Prospecção tecnológica e desenvolvimento de estratégias de diagnóstico de leptospirose

Abstract

A leptospirose é uma doença infecciosa febril causada por variedades patogênicas do gênero Leptospira, e é considerada uma das zoonoses de maior projeção mundial. Os roedores são os principais reservatórios dessas bactérias, mas outros animais silvestres e domésticos, como equinos, bovinos e cães, também participam da sua transmissão, que se dá principalmente através do contato com a urina de indivíduos infectados. Apesar do crescente interesse na área, ainda ha uma falta de alternativas acessíveis e eficientes para o diagnóstico de leptospirose em cães. Assim, neste trabalho propomos a utilização de duas proteinas quiméricas como antígenos para o diagnóstico sorológico de leptospirose canina. As proteinas recombinantes foram produzidas em E. coli, e recuperadas purificadas com rendimento de 4,467 e 77,957 mg/L. Foi empregado a técnica de ELISA indireto, utilizando ambas as quimeras como antígeno, para detectar anticorpos dos tipos IgG e IgM em amostras de soro. Resultados de MAT das amostras foram utilizados como referência para avaliação da eficiência do diagnóstico por ELISA. Foram avaliadas diferentes condições para o diagnóstico, e a acurácia geral dos ensaios variou de 57 à 80 %, sendo que a capacidade de predição de valores positivos foi de aproximadamente 85 % para IgG e 75 % para IgM. Demonstramos assim que as quimeras construídas apresentam potencial para auxiliar no diagnóstico de leptospirose canina. Além disso, foi construído um patent landscape com objetivo de descrever o cenário de desenvolvimento de soluções biotecnológicas para o campo de doenças infecciosas caninas. Esses dados demonstraram a relevante participação das instituições de ensino públicas no desenvolvimento de produtos de biotecnologia, e reforçaram a importância das parcerias público-privadas no avanço científico. Palavras-chave: Leptospira. Leptospirose em animais. Diagnóstico. Ensaio de imunoabsorção enzimática.Leptospirosis 1s a febrile infectious disease caused by pathogenic varieties of the genus Leptospira, and is considered one of the most widespread zoonoses worldwide. Rodents are the main reservoirs of these bacteria, but other wild and domestic animals, such as horses, cattle and dogs, also participate in their transmission, which occurs mainly through contact with the urine of infected individuals. Despite the growing interest 1n the area, there 1s still a lack of affordable and efficient alternatives for the diagnosis of leptospirosis 1n dogs. Thus, in this work we propose the use of two chimeric proteins as antigens for the serological diagnosis of canine leptospirosis. Recombinant proteins were produced in £. coli, and recovered and purified in ylelds of 4.467 and 7.957 mg/L for Chimeras | and 4, respectively. The indirect ELISA technique was performed, using both chimeras as antigen, to detect IgG and IgM antibodies in serum samples. MAT results of the samples were used as a reference to evaluate the efficiency of the ELISA diagnosis. Different conditions for diagnosis were evaluated, and the general accuracy of the assays ranged from 57 to 80 %, and the ability to predict positive values was approximately 85 % for IgG and 75 % for IgM. We thus demonstrate that the constructed chimeras have the potential to aid in the diagnosis of canine leptospirosis. Additionally, a patent landscape was constructed with the aim of describing the scenario of biotechnological solutions development for the field of canine infectious diseases. These data demonstrated the relevant participation of public educational institutions in the development of biotechnology products, and reinforced the importance of public-private partnerships in scientific advancement. Keywords: Leptospira. Leptospirosis in animals. Diagnosis. Enzyme-linked immunosorbent assay.