Bioquímica Aplicada

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A função do chaperone molecular BiP na resposta a estresses abióticos
(Universidade Federal de Viçosa, 2019-02-01) Miguel, Larissa Pereira; Reis, Pedro Augusto Braga dos; http://lattes.cnpq.br/2034669888727358
A manutenção da homeostase em organismos vivos passa por mecanismos de percepção e propagação dos mais diversos sinais dentro da célula e do organismo como um todo por meio de complexas redes de sinalização.Vias de sinalização em planta possuem, muitas vezes, o papel de minimizar os efeitos deletérios de estresses bióticos e abióticos,por meio da ativação e repressão de genes específicos. Estes estresses são responsáveis por prejudicar o desenvolvimento e levar a perdas na produção. Desta maneira, diferentes estudos têm focadoem elucidar estasvias de sinalização com a finalidade de obter cultivares superiores. Dentre estas, a via de resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e a via mediada por proteínas ricas em asparaginas (NRPs), que transduzem sinais de morte celular originados de estresse no retículo endoplasmático (RE) e osmótico, exercem um papel de atenuação dos estresses e alterações relacionadas ao desenvolvimento. A chaperona molecular residente do RE, BiP, foi demonstrada retardar a indução de morte celular em condições de estresse ea senescência natural,regulando, assim, ambas as vias de sinalização. No entanto, o mecanismo pelo qual BiP controla estas vias é totalmente desconhecido. Desta forma, osobjetivos do presente trabalho foram(I) avaliar o papel do domínio ATPase e da atividade chaperona de BiP no processo de modulação das vias de resposta a estresses no RE, osmótico e de morte celular programada (II) Identificar possíveis candidatos moduladores supressores do mecanismo de tolerância à seca mediado por BiP. Foram geradas mutações no gene de BiPD no sítio de hidrólise do ATP (T44G) e no sítio de ligação ao ATP (G233D), com o propósito de demonstrar se a região chaperona de BiP influência na sua modulação das vias de sinalização. A partir destes mutantes, diferentes técnicas foram utilizadas para demonstrar que estas mutações levaram à perda de função de BiP. Experimentos de estresse hídrico foram realizados demonstrando que as plantas transformadas com o gene mutado ficaram mais susceptíveis à morte celular. Através do tratamento com tunicamicina (indutor de estresse no RE), o nível de expressão de genes da UPR aumentou nas plantas BiPD-T44G e BiPD-G233D, além do fenótipo de morte celular ter sido mais agravante comprovado pelo experimento de Azul de Evans e de infiltração. Além disso, o comportamento da indução de genes NRPs foi alterado nestas plantas, uma vez que houve um aumento da indução destes genes quando comparados com a planta superexpressando BiP. Os resultados obtidos indicam que a função chaperone de BiP está relacionada com a forma que BiP atua em resposta a estresse hídrico e estresse no RE. De forma a identificar possíveis moduladores do mecanismo de tolerância mediado por BiP, foram realizadas mutações com EMS em plantas superexpressando BiPD, e por meio do sequenciamento do genoma das mesmas foram selecionados possíveis supressores do mecanismo de tolerância à seca de BiP. Dentre os genes identificados, ZAR1 foi selecionado para estudo.Primeiramente foi demonstrado que ZAR1 apresenta expressão aumentada em plantas superexpressando BiPD. Além disso, foram obtidas plantas superexpressando e silenciadas para o gene ZAR1. Ensaio de infiltração de tunicamicina em Arabidopsisthalianamostrou que plantas superexpressando ZAR1 apresentam menor grau de clorose decorrente do processo de morte celular, enquanto que em plantas knock-down para ZAR1 este processo foi acelerado. Estudos mostraram que o regulador de proteína G, RGS1, possui função de dessensibilizar a sinalização mediada por proteína G, além de estar envolvido na regulação em resposta à seca. Este mecanismo ainda não é totalmente conhecido, entretanto foi identificado queproteínas LRRRLK são responsáveispela fosforilação de RGS1 ativando sua modulação das proteínas G. ZAR1 possui sítio de ligação à proteína G e pertence à família das LRRRLK, desta maneira ensaio de co-imunoprecipitação e ensaio de complementação de fluorescência bimolecular foram realizados e, a interação entre ZAR1 e RGS1 foi provada.No entanto, posteriores estudos precisam ser realizados para identificar o mecanismo envolvido nesta interação, além de qual resposta é desencadeada após essa interação. Estes resultados indicam uma correlação direta entre ZAR1 e morte celular induzida por tunicamicina e apontam favoravelmente para um envolvimento direto de ZAR1 como supressor do mecanismo de ação de BiP.
