Avaliação da transferência de imunidade passiva em neonatos equinos pela técnica de eletroforese capilar

Abstract

A avaliação da transferência de imunidade passiva (TIP) consiste na mensuração da concentração sérica de Imunoglobulina G (IgG) nas primeiras horas de vida do neonato, a partir de métodos quantitativos e semi-quantitativos. No entanto, os métodos utilizados para essa análise apresentam limitações que, por vezes, influenciam sua aplicabilidade na prática clínica. Assim, torna-se necessário a validação de métodos alternativos que sejam de fácil execução e que disponibilizem resultados quantitativos, precisos e de forma rápida para aplicação na rotina de atendimentos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o desempenho da Eletroforese Capilar em Zona (CZE), método utilizado para a separação e quantificação de proteínas séricas, quanto ao seu uso na avaliação da transferência de imunidade passiva em neonatos equinos. Para isso, foram utilizadas 52 amostras de soro de potros neonatos hígidos, obtidas em dois momentos: logo após o nascimento e antes da ingestão do colostro (T0), e com 24 horas de vida (T24). A concentração de gamaglobulinas foi determinada pela técnica de CZE e os níveis séricos de IgG foi avaliado pelo método de IDR (IgG-IDR), método padrão-ouro para quantificação de IgG. No momento T0h, a concentração sérica de gamaglobulinas total foi de 0,48 ± 0,12 (g/dL). Valores iguais a 0 g/dL foram assumidos para a concentração de IgG-IDR no momento T0h. Com 24 horas de vida, a concentração total de gamaglobulinas e de IgG-IDR foram, respectivamente (média ± desvio- padrão), 2,51 ± 0,77 g/dL e 3,58 ± 0,77 g/dL. A fração gamaglobulina total (em porcentagem e em concentração) apresentou correlação positiva forte com a IgG- IDR (r = 0,73 e p < 0,001; r = 0,79 e p < 0,001). Além disso, a análise de regressão linear demonstrou uma relação significativa entre as variáveis, com valores preditos de IgG-IDR de 0,759 ± 0,108 g/dL a cada incremento de 1 g/dL de gamaglobulina total (R2 = 0,608; p < 0,001), e valores de IgG-IDR de 0,063 ± 0,011 g/dL com o aumento de 1% de gamaglobulina total (R2 = 0,521; p < 0,001). Uma equação para quantificar os níveis séricos de IgG-IDR foi estabelecida e pode ser utilizada para estimar a concentração de IgG de potros neonatos hígidos no primeiro dia de vida. As diferenças entre os resultados obtidos pela CZE e IDR foram submetidas à análise de Bland-Altman, onde verificou-se limites de concordância de 2,288 g/dL (superior) e – 1,188 g/dL (inferior), com a maior parte das observações dentro desse intervalo. A diferença média entre as medições obtidas (IDR – CZE) foi de 0,550 g/dL (550 mg/dL). Além disso, a inspeção visual do gráfico de Bland-Altman não revelou tendência evidente de aumento ou diminuição das diferenças ao longo da faixa de médias, sugerindo a ausência de viés de proporção. Embora a CZE subestime as concentrações de IgG em relação à IDR, a reprodutibilidade observada entre os métodos e o desempenho consistente da fração gamaglobulina na predição da concentração de IgG-IDR demonstram que a CZE é um método alternativo viável para avaliação da transferência de imunidade passiva em neonatos equinos hígidos. Palavras-chave: falha de transferência; gamaglobulinas; IgG; imunoglobulinas; imunodeficiênciaAssessment of passive immunity transfer (PIT) involves measuring serum IgG concentrations within the first hours of life using quantitative and semiquantitative methods. However, the techniques currently employed for this purpose present limitations that may affect their applicability in clinical practice. Thus, the validation of alternative methods that are easy to perform and capable of providing quantitative, accurate, and rapid results for routine clinical use is essential. This study aimed to evaluate the performance of Capillary Zone Electrophoresis (CZE), a technique used for the separation and quantification of serum proteins, in assessing passive immunity transfer in neonatal foals. A total of 52 serum samples from healthy neonatal foals were analyzed at two time points: immediately after birth and prior to colostrum ingestion (T0), and at 24 hours of age (T24). Gamma globulin concentrations were determined using CZE, and serum IgG levels were assessed by radial immunodiffusion (RID-IgG), the gold-standard method for IgG quantification. At T0, total gamma globulin concentrations were 0.48 ± 0.12 g/dL, and IgG-RID concentrations were assumed to be 0 g/dL. At 24 hours of age, total gamma globulin and IgG-RID concentrations were 2.51 ± 0.77 g/dL and 3.58 ± 0.77 g/dL (mean ± standard deviation), respectively. Total gamma globulin (percentage and concentration) showed a strong positive correlation with IgG-RID (r = 0.73, p < 0.001; r = 0.79, p < 0.001). Linear regression analysis demonstrated a significant relationship between the variables, with predicted IgG-RID values of 0.759 ± 0.108 g/dL for each 1 g/dL increase in total gamma globulin (R²= 0.608; p < 0.001) and 0.063 ± 0.011 g/dL for each 1% increase in total gamma globulin (R² = 0.521; p < 0.001). Equations to quantify serum IgG were created and can be used for estimating the neonate foal serum IgG in the first day of life. Differences between RID and CZE results were assessed using Bland-Altman analysis, which revealed limits of agreement of 2,288 g/dL (upper) and – 1,188 g/dL (lower), with most observations falling within this interval. The mean difference between measurements (RID - CZE) was 0,550 g/dL. Furthermore, visual inspection of the Bland-Altman plot showed no evident trend of increasing or decreasing differences across the range of mean concentration, suggesting the absence of proportional bias. Although CZE underestimated IgG concentrations relative to RID, the reproducibility observed between the methods and the consistent performance of the gamma globulin fraction in predicting IgG-RID concentrations demonstrate that CZE is a viable alternative to RID for evaluating passive immunity transfer in neonate foals. Keywords: failure of passive transfer; gamma globulins; immunodeficiency; IgG; immunoglobulins