Expressão heteróloga de proteínas do vírus dengue em Komagataella phaffii para padronização de kits de diagnósticos

Abstract

O diagnóstico preciso, confiável e diferencial na fase inicial da infecção pelo Vírus da Dengue (DENV) é fundamental diante do risco de agravamentos da doença. Os sintomas de cada paciente podem variar muito, indo desde uma doença autolimitada chamada Febre da Dengue (FD) ou Dengue Clássica (DC), até às formas mais severas, como a Febre da Dengue Hemorrágica (FDH) e a Síndrome de Choque da Dengue (SCD), variando dentro de um espectro contínuo onde muitos pacientes apresentam sintomas leves acabam não recebendo tratamento adequado e, muitas vezes, não recebem o diagnóstico de infecção. Com o objetivo de padronizar e formular um diagnóstico preciso e confiável, através da expressão de proteína em K.Phaffi para obtenção do domínio III da proteína estrutural E dos DENV-1 e DENV-4, em larga escala, capaz de identificar a fase inicial da infecção pelo vírus, sendo fundamental diante do risco de agravamentos da doença, com potencial risco de morte. Utilizamos um sistema de expressão heteróloga de proteínas, para expressão do domínio III da proteína estrutural E do DENV-2 e -4. Onde atualmente, os principais centros de pesquisa e diagnóstico do mundo têm apresentado dificuldades na obtenção de preparações com conteúdo adequado de antígeno, necessitando concentrar o antígeno através de centrifugação zonal contínua de sobrenadantes de culturas infectadas, uma vez que a produção do DENV em culturas celulares é relativamente baixa. Este quadro ratifica a existência do obstáculo importante, à produção de antígenos, a serem empregados em ensaios usados na captura do anticorpo presente no soro do paciente infectado. Nesse sentido, concluímos que o sistema heterólogos de expressão de proteínas mostrou-se promissores devido ao alto rendimento, integridade antigênica e custo reduzido para produção em escala e abrir caminhos para produção de testes diagnósticos menos onerosos. Palavras-chave: Antígenos. Domínio III. Estrutural. Envelope.Accurate, reliable and differential diagnosis in the initial phase of Dengue Virus (DENV) infection is essential given the risk of disease worsening. The symptoms of each patient can vary greatly, ranging from a self-limited illness called Dengue Fever (DF) or Classic Dengue (CD), to more severe forms such as Dengue Hemorrhagic Fever (DHF) and Dengue Shock Syndrome (SCD), ranging within a continuous spectrum where many patients have mild symptoms end up not receiving adequate treatment and often do not receive the diagnosis of infection. With the objective of standardizing and formulating an accurate and reliable diagnosis, through the expression of protein in K.Phaffi to obtain domain III of the structural protein E of DENV-1 and DENV-4, on a large scale, capable of identifying the initial phase infection by the virus, which is essential given the risk of worsening the disease, with a potential risk of death. We used a heterologous protein expression system to express domain III of structural protein E of DENV-2 and -4. Where, currently, the main research and diagnostic centers in the world have had difficulties in obtaining preparations with adequate antigen content, requiring concentration of the antigen through continuous zonal centrifugation of infected culture supernatants, since the production of DENV in cell cultures is relatively low. This picture confirms the existence of an important obstacle to the production of antigens to be used in assays used to capture the antibody present in the serum of an infected patient. In this sense, we conclude that the heterologous protein expression system has shown to be promising due to the high yield, antigenic integrity and reduced cost for scale production and open ways for the production of less expensive diagnostic tests. Keywords: Antigens. Domain III. Structural. Envelope.