A subfamília SNAC-A (ATAF) em plantas: possíveis componentes a jusante da via de sinalização de morte celular mediada por proteínas NRP/DCDs
(Universidade Federal de Viçosa, 2018-07-26) Caetano, Hanna Durso Neves; Fontes, Elizabeth Pacheco Batista; http://lattes.cnpq.br/7510713204900151
A via de sinalização de morte celular mediada por proteínas NRP/DCDs foi primeiramente descrita em soja como uma via integrativa de resposta a múltiplos estresses. A falta de ferramentas moleculares adequadas à caracterização dessa via em soja levou ao estudo de sua conservação em espécies modelo. Em Arabidopsis, os membros da via foram descritos, no entanto não foi definido o ortólogo do gene GmNAC30. Neste trabalho, foi conduzida uma análise in silico da subfamília SNAC-A (ATAF), à qual pertence GmNAC30, demonstrando ser ela amplamente distribuída no reino vegetal. Em comparação com Arabidopsis, foi verificada uma expansão dessa subfamília em soja, o que pode estar relacionado à pressão seletiva que espécies cultiváveis sofrem a favor da manutenção de genes capazes de conferir tolerância a estresses. Consistente com essa ideia, a análise da expressão de alguns membros desse subgrupo em soja demonstrou que todos eles respondem a múltiplos estresses. Os genes duplicados da subfamília SNAC-A em soja exibiram padrão e cinética de indução por polietilenoglicol (PEG) e Tunicamicina (TUN) similares; porém, os pares apresentaram diferenças sutis de indução por AS, indicando que devem possuir funções parcialmente sobrepostas, mas não absolutamente idênticas. A fim de verificar a hipótese difundida de ser ATAF1 o ortólogo de GmNAC30 foram realizados ensaios de interação de ATAF1 com ANAC036 (ortólogo de GmNAC081) pelo sistema de duplo-híbrido de leveduras e análises de expressão gênica de ATAF1 em resposta a estresses osmótico e no retículo endoplasmático (RE). Os resultados obtidos, no entanto, indicaram não ser ATAF1 o ortólogo de GmNAC30, uma vez que não interagiu com ANAC036 pelo sistema de duplo- híbrido, e ao contrário de GmNAC030, não foi induzido por tunicamicina (TUN), embora, assim como GmNAC030, ATAF1 tenha exibido atividade transcricional pelo sistema de mono-híbrido de leveduras. Uma possível interação do gene ATAF1 com a via de morte celular induzida por estresses no RE e osmótico foi avaliada por genética reversa no mutante ataf1-2 que exibiu 75% de redução na expressão de ATAF1. Tanto a expressão basal quanto a expressão induzida por PEG e TUN dos genes NRP-1 e ANAC036, componentes da via de morte celular, foi superior no mutante ataf1-2 do que em Col-0, implicando ATAF1 como possível regulador negativo da via de morte celular mediada por NRPs. Sendo ATAF2 um outro membro do subgrupo SNAC-A que está filogeneticamente muito próximo a GmNAC30, foi avaliada a sua resposta a tratamentos com PEG e tunicamicina em plântulas das linhagens Col-0 e ataf1-2. Foi observada a indução de ATAF2 em resposta a ambos os estresses, sendo que a indução é aumentada no mutante ataf1-2, consistente com o perfil de expressão gênica de integrantes da via de morte celular mediada por NRPs. Coletivamente, estes resultados substanciam o argumento de que ATAF2 possa ser ortólogo de GmNAC030. No entanto, experimentos complementares são necessários para a confirmação dessa hipótese.
A superexpressão de GmbZIPE2 em protoplastos de soja sugere um papel regulador da expressão de genes da fotossíntese e da via de biossíntese de fenilpropanóides
(Universidade Federal de Viçosa, 2018-11-30) Gonçalves, Amanda Bonoto; Fietto, Luciano Gomes; http://lattes.cnpq.br/9080276580537208
A modulação da transcrição gênica é fundamental para a formação de uma resposta de defesa eficaz em plantas sob estresses. Os mecanismos de modulação são regulados principalmente por fatores de transcrição. A família de fatores de transcrição com domínio básico de zíper de leucina (bZIP) é relacionada com vários processos na planta, dentre eles a fotossíntese e estresse abiótico e biótico, e são divididos em 12 grupos em soja. GmbZIPE2 (Glyma05g168100) é um membro do grupo E da família bZIP de Glycine max, e membros desse grupo ainda não foram caracterizados nesta espécie. O gene GmbZIPE2 de soja tem sua expressão alterada em resposta à infecção fúngica e ao tratamento com fitormônios de defesa. A proteína GmbZIPE2 é capaz de se ligar ao cis- elemento H-box in vitro e ativar a transcrição da chalcona sintase CHS8, importante enzima da via de biossíntese de fenilpropanoides. Além disso, GmbZIPE2 interage com duas proteínas relacionadas à fotossíntese e estresse oxidativo. Neste estudo foi realizado o transcriptoma de protoplastos de folhas de soja superexpressando GmbZIPE2 a fim de se obter mais informações sobre a função desse fator de transcrição. A maior porcentagem de genes ativados pela superexpressão de GmbZIPE2 estão relacionados com fotossíntese. Um número expressivo de genes ativados são fatores de transcrição, dentre eles dois WRKY33, gene que é relacionado a indução da produção de fitoalexinas na defesa contra patógenos. Nossos resultados sugerem que GmbZIPE2 possui um papel regulador na via de biossíntese de fitoalexinas e na fotossíntese, mais especificamente, no controle de estresse oxidativo.
Activation of the NIK1/RPL10/LIMYB signaling circuit by biotic and abiotic signals and regulation of defense and growth parameters
(Universidade Federal de Viçosa, 2022-01-28) Teixeira, Ruan Maloni; Fontes, Elizabeth Pacheco Batista; http://lattes.cnpq.br/6336658294674908
Adsorção e reciclagem de enzimas de Chrysoporthe cubensis durante a sacarificação do bagaço de cana-de-açúcar com diferentes conteúdos de lignina
(Universidade Federal de Viçosa, 2017-07-21) Martins, Marcele Pandeló; Guimarães, Valéria Monteze; http://lattes.cnpq.br/1625330417362744
A eficiência da hidrólise da biomassa lignocelulósica apresenta algumas limitações, dentre elas a possível adsorção inespecífica das enzimas à lignina. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o perfil de adsorção de proteínas e enzimas do fungo fitopatogênico Chrysoporthe cubensis em bagaços de cana-de-açúcar pré-tratados e com diferentes conteúdos de lignina e avaliar a eficiência da recuperação destas enzimas e proteínas utilizando metodologias de reciclagem enzimática. De modo a obter o extrato enzimático, o fungo foi cultivado sob fermentação em estado semi-sólido com farelo de trigo. Os bagaços de cana foram pré-tratados com NaOH (BAL) e com H 2 SO 4 (BAC), de modo a conter 8,1% e 33,8% de lignina, respectivamente. A isoterma de Langmuir obtida pelo experimento em condições não hidrolíticas, revelou os parâmetros Pmax e Kp superiores para BAC, e K superior para BAL. Ao final da hidrólise, BAC foi capaz de adsorver maiores quantidades de proteínas, comparado ao substrato BAL. As enzimas celobiohidrolase e xilanase sofreram maiores adsorções em BAC, e de modo contrário, a endoglucanase adsorveu majoritariamente em BAL. A β-glicosidase foi a enzima que menos adsorveu em ambos os substratos. Esses resultados demonstraram o efeito da lignina presente em biomassas complexas ao promover uma maior adsorção de proteínas e de algumas enzimas do extrato enzimático de C. cubensis. Dentre os experimentos de reciclagem enzimática, todos demonstraram ser eficientes na recuperação de proteínas e enzimas adsorvidas na biomassa. A reciclagem com adição de substratos e enzimas frescas foi capaz de promover a maior eficiência de hidrólise da biomassa. Entretanto, para BAC, com elevado conteúdo de lignina, as reciclagens de enzimas e proteínas não demonstraram ser tão eficazes, bem como a hidrólise de açúcares. Desse modo, conclui-se que a lignina presente em altas concentrações nos substratos, além de promover maiores adsorções de proteínas e enzimas, também interfere nos métodos de reciclagem. Também foi comprovada a alta eficiência de reciclagem das enzimas de C. cubensis, mesmo no substrato contendo alta concentração de lignina, além da alta termoestabilidade dessas enzimas, mesmo após 216 h de hidrólise. Desse modo, é confirmado o grande potencial hidrolítico do extrato enzimático obtido desse fungo.
