morphological and molecular characterization of Pisolithus in soil under eucalyptus plantations in Brazil(Revista Brasileira de Ciência do Solo, 2010-10) Kasuya, Maria Catarina Megumi; Coelho, Irene da Silva; Campos, Daniela Tiago da Silva; Araújo, Elza Fernandes de; Tamai, Yutaka; Miyamoto, ToshizumiEighteen Pisolithus basidiomes were collected from Eucalyptus plantations in the state of Minas Gerais, Brazil. These basidiomes were characterized morphologically and molecularly. The basidiomes varied in shape, color and size. One of them was found underground, indicating a hypogeous fungus. The main morphological distinctive characteristic was spore ornamentation, which distinguished two groups. One group with short and erect spines was identified as Pisolithus microcarpus, and the other with long and curved spines as Pisolithus marmoratus, after analyzing the cladogram obtained by phylogenetic relationship based on internal transcribed spacer (ITS) regions of the nuclear ribosomal DNA of these isolates.Item Morphological and molecular characterization of Tulasnella spp. fungi isolated from the roots of Epidendrum secundum, a widespread Brazilian orchid(Symbiosis, 2014-02) Pereira, Marlon Corrêa; Coelho, Irene da Silva; Valadares, Rafael Borges da Silva; Oliveira, Sabrina Feliciano; Bocayuva, Melissa; Pereira, Olinto Liparini; Araújo, Elza Fernandes; Kasuya, Maria Catarina MegumiTulasnella spp. are the main fungal symbionts of Brazilian Epidendrum orchids. The taxonomy of these fungi is largely based on ITS rDNA similarity, but culture dependent techniques are still essential to establish the true biological entity of the mycobiont. The aim of this study was to characterize morphologically and molecularly 16 Tulasnella spp. fungi isolated from three different populations of E. secundum and to test the coincidences between morphological and molecular characterization. Two uninucleate rhizoctonia fungi, obtained from Oncidium barbaceniae, and two phytopathogenic isolates were included as outgroups. Qualitative and quantitative morphological characteristics were analyzed using multivariate statistics and were able to distinguish Ceratobasidium, Tulasnella and Thanatephorus genera and separate the isolates of Tulasnella spp. into two groups. Analysis of RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) and ITS rDNA sequences validated the morphological data. Symbionts of O. barbaceniae presented identity to ITS sequences of Ceratobasidium genus, while E. secundum isolates presented identity to two species of Tulasnella. We observed homogeneity among Tulasnella spp. obtained from a single population and from neighboring populations, but there was higher variability among isolates obtained from populations of regions that were farther apart. Morphological data associated with multivariate statistics proved to be a useful tool in the multi-level taxonomy of these orchid-associated fungi and in estimating the diversity of orchid mycorrhizal fungi.Item Obtenção e regeneração de protoplastos e cariótipo eletroforético de fungos micorrízicos de orquídeas(Universidade Federal de Viçosa, 2005-02-14) Coelho, Irene da Silva; Araújo, Elza Fernandes de; http://lattes.cnpq.br/2191695584157582O objetivo deste trabalho foi padronizar as condições de obtenção e regeneração de protoplastos de Epulorhiza repens e Ceratorhiza sp. e determinar o cariótipo eletroforético de Ceratorhiza sp. Para o fungo Epulorhiza repens, a maior produção de protoplastos, 8,0 x 10 6 protoplastos/mL, foi obtida em KCl 0,6 M, na presença de 15 mg/mL de “Lysing Enzymes” e 0,5 g de micélio fúngico com 2 dias idade, após fragmentação em liquidificador. A maior freqüência de regeneração obtida foi de 8,5 % quando sacarose 0,5 M foi utilizada como estabilizador osmótico. Do total de protoplastos obtidos, 58,6 % eram uninucleados, 21,4 % binucleados e 20 % anucleados. Para o fungo Ceratorhiza sp., a maior produção de protoplastos, 4,0 x 10 7 protoplastos/mL, foi obtida em NaCl 0,6 M, na presença de 15 mg/mL de “Lysing Enzymes” e 15mg/mL de Glucanex, 0,5 g de micélio fúngico com 2 dias de idade, após fragmentação em liquidificador. A maior freqüência de regeneração obtida foi de 6,7 % utilizando sacarose 0,5 M como estabilizador osmótico. Do total de protoplastos obtidos, 61 % eram uninucleados, 24,6 % binucleados, 3,2 % trinucleados e 11,2 % anucleados. O cariótipo eletroforético do fungo Ceratorhiza sp. apresentou no mínimo, 3 cromossomos cujos tamanhos foram estimados em 4,6; 3,5 e 2,2 Mb. A maior intensidade da banda de 4,6 Mb sugere que esta possa estar representando dois cromossomos, sendo o tamanho do genoma estimado em pelo menos 14,9 Mb. O estabelecimento de protocolos otimizados para obtenção e regeneração de protoplastos dos fungos Epulorhiza repens e Ceratorhiza sp. é importante, permitindo o estabelecimento de técnicas de transformação genética, o isolamento de mutantes, a determinação de cariótipo eletroforético e o cruzamento de linhagens. O cariótipo de Ceratorhiza sp. é importante para a determinação do número e do tamanho dos cromossomos, para se estimar o tamanho do genoma e a localização de genes relacionados à formação de micorrizas.Item Production and regeneration of protoplasts from orchid Mycorrhizal Fungi Epulorhiza repens and Ceratorhiza sp.(Brazilian Archives of Biology and Technology, 2010-01) Coelho, Irene da Silva; Queiroz, Marisa Vieira de; Costa, Maurício Dutra; Kasuya, Maria Catarina Megumi; Araújo, Elza Fernandes deThe aim of this work was to study the standardization of conditions to obtain and regenerate Epulorhiza repens and Ceratorhiza sp. protoplasts. For E. repens, the largest number of protoplasts (8.0 × 106 protoplasts/mL) was obtained in 0.6 M KCl, using 15 mg/mL of Lysing Enzymes, and 2-day-old fungal mycelium. When 0.5 M sucrose was used as osmotic stabilizer, the highest frequency of regeneration was achieved (8.5 %); 80.0 % of protoplasts were nucleated, and 20.0 % anucleated. For Ceratorhiza sp., the largest number of protoplasts (4.0 × 107 protoplasts/mL) was achieved in 0.6 M NaCl, when 15 mg/mL of Lysing Enzymes and 15mg/mL of Glucanex, with 2-day-old fungal mycelium were used. The highest frequency of regeneration was 6.7 % using 0.5 M sucrose as osmotic stabilizer; 88.8 % of protoplasts were nucleated, and 11.2 % anucleated.