Avaliação da relação funcional entre Serine arginine protein kinase 2 (SRPK2) e Thymosin beta 4 (Tβ4) em melanoma metastático murino

Abstract

Melanoma é uma forma de câncer que emerge das células pigmentares da pele, conhecidas como melanócitos. Apresenta alto risco de desenvolver metástase e, com isso, altas taxas de mortalidade. O peptídeo Tβ4, sequestrador de actina endógeno de 4,9 kDa, atua na motilidade celular, transição epitelial-mesenquimal (EMT) e outras múltiplas atividades biológicas, incluindo metástase tumoral. Anteriormente, identificamos uma possível ligação funcional entre Tβ4 e Serine Arginine Protein Kinase 2 (SRPK2), uma proteína relacionada ao controle do splicing do pré-mRNA e que têm sido encontradas superexpressas em diversos tumores, incluindo o melanoma. O objetivo deste estudo foi investigar a relação funcional e a interação entre Tβ4 e SRPK2 no contexto do melanoma metastático. Ensaios fenotípicos in vitro de proliferação celular, migração e formação de colônias foram realizados em células B16F10 de tipo selvagem ou modificadas por CRISPR-Cas9. A dinâmica da actina foi investigada em ensaios de imunofluorescência. Ensaio de ELISA foi realizado para observar a interação. O melanoma metastático foi induzido em camundongos através da injeção de células B16F10. Podemos observar que a expressão de Tβ4 correlaciona-se com mau prognóstico em pacientes com melanoma metastático. Por meio dos ensaios in vitro, observamos que seu efeito na promoção da proliferação celular, migração e formação de colônias foi prejudicado pelo inibidor farmacológico de SRPK ou pela depleção genética de SRPK2. Assim, o Tβ4 promoveu a organização dos lamelipódios da actina, que também foi afetada negativamente pela depleção funcional do SRPK. Além disso, os tratamentos com um inibidor farmacológico de SRPK (SRPIN340) ou com a depleção impediram o crescimento induzido por tumor Tβ4 in vivo. Juntos, esses resultados sugerem que SRPK2 transduz o sinal de Tβ4 em células tumorais para afetar a organização da actina e possivelmente o splicing do pré-mRNA, o que deve ser melhor investigado no contexto do melanoma metastático. Palavras-chave: Melanoma, Tβ4, SRPK2, metástase.Melanoma is a form of cancer that arises from the pigment-producing cells of the skin, known as melanocytes. It carries a high risk of developing metastasis and, consequently, high mortality rates. The 4.9 kDa endogenous actin-sequestering peptide, Tβ4, plays a role in cell motility, epithelial-mesenchymal transition (EMT), and various other biological activities, including tumor metastasis. Previously, we identified a potential functional link between Tβ4 and Serine-Arginine Protein Kinase 2 (SRPK2), a protein involved in the regulation of pre-mRNA splicing that has been found to be overexpressed in various tumors, including melanoma. The objective of this study was to investigate the functional relationship and interaction between Tβ4 and SRPK2 in the context of metastatic melanoma. In vitro phenotypic assays of cell proliferation, migration, and colony formation were conducted using wild-type and CRISPR-Cas9 modified B16F10 cells. Actin dynamics were investigated using immunofluorescence assays. ELISA was performed to observe the interaction. Metastatic melanoma was induced in mice through the injection of B16F10 cells. We observed that Tβ4 expression correlates with poor prognosis in patients with metastatic melanoma. In vitro assays showed that Tβ4's effect on promoting cell proliferation, migration, and colony formation was impaired by either pharmacological inhibition of SRPK or genetic depletion of SRPK2. Consequently, Tβ4 promoted the organization of actin lamellipodia, which was also adversely affected by functional depletion of SRPK. Additionally, treatments with a pharmacological inhibitor of SRPK (SRPIN340) or depletion inhibited Tβ4-induced tumor growth in vivo.Together, these results suggest that SRPK2 transduces the Tβ4 signal in tumor cells to affect actin organization and possibly pre-mRNA splicing, warranting further investigation in the context of metastatic melanoma. Keywords: Melanoma, Tβ4, SRPK2, metastasis