Advancing the diagnosis of canine visceral leishmaniasis: application of rLiNTPDase2 in immunochromatographic test and validation by ELISA of its derivatives obtained by linear epitope mapping
(Universidade Federal de Viçosa, 2024-07-10) Castro, Raissa Barbosa de; Fietto, Juliana Lopes Rangel; http://lattes.cnpq.br/3343955383987291
Análise da expressão gênica e perfil metabólico de carrapatos Amblyomma sculptum infectados com Rickettsia amblyommatis
(Universidade Federal de Viçosa, 2021-05-25) Araujo, Fernanda Sales de; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/0488404328765810
Os carrapatos são artrópodes parasitas hematófagos, pertencentes à ordem Acari e distribuídos em três famílias: Ixodidae, Argasidae e Nuttalliellidae. Espécie comumente encontrada do sul dos Estados Unidos ao norte da Argentina, o Amblyomma sculptum pertence à família Ixodidae. O gênero Rickettsia pode permanecer no intestino, ovário, hemocele e glândulas salivares, dentre os patógenos que infectam carrapatos, pulgas e piolhos. Os carrapatos são capazes de manter estas bactérias por várias gerações, as quais possuem um sistema metabólico limitado, dependendo de intermediários adquiridos por quando da hematofagia e suas reações metabólicas. Para análise do peso, número de cópias de bactéria, e expressão de enzimas-chave do metabolismo utilizando a reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa, carrapatos fêmeas A. sculptum foram alimentados com sangue, sangue adicionado de células VERO, e sangue adicionado de células VERO infectadas com Rickettsia amblyommatis, durante 12, 24, e 48 horas. Outro grupo foi alimentado com os mesmos tratamentos por 48 horas para análise do perfil metabólico utilizando a cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas e os aplicativos TargetSearch e Metaboanalyst. Verificamos no intestino médio dos carrapatos infectados que o número de cópias da bactéria apresentou um aumento significativo de 24 para 48 horas. Nos tratamentos não infectados, a diferença de peso após a alimentação revelou um aumento de massa. Na presença de riquétsia, verificou-se diminuição ou não aumento do peso. Na análise da expressão relativa, enzimas escolhidas da via glicolítica, ciclo do ácido tricarboxílico, fosforilação oxidativa, beta-oxidação, transporte de ácidos graxos e dos metabolismos de aminoácidos e nucleotídeo foram alteradas quando da presença da bactéria nos diferentes tempos de alimentação. Diversos compostos identificados na análise do perfil metabólico estavam envolvidos no metabolismo de aminoácidos, purina, pirimidina, carboidratos, ciclo do ácido tricarboxílico, lipídeos, ácidos graxos, nicotinato, nicotinamida e pentose fosfato. Com a elucidação do nível de expressão das enzimas-alvo e a abundância dos metabólitos identificados, demonstramos com mais detalhes que diversas vias são alteradas e direcionadas para o favorecimento de componentes essenciais para a sobrevivência e manutenção da riquétsia no intestino médio dos carrapatos ou resposta protetiva contra o patógeno. Estudos posteriores permitirão avançar nestes conhecimentos, potencialmente contribuindo para uma melhor compreensão da relação parasito- hospedeiro, selecionando novos alvos para o controle destes agentes e na bioprospecção de novas moléculas. Palavras-chave: Amblyomma sculptum. Rickettsia amblyommatis. Metabolismo.
Análise de componentes moleculares da espuma e da toxina presente na glândula salivar de cigarrinha das pastagens
(Universidade Federal de Viçosa, 2021-07-28) Rinaldi, Angelo José; Oliveira, Maria Goreti de Almeida; http://lattes.cnpq.br/5114826041947329
Mahanarva spectabilis conhecida como cigarrinha-das-pastagens é o principal inseto-praga que causa severos danos as forrageiras tropicais, comprometendo a produção bovina e também a cadeia leiteira. Os adultos das cigarrinhas atacam a planta causando danos foliares como a clorose. As ninfas, por sua vez, criaram um mecanismo de proteção eficaz contra perda de umidade, contra variações de temperaturas e contra ação de inimigos naturais que é a produção de uma espuma que o encobre. Como estes mecanismos podem ser importantes para o controle do inseto-praga, foram analisados alguns dos constituintes das glândulas salivares como agentes citotóxicos, além da constituição proteica da espuma. Análises por SDS-PAGE LC/MS identificaram a região codificadora de uma proteína de 66 kDa apresentando alta abundância relativa na espuma. A presença deste gene de origem genômica foi confirmada por PCR, e como sendo de função desconhecida pela ausência de homólogos descritos. Um metabólito presente em alta abundância na glândula salivar foi identificado com alta similaridade com a toxina de origem fúngica Citocalasina B, podendo estar envolvido na produção do sintoma de clorose nas folhas. Portanto, as caracterizações funcionais dos componentes moleculares identificados poderão ser alvo para o desenvolvimento de mecanismo de controle na interação do inseto- praga. Palavras-chave: Cigarrinha-das-pastagens. Glândula salivar. Proteômica. Interação planta- praga. Espuma. Citocalasina B.
Análise de extratos fúngicos relacionados ao controle biológico de fitonematoides e à promoção de crescimento vegetal
(Universidade Federal de Viçosa, 2018-02-23) Gouveia, Angélica de Souza; Queiroz, José Humberto de; http://lattes.cnpq.br/9934730476930921
O uso de fungos nematófagos tem sido mais investigado nos últimos anos por ser uma alternativa ecológica e eficiente no manejo integrado de nematoides. O potencial nematófago do Monacrosporium thaumasium foi verificado por meio da produção de compostos extracelulares com atividade nematicida. O extrato bruto obtido da fermentação sólida utilizando-se farelo de trigo foi fracionado e uma fração com atividade nematicida foi identificada. Os mesmos procedimentos foram efetuados para o tratamento testemunha, que não possuía o inóculo fúngico e obtiveram-se duas frações com atividade nematicida. Essas frações foram analisadas via espectrometria de massas e foi constatada similaridade entre o perfil das massas. Desse modo, não foi possível identificar compostos específicos da fração referente ao extrato fúngico e, provavelmente, o efeito nematicida é oriundo dos compostos do farelo de trigo. Também foram avaliados alguns compostos extracelulares produzidos por diferentes isolados do fungo Pochonia chlamydosporia (PC). Essa espécie é descrita por sua ação no controle biológico de fitonematoides e por promover o crescimento vegetativo. A produção de proteases foi verificada nos diferentes isolados e para o isolado PC-40 foi identificada a produção da protease subtilisina-like. A promoção de crescimento pode ser resultado de maior disponibilização de fosfato para a planta. Desse modo, a solubilização de fosfato por diferentes isolados de P. chlamydosporia foi avaliada em meio líquido e sólido confirmando-se a capacidade de solubilização por esses. Os isolados também foram aptos à produção de fosfatases extracelulares que podem auxiliar na liberação de fosfato de fontes orgânicas. Outro composto que pode contribuir para o desenvolvimento de plantas é o fitohormônio auxina, secretado pelos isolados PC-10 e PC-46 e detectado via LC/MS-MS. Através dos resultados, pode-se constatar que não são todos os isolados capazes de produzir auxina, bem como a existência de uma forte plasticidade na produção de diferentes compostos. Isso indica que é muito importante um screening inicial de isolados a fim de selecionar o ideal agente de controle biológico e/ou promotor de crescimento vegetal.
Análise dos mecanismos de splicing alternativo em resposta ao déficit hídrico em soja (Glycine max)
(Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-29) Santos, Eulalio Gutemberg Dias dos; Ramos, Humberto Josué de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/2633964026181142
A soja [Glycine max (L.) Merr.] hoje em dia é uma das culturas de maior importância para o agronegócio mundial. O Brasil se posiciona como o segundo maior produtor mundial desta cultura, com mais de 30% da produção, atrás apenas dos Estados Unidos. Porém, nos últimos anos, a soja vem sofrendo grandes perdas em função das adversidades climáticas, apresentando enorme sensibilidade a alterações de frio, calor, chuvas e principalmente escassez hídrica, responsável pelas maiores perdas, impedindo uma maior produtividade e expansão agrícola para outras regiões. A solução para essas perdas seria o desenvolvimento de técnicas mais eficazes de plantio e produção, bem como o desenvolvimento de variedades genotípicas mais tolerantes à escassez hídrica. Dessa forma, nosso principal objetivo é a busca pela melhor elucidação de mecanismos e vias relacionadas ao estresse hídrico por predição em bioinformática analisando o transcriptoma após estresse. Portanto, estudos transcriptômicos oferecem uma visão dos mecanismos de resposta ao estresse das plantas. Aqui, apresentamos os resultados do perfil global de expressão gênica de folhas de dois cultivares de soja, BR16 e EMBRAPA48, com capacidade contrastante para lidar com o déficit hídrico, utilizando metodologia de sequenciamento de RNA. Para as análises iniciais do transcriptoma, a qualidade das sequências foi avaliada com o programa FastQC. Posteriormente, nós realizamos o alinhamento contra o genoma de referência da soja usando o alinhador Bowtie/TopHat, em seguida avaliado o perfil de expressão gênica pelo pacote Cufflinks/Cuffdiff, que mostraram uma gama de genes que foram alterados em função do estresse, com uma perturbação mais branda para a variedade mais tolerante EMBRAPA48. Nossa análise sugere que a tolerância à seca resulta de um certo nível de transcrição de genes que predispõem a planta mesmo antes do início da seca. No splicing alternativo diferentes éxons e íntrons de um mesmo pré- RNA mensageiro podem ser excluídos ou retidos para produzir diferentes RNAs maduros, expandindo o repertório do transcriptoma. Análises de expressão diferencial em nível de transcritos podem detectar alterações na expressão de isoformas do transcrito, a partir de um mesmo gene. Portanto, no presente estudo, nós avaliamos a ocorrência de ivsplicing alternativo diferencial. Inicialmente realizamos o alinhamento contra o genoma de referência de Soja usando o alinhador splice-aware STAR. Após o alinhamento, o programa rMATS foi usado para detectar os principais tipos de splicing alternativo. Em nossos resultados mostramos que o Alternativo 3’ e Skipped exon foram os eventos de maior ocorrência para ambas variedades. Nossos dados sugerem que eventos de splicing alternativo são diferencialmente regulados em consequência da submissão ao estresse hídrico e revelam um mecanismo potencial na regulação da expressão de genes com importantes funções na tolerância ao estresse. Diante das análises de Ontologia revelou que os genes DAS estavam envolvidos principalmente em processos biológicos, incluindo resposta celular ao estresse como a biossíntese de polissacarídeos de membrana (dentre as quais se encontram a biossíntese de glicanos, betaglicanos e UDP-raminose), reparo da região 3’ de DNA, transporte de auxina, regulação do desenvolvimento floral e resposta ao estímulo abiótico como manutenção do potencial hídrico das folhas. Dessa forma a avaliação da expressão de genes e do splicing alternativo do transcriptoma de soja para as variedades contrastantes nos fornecem entendimento de como ocorre a regulação da expressão diferencial bem como a descrição de mecanismos e vias para tolerância ao estresse hídrico.
Análise funcional das proteínas salivares de Amblyomma sculptum: mecanismos anti-hemostáticos e implicações na inibição de coagulação e agregação plaquetária
(Universidade Federal de Viçosa, 2023-11-14) Silva, Maria José de Jesus; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/1623841808530496
Os carrapatos são artrópodes parasitas hematófagos, pertencentes à ordem Acari e distribuídos em três famílias: Ixodidae, Argasidae e Nuttalliellidae. São conhecidos pela sua capacidade de parasitar diversos hospedeiros vertebrados, tais como: bovinos, equinos, cães, capivaras, aves e o homem. A espécie A. sculptum é encontrada no centro-oeste (Goiás, Mato Grosso e Mato Grosso do Sul), Nordeste (Pernambuco e Piauí) e sul do estado do Paraná. Também é encontrado em outros países como Bolívia, Paraguai e Argentina. Ele está altamente associado ao clima tropical e ao bioma do Cerrado. Visto o seu grande potencial vetorial de agentes infecciosos, como por exemplo, a bactéria Rickettsia rickettsii (causadora da Febre Maculosa Brasileira), este carrapato é considerado de grande importância nas áreas da saúde e médico-veterinária. A hematofagia, é a fase mais arriscada para o carrapato. Ele precisa do hospedeiro vertebrado para crescer e se multiplicar. Nesta etapa, o parasita fica vulnerável e se for percebido, o hospedeiro reagirá e mecanicamente irá matar o parasita. Daí a importância do arsenal molecular da saliva e da glândula salivar deste ácaro. Com suas características “de proteção ao carrapato” demonstra atividade vasodilatadora, anticoagulante, anti-inflamatória e imunossupressora. Exatamente moléculas que impedem a reparação de um tecido lesionado e “engana” o hospedeiro evitando o processo de cicatrização. Assim, nosso objetivo foi identificar moléculas neste carrapato envolvidas na anti-hemostasia. Neste trabalho, identificamos proteínas na saliva e na glândula salivar da espécie Amblyomma sculptum após o sequenciamento realizado pelo nosso grupo de pesquisa. As proteínas e suas famílias encontradas são: IRS-2, AamS6, IxscS-1E1, RmS-15 e AAS19, todas da família das serpinas que apresentaram maior quantidade de genes no alinhamento. Proteínas da família Kunitz também foram encontradas: Boophilin, Ir-CPI, Haemangin, Ixolaris e Amblyomin-X. A proteína sialostatin L da família das Cistatinas. A proteína MIF homolog da família das MIF’s. A calreticulin da família das calreticulinas. O restante sem classificação de família: BmAp, IXOSP, TIX- 5, THRF, AamAV422. As funções foram: 57% delas atuam na coagulação sanguínea, AamS6, IxscS-1E1, RmS-15, AAS19, Boophilin, Ir-CPI, TIX-5, Ixolaris, BmAP, IXOSP, AamAV422, Calreticulin, Amblyomin-X. Atuando na agregação plaquetária são 22%: IRS-2, AamS6, IxscS-1E1, AAS19, Boophilin. Em Cicatrização/Angiogênese temos 9% com: Haemangin e IRS-2. A proteína da família MIF, age na resposta imune inata. A proteína Sialostatin L da família da cistatina atua na resposta imune adquirida. A proteína THRF age como vasodilatador. Mais estudos são necessários para a confirmação dessas funções. Palavras-chave: Amblyomma sculptum, Proteínas Salivares, Mecanismos Anti- Hemostáticos.
Análise proteômica comparativa da saliva de Rhodnius prolixus, Triatoma lecticularia e Panstrongylus herreri
(Universidade Federal de Viçosa, 2015-09-24) Montandon, Carlos Emmanuel; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/7022699709229549
Triatomíneos são artrópodes hematófagos transmissores do Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli. É sabido que o comportamento alimentar e a transmissão de patógenos por estes vetores variam entre as diferentes espécies e são dependentes, direta ou indiretamente, de moléculas bioativas da saliva que auxiliam na interação vetor-parasito-hospedeiro. Neste sentido, caracterizamos e comparamos o repertório sialoproteômico de três importantes espécies dos principais gêneros de triatomíneos das Américas: Rhodnius prolixus, Triatoma lecticularia e Panstrongylus herreri, identificando 221 proteínas, sendo 69 de R. prolixus, 100 de T. lecticularia e 52 de P. herreri. Dentre os principais achados, encontramos a alta prevalência de nitroforinas em R. prolixus (68%) e de lipocalinas em T. lecticularia (79%) e P. herreri (49%). Neste contexto, as proteínas mais significativas por spot de R. prolixus, T. lecticularia e P. herreri mais abundantes, apresentando expressiva diferença entre as outras, foram Nitrophorin-4 (28,7%), Salivary lipocalin 5 (65,2%) e Putative triabin (20,5%), respectivamente. Outro achado significativo foi a única molécula presenta nas três espécies estudadas, a proteína não categorizada T1HT34, a qual atuaria como elo proteico entre elas, identificando-se como paráloga da Putative fry-like conserved. Os dados encontrados pela caracterização pelo Gene Ontology, vieram a corroborar achados anteriores, evidenciando-se todas as funções identificadas como beneficiadas pelo repasto sanguíneo dos triatomíneos.
Análise proteômica comparativa do intestino de Anticarsia gemmatalis em resposta a inibidores de proteases
(Universidade Federal de Viçosa, 2017-02-24) Coura, Roberta Ribeiro; Oliveira, Maria Goreti de Almeida; http://lattes.cnpq.br/0182455179210454
A lagarta-da-soja, Anticarsia gemmatalis, é considerada uma das principais pragas da cultura da soja. Os danos causados pelo ataque deste inseto associado à relevância econômica do cultivo da soja para o Brasil e para o mundo fomentam a busca por alternativas no controle deste inseto. Estratégias de controle de insetos-pragas baseadas no uso de inibidores de proteases têm sido estudadas, o conhecimento das enzimas digestivas e metabolismo do inseto tem se mostrado fundamental. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo identificar proteínas com abundância diferencial no intestino de A. gemmatalis em resposta a inibidor de protease, visando obter dados que poderão contribuir para esclarecer o mecanismo adaptativo de A. gemmatalis em resposta a inibidores de proteases na interação planta-inseto. Foram dissecados intestinos de lagartas alimentadas com os inibidores de proteases berenil e o Kunitz, nas horas 6 h, 12 h, 24 h e 48 h e as proteínas extraídas por maceração. Os spots com abundância diferencial foram digeridos e os peptídeos analisados no espectrômetro de massa MALDI/TOF-TOF. Os espectros (MS/MS) foram pesquisados em bancos de dados usando a ferramenta MASCOT e as proteínas identificadas foram validadas usando o software Scaffold. Foram 44 spots de proteínas identificados, nos tratamentos com os inibidores berenil e Kunitz, nas diferentes horas, que correspondeu a 33 proteínas distintas. As proteínas identificadas pertenciam a diferentes categorias funcionais envolvidas no metabolismo energético, do carbono, de aminoácido, de carboidratos, de lipídeos, no estresse oxidativo e no turnover proteico e chaperonas moleculares. Algumas isoformas da proteína ATPase apresentaram menor abundância em relação ao controle, em ambos tratamentos. Enquanto a maioria das proteínas de choque térmico 70 apresentaram maior abundância que o controle. As proteínas piruvato desidrogenase, fosfoglicerato mutase e a ATP sintase aumentaram abundância e as proteínas aldeído desidrogenase e carbonil redutase diminuíram abundância no tratamento com berenil. No tratamento com Kunitz as proteínas arginina quinase e a choque térmico Hsp 90 aumentaram a abundância enquanto as proteínas enoil-CoA hidratase, ATP sintase e a aspartato aminotransferase diminuíram a abundância. A presença dos inibidores berenil e Kunitz na lagarta A. gemmatalis alterou o perfil de proteínas no intestino em ambos tratamentos.
Análise proteômica de cristalino de Felis catus
(Universidade Federal de Viçosa, 2018-06-27) Silva, Maria José de Jesus; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/1623841808530496
O Cristalino, ou lente, é uma peça chave para o olho de qualquer ser vivo. A lente foca a luz na retina, a qual é conduzida ao nervo ótico e enviado para o cérebro, resultando em função visual. Isso só é possível graças às proteínas que o constitui, fornecendo a transparência e o índice de refração adequados para a passagem da luz. Qualquer alteração pode causar agregação ou o enovela- mento incorreto destas proteínas e gerar deficiências, como a catarata, levando à cegueira. Este trabalho permitiu, pela primeira vez, a identificação e caracteri- zação de proteínas presentes nos cristalinos de gatos, por meio de abordagens proteômicas. Estas proteínas foram analisadas por duas estratégias: o Short Run, seguido da cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas com analisador Orbitrap (LC MS/MS), e a eletroforese bidimensional, seguida da espectrometria de massas do tipo MALDI TOF/TOF. Com o auxílio do software PEAKS, analisou-se as informações geradas pelo LC MS/MS e identificou-se 99 proteínas, das quais, 14 foram caracterizadas como as cristalinas, represen- tando 97% do total de proteínas identificadas, contra 3% do restante. O grupo beta cristalinas foi o mais representativo (52% das cristalinas), no entanto, a pro- teína alpha crystallin A chain apresentou maior abundância relativa em compa- ração com todas as demais proteínas individuais. Para a segunda estratégia, utilizou-se o software MASCOT, validado pelo SCAFFOLD, e identificou-se em diversos spots do gel SDS-PAGE 2DE, diferenças no ponto isoelétrico e na massa, indicando possíveis isoformas da alpha crystallin A chain. Analisando os dados gerados a partir do software PEAKS e pelo banco de dados do KOG, clas- sificou-se as proteínas de acordo com suas funções. Destacaram-se aquelas envolvidas no metabolismo e transporte de carboidratos, modificações pós-tra- ducional, turnover proteico, chaperonas, conversão e produção de energia, e proteínas de função geral. As duas estratégias empregadas se complementa- ram, possibilitando a obtenção do perfil proteômico do cristalino de gatos, o qual pode contribuir para um melhor entendimento das abundâncias e funções des- sas proteínas, fornecendo uma base para estudos futuros, no intuito de melhor compreender os aspectos sobre a baixa susceptibilidade do cristalino desta es- pécie animal à catarata.
Análise proteômica de glândulas salivares do carrapato Amblyomma sculptum
(Universidade Federal de Viçosa, 2016-06-23) Barros, Edvaldo; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/9351943615435543
Os carrapatos são artrópodes hematófagos obrigatórios de grande importância médica e veterinária. Estes artrópodes tem desenvolvido adaptações evolutivas que permitem aos mesmos a sobrevivência por longos períodos de tempo sem se alimentarem ou que, após se alimentarem até a ingurgitação, vivam com a presença de altos níveis de substâncias que estimulam o estresse oxidativo. Além disso, apresentam uma anatomia bem conciliada ao seu modo de vida e aquisição de alimentos. Dentre os principais órgãos do carrapato, as glândulas salivares apresentam grande repertório de proteínas, que desempenham papéis essenciais para o seu desenvolvimento e para a manutenção de sua relação com os hospedeiros vertebrados. Essas proteínas também podem facilitar a transmissão de agentes patogênicos aos hospedeiros. Nesse projeto, o sialome do carrapato Amblyomma sculptum foi analisado utilizando cromatografia líquida acoplada com a espectrometria de massas. Essa abordagem combinada permitiu a identificação de 501 proteínas, das quais, aproximadamente, 15% foram classificadas como proteínas secretadas putativas. As classes do grupo de proteínas secretadas putativas que mais se destacaram foram: a) família das proteínas ricas em glicina; b) família das enzimas secretadas e c) ferritinas. As proteínas ricas em glicina podem desenvolver várias funções, dentre elas, a formação do cone de cemento e a resposta a estresse. Proteínas vinculadas com o citoesqueleto, com a maquinaria de modificação proteica e com o transporte intracelular também foram identificadas, as quais foram reunidas no grupo “putative housekeeping proteins”. A diferença na abundância das proteínas entre os gêneros macho e fêmea, encontradas nas glândulas salivares dos carrapatos A. sculptum, foi indicada pela identificação de proteínas em apenas um dos sexos. As proteínas ricas em glicina, do citoesqueleto e chaperonas foram identificadas em maior número em machos do que em fêmeas, sugerindo que esse gênero esteja melhor preparado para a produção de cemento, resposta ao estresse, modificação proteica e transporte intracelular do que as fêmeas. A caracterização funcional das proteínas permitiu uma correlação dentro de um contexto biológico e facilitou um melhor entendimento sobre o sialome de carrapatos A. sculptum. Essa informação pode auxiliar na identificação de novos candidatos a alvos para o controle de carrapatos, no entanto, estudos adicionais devem ser realizados com o objetivo de melhorar o conhecimento das vias de controle das diferentes funções celulares.
Análise proteômica do intestino de carrapatos Amblyomma sculptum machos e fêmeas não alimentados
(Universidade Federal de Viçosa, 2017-02-10) Araújo, Fernanda Sales; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/0488404328765810
Os carrapatos são artrópodes parasitas que se alimentam obrigatoriamente de sangue, sendo capazes de parasitar diversos hospedeiros vertebrados. O intestino dos carrapatos machos e fêmeas possui diferenças morfológicas, tendo como principal função a digestão intracelular dos componentes do sangue obtidos durante a alimentação. Este órgão possui várias proteínas relacionadas com o desenvolvimento, metabolismo e mecanismo de digestão da hemoglobina. Neste trabalho, as proteínas do intestino de carrapatos Amblyomma sculptum, machos e fêmeas foram analisadas com o auxílio da cromatografia líquida acoplada com a espectrometria de massas. O algoritmo PEAKS identificou um maior número de proteínas do intestino nas estratégias fracionadas e não fracionadas em relação aos algoritmos MASCOT e SCAFFOLD, tanto para o banco de dados Chelicerata quanto para o banco de dados Oryctolagus, utilizando os analisadores Ion Trap e QTOF. Pelo KOG, as classes das proteínas analisadas no intestino dos carrapatos machos e fêmeas que se destacaram estão envolvidas na dinâmica e estrutura da cromatina, tradução, biogênese e estrutura ribossomal, modificação pós-traducional, turnover proteico, chaperonas, citoesqueleto, conversão e produção de energia, metabolismo e transporte de carboidratos, lipídeos e íons inorgânicos. Na identificação das proteínas do hospedeiro, a hemoglobina, componente de maior volume no sangue, foi encontrada em ambos os sexos. As informações obtidas neste trabalho podem fornecer uma base sobre a fisiologia do intestino de machos e fêmeas A. sculptum e auxiliar na escolha de proteínas como alvos moleculares potenciais, visando avanço nas estratégias de controle aplicadas para estes artrópodes.
Análise proteômica e metabolômica de soja: aspectos moleculares da tolerância a seca em plantas transgênicas expressando BiP
(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-04) Coutinho, Flaviane Silva; Ramos, Humberto Josué de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/5823859828589031
Dentre os fatores ambientais, a seca é uma das principais causas na limitação da produção agrícola. Alguns fatores, como indicadores de expansão da área de plantio e alterações climáticas, evidenciam a necessidade de desenvolvimento de genótipos mais tolerantes. Nosso grupo de pesquisa na Universidade Federal de Viçosa (UFV) tem observado que a chaperona molecular BiP atua em respostas a estresses no retículo endoplasmático (ER) e osmótico, conferindo uma maior tolerância à seca. Neste trabalho, foram caracterizados os perfis proteômicos e metabólicos de plantas transgênicas de soja superexpressando a chaperona molecular BiP e de sua isolinha por eletroforese 2DE-MS e GC/MS, respectivamente. E análise de hormônios utilizando LC-MS. Plantas transgênicas apresentaram uma maior abundância relativa de proteínas relacionadas à fotossíntese, o que sustenta a hipótese que estas plantas estão predispostas geneticamente e fisiologicamente a suportar períodos de seca. Ao contrário do genótipo selvagem, plantas transgênicas não apresentaram mudanças significativas em proteínas relacionadas à glicólise, respiração e estresse oxidativo, o que evidencia uma menor percepção do estresse pelo genótipo geneticamente modificado. O acúmulo intracelular de solutos osmoticamente ativos pode ser um importante mecanismo de ajuste adotado pelas plantas transgênicas. Como evidenciado pelos perfis metabólicos, o acúmulo de aminoácidos pode ser o mecanismo responsável pela manutenção da turgescência celular no genótipo transgênico. Este mecanismo protetor pode possibilitar que a fotossíntese e outras atividades fisiológicas sejam mais operantes em condições de seca. Em condições de déficit hídrico, o ácido salicílico parece ter considerável importância em induzir efeitos de proteção na planta transgênica, podendo ter uma possível ação antagonista ao ácido jasmônico.
Análises bioquímica, microbiológica e proteômica de pacientes com sepse
(Universidade Federal de Viçosa, 2021-05-27) Leal, Dalila Teixeira; Oliveira, Maria Goreti de Almeida; http://lattes.cnpq.br/9063675498055119
A Sepse é caracterizada, de acordo com o The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock, como a disfunção orgânica com risco de vida, causada por resposta desregulada à infecção. Na presente investigação, realizou-se estudo retrospectivo observacional com objetivo de analisar os parâmetros bioquímicos, microbiológicos e proteômicos de pacientes com Sepse internados em uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI) de hospital da Zona da Mata de Minas Gerais, Brasil. Essa tese apresenta a seguinte estrutura: Introdução, apresentando revisão dos principais conceitos relativos à Sepse; três Capítulos correspondentes a três artigos; Discussão e Conclusão Geral; mais as Referências. O primeiro Capítulo descreveu os principais microrganismos encontrados nas amostras clínicas dos pacientes internados com Sepse e a resistência antimicrobiana apresentada por esses patógenos. Demonstrou-se que os dispositivos invasivos mais utilizados pelos pacientes com Sepse (n=19) foram o cateter venoso central, o ventilador mecânico e o cateter urinário. As axilas e a secreção traqueal foram os locais mais colonizados. Os microrganismos isolados, relacionados com a colonização, foram a Psudomonas aeruginosa, Enterobacter spp. e Acinetobacter spp. Em relação a infecção, o trato urinário foi o mais acometido e o principal microrganismo relacionado a esta infecção foi a Pseudomonas aeruginosa. Nas culturas investigadas, relacionadas tanto com a colonização, quanto infecção, Ciprofloxacino foi o antimicrobiano ao qual as bactérias apresentaram maior resistência. O segundo Capítulo teve por escopo a análise dos parâmetros bioquímicos e as relações entre neutrófilo/linfócitos (RNL), plaquetas/linfócitos (RPL) e linfócitos/monócitos (RLM) de pacientes com Sepse, internados na UTI (n=7). As principais fontes de infecção foram o sistema respiratório e o abdômen. O microrganismo mais frequente, isolado nas culturas, foi a Escherichia coli. Os valores de creatinina, ureia e FiO 2 apresentaram-se elevados desde o início da internação para os enfermos com Sepse que evoluíram para o óbito. Nos pacientes que faleceram, a Relação Neutrófilo/Linfócito (RNL) aumentou ao longo do tempo, ao contrário dos doentes que sobreviveram, os quais apresentaram queda nesses valores ao longo do tempo. A RNL mostra-se como marcador prognóstico importante para Sepse. O terceiro capítulo orientou-se à descrição dos spots de proteínas, encontrados ao longo do tempo (T1xT2 e T2xT3), obtidos por análise de detecção e quantificação diferencial sobre os géis 2DE, com diferenças estatísticas nas comparações entre enfermos com Sepse (n=7) que receberam alta e aqueles que evoluíram para a óbito. A análise longitudinal mostrou que houve diferenças entre os dois grupos quanto ao tempo e desfecho da doença. Os pacientes que evoluíram para o óbito tiveram número maior de spots proteínas alteradas ao longo do tempo, principalmente entre os tempos T2 e T3. Novos estudos são necessários à caracterização microbiológica e bioquímica dos pacientes com Sepse, especialmente no que concerne a correlação entre esses dados, que provavelmente contribuirá à melhor compreensão desta importante condição mórbida. Palavras-chave: Prognóstico. Proteômica. Sepse. Spots de Proteína.
Análises in silico das proteínas de superfície e secretadas de Staphylococcus aureus para discriminar entre as mastites bovina clínica e subclínica
(Universidade Federal de Viçosa, 2018-02-26) Rocha, Lis Souza; Ribon, Andréa de Oliveira Barros; http://lattes.cnpq.br/6648940980655820
Staphylococcus aureus é uma das principais bactérias causadoras da mastite bovina, uma doença predominante nos rebanhos leiteiros. A mastite bovina pode se manifestar de forma clínica, onde os sinais de inflamação são observados, ou de forma subclínica, sem sintomas aparentes, e que frequentemente evolui para a cronicidade. Os genomas de quatro isolados de S. aureus causadores de mastite bovina subclínica (170, 302, 1269, 1364) foram sequenciados por nosso grupo e foram contrastados com os genomas de duas cepas isoladas de mastite clínica (S. aureus RF122 e S. aureus N305) para identificar diferenças que pudessem ser ligadas à mastite subclínica. Não foi possível associar a presença de fatores de virulência ao tipo de manifestação. Mais genes relacionados à produção de enterotoxinas foram encontrados no genoma de S. aureus RF122. Os genes que codificam a toxina 1 da síndrome do choque tóxico (tsst-1), a variante bovina da enterotoxina C (secbov), a enterotoxina t e dois homólogos da streptolisina S de Streptococcus pyogenes foram exclusivos da cepa RF122. A presença de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) nos genomas subclínicos foi averiguada comparando 33 genes que codificam fatores de virulência com seus ortólogos em S. aureus RF122. SNPs não sinônimos foram encontrados nos genes clfa (fator de aglutinação A), srta (sortase A) e sspa (protease). Uma proteína transportadora (cl3316) foi identificada in silico como exclusiva das cepas subclínicas. Diferentes programas de predição foram utilizados para a identificação das proteínas de superfície e secretadas das seis cepas, as quais foram usadas na construção de um plot de escala multidimensional (MDS). Os resultados mostraram alta similaridade entre as proteínas das cepas estudadas. Pela inspeção visual, identificaram-se dois grupos de ortólogos, cl3309 e cl3700, correspondentes a uma proteína hipotética e a uma lipoproteína, respectivamente, que possuem regiões de maior similaridade entre as clínicas ou subclínicas. Os dados encontrados in silico foram validados pela reação em cadeia da polimerase em isolados bacterianos coletados em fazendas leiteiras. Todos os isolados subclínicos foram corretamente identificados com os primers desenhados para as cepas subclínicas, porém existe a necessidade de redesenhar novos primers para a correta discriminação dos isolados clínicos.
Anotação e montagem de transcriptomas de intestino médio e ovários do carrapato Amblyomma sculptum, antes e após a infecção por Rickettsia amblyommii
(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-29) Moreira, Higo Nasser Sant’anna; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/3049631592691033
O objetivo deste trabalho foi construir um catálogo de genes para o genoma funcional dos órgãos internos do carrapato A. sculptum, bem como, avaliar os padrões de expressão gênica no intestino médio (MDG) e ovários (OVA) frente à condições de não-infecção (MNI e ONI) e infecção por Rickettsia amblyommii (MI e OI). Como primeiro passo, foi realizada a construção de um transcriptome de referência à partir da montagem de 9 transcriptomas (200 milhões de reads) derivados do intestino médio (3), dos ovários (2) e das glândulas salivares (4). O De novo assembly gerou um total de 460,445 contigs, a partir dos quais foram preditas 27.308 CDS expressas em no transcriptome total do A. sculptum. O mapeamento das reads derivadas de cada órgão contra o transcriptoma de referencia permitiu a identificação de 25,569 CDS expressas nos intestinos (MDG), 21,230 CDS expressas em ovários (OVA), enquanto que 10.697 CDS foram derivados dos transcriptomas de glândula salivar (SG). A anotação do transcriptoma de referência (27.308 CDS) permitiu a identificação de 23,228 CDS relacionados a processos housekeeping, enquanto que 2.177 CDS apresentaram sequência de peptídeos (SignalP) e foram anotadas como proteínas secretads.Um total de 261 CDS foram anotadas como elementos transponíveis, 20 CDS foram relacionadas à transcritos virais, enquanto que 1,622 permaneceram sem anotação, sendo anotadas com Unknown. Entre as 29 classes de genes housekeeping, destacam-se aqueles relacