Infecção experimental em modelo suíno com isolados brasileiros de Mycoplasma hyopneumoniae: avaliação da patogenicidade e resposta imune

Abstract

O Mycoplasma hyopneumoniae (Mhyo) é considerado o causador primário da pneumonia enzoótica suína (PES). Diante disso, a obtenção de novos isolados patogênicos e estudos acerca da patogenicidade e mecanismos de resposta imune se fazem necessários. Este trabalho realizou uma infecção experimental em modelo suíno para avaliar a patogenicidade de dois isolados de Mhyo (UFV01 e UFV02). O estudo foi dividido em 3 grupos, sendo um grupo controle negativo (n=4) e dois grupos testes contendo (n=8). Eles foram desafiados aos 35 dias de idade por via intratraqueal com 10 7 CCU (Color Change Unit). Foram coletadas amostras de swab laringeal e soro nos dias 0, 7, 14, 21, 28 e 35 pós inoculação (dpi) para avaliar a soroconversão, citocinas e excreção do agente por qPCR. Ao fim, todos foram eutanasiados para avaliar o escore das lesões macro e microscópicas dos pulmões e a carga bacteriana por qPCR. O grupo UFV01 teve uma soroconversão (IgG) mais precoce e maior (100%), enquanto apenas 50% dos animais do grupo UFV02 soroconverteu, o mesmo resultado foi obtido quando analisado a presença de IgA em lavado traqueobrônquico (LTB) aos 35 dias de infecção. O Grupo UFV01 apresentou aos 35 dias score de lesão macroscópica média de 11,75 % e o UFV02 3,125%. As lesões microscópicas foram mais intensas no grupo UFV01, apresentando maior frequência de lesões moderadas de hiperplasia de BALT, broncopneumonia e casos de pleurite. As amostras de swab laringeal o início da detecção se deu aos 14 dias. O grupo UFV01 teve 75% positividade aos 14dpi (3,76x10 2 ), 87,5% aos 21dpi (4,36x10 2 ), 100% aos 28dpi (1,44x10 3 ) e 87,5% aos 35dpi (1,25x10 4 ). Já o grupo UFV02 também iniciou sua excreção aos 14dpi, porém com uma positividade de 37,5% (1,82x10 2 ), aos 21dpi 75% (8,33x10 2 ), 28dpi (87,50%) e aos 35dpi 87,5% (2,5x10 3 ). Já a carga bacteriana média detectada no LTB, tecido e swab lesão aos 35dpi foi de 3,57x10 5 , 2,63x10 6 cópias∕ μL e 6,69x10 4 cópias∕ ng de DNA total, respectivamente para o grupo UFV01 e 6,32x10 6 , 3,92x10 6 cópias∕ μL e 7,18x10 4 cópias∕ ng de DNA para o grupo UFV02. Os resultados poderão auxiliar no desenvolvimento de vacinas, kits de diagnóstico e estabelecimento de modelos para testes de protocolos terapêuticos contra esse agente. Palavras-chave: UFV01. UFV02. Doença respiratória. Desafio experimental. Suíno.

Mycoplasma hyopneumoniae (Mhyo) is the primary cause of swine enzootic pneumonia (PES). Therefore, the acquisition of new pathogenic isolates and studies on pathogenicity and immune response mechanisms are necessary. In this sense, this work carried out an experimental infection in a swine model to evaluate the virulence of two Brazilian Mhyo isolates entitled UFV01 and UFV02. The study was divided into three groups, one negative control group (n=4) and two containing test groups (n=8). They were challenged at 35 days of age intratracheally with Mhyo 10 7 CCU (Color Change Unit). Laryngeal swabs and serum samples were collected on days 0, 7, 14, 21, 28 and 35 post-infection (dpi) to assess seroconversion and agent excretion by qPCR. In the end, all were euthanized to evaluate the score of macro and microscopic lesions of the lungs and the bacterial load present by qPCR. The UFV01 group had an earlier and greater seroconversion (IgG) (100%) while only 50% of the UFV02 group seroconverted; the same result was obtained when analyzing the presence of IgA in tracheobronchial lavage (LTB) at 35 days of infection. The UFV01 Group presented a mean macroscopic lesion score of 11.75% at 35 days and the UFV02 3.125%. The microscopic lesions were more intense in the UFV01 group, with a higher frequency of moderate lesions of BALT hyperplasia, bronchopneumonia and cases of pleuritis. The laryngeal swab samples were evaluated by qPCR, detection began after 14 days. The UFV01 group had 75% positivity at 14dpi (3.76x10 2 ), 87.5% at 21dpi (4.36x10 2 ), 100% at 28dpi (1.44x10 3 ) and 87.5% at 35dpi (1.25x10 4 ). The UFV02 group also started its excretion at 14dpi, but with the positivity of 37.5% (1.82x10 2 ), at 21dpi 75% (8.33x10 2 ), 28dpi (87.50%) and at 35dpi 87.5% (2.5x10 3 ). The mean bacterial load detected in the LTB, tissue and lesion swab at 35dpi was 3.57x10 5 , 2.63x10 6 and 6.69x10 4 copies∕ μL, respectively for the UFV01 group and 6.32x10 6 , 3.92x10 6 and 7.18x10 4 copies ∕ μL for the UFV02 group. The results can help in the development of new vaccines, diagnostic kits and establishment of experimental models for testing therapeutic protocols against this agent. Keywords: UFV01. UFV02. Respiratory disease. Experimental challenge. Swine