Cultivo in vitro e transformação de soja visando o silenciamento da oleoil dessaturase por RNAi.

Abstract

Este estudo teve como objetivo avaliar o desenvolvimento in vitro de plântulas de soja obtidos a partir de eixos embrionários crescidos sob diferentes condições e realizar a transformação de eixos embrionários imaturos para silenciar o gene oleoíl dessaturase usando RNA de interferência. Os resultados demonstram que as concentrações dos componentes do meio de cultivo (sais, sacarose , agentes de gelificantes) e as variações de pH afetam o desenvolvimento inicial do eixo embrionário de soja, o que sugere que estas adaptações sejam genótipo-específicas. O ensaio troca gasosa em presença de sacarose mostraram que a oferta de sacarose deu suporte para o desenvolvimento in vitro dos eixos embrionários de soja. Além disso, as plântulas cultivadas em recipientes com membranas alternativas (preparadas com um filme de politetrafluoroetileno e três camadas de fita micropore) apresentaram desenvolvimento semelhante ao das plântulas cultivadas em frascos com membranas comerciais (MilliSeal® AVS -045 Air Vent), tendo como vantagem o baixo custo . Durante o ensaio de transformação, para a descontaminação de vagens imaturas, foi usando um tratamento adaptado da descontaminação de sementes de soja. As estratégias utilizadas neste estudo permitiu uma obtenção de 29 plantas aclimatizadas. Sete plantas destas apresentando produtos de amplificação com o tamanho esperado (421 pb), evidenciando a transformação. Entre estas, quatro plantas produziram sementes. O protocolo baseado em transformação do eixo de embrionário imaturo proporcionou uma eficiência de transformação 1,3-2,6 %.This study aimed to evaluate the in vitro development of soybean seedlings obtained from the embryonic axis growed under different conditions and perform the transformation of immatures embryonics axis to silencing the oleyl desaturase gene by using RNA of interference. The results revealed that the concentrations of the components of growth medium (salt, sucrose, gelling agents) and the pH variations affected the initial development of the soybean embryonic axis, suggesting that these adaptations are genotyp-specific. The gas exchange assay in presence of sucrose showed that the supply of sucrose gave support to the in vitro development of the embryonic axis of soybean. Furthermore, the seedlings grown inside jars with alternative membranes (prepared with polytetrafluoroethylene film and three layers of microporus tape) exhibited similar development as such seedlings grown inside jars with comercial membranes (MilliSeal® AVS-045 Air Vent), with the advantage of low cost. During the transformation assay, we succeeded in decontaminating immature pods by using an adapted treatment for descontamination of soybean seeds. The strategies used in this study allowed us to obtain 29 acclimatized plants. Seven plants were transformed, owning amplicons with the expected size (421 pb), which confirmed the transformation. Among these, four plants produced seeds. The protocol based on transformation of the immature embryonic axis exhibited an efficiency of transformation from 1.3 to 2.6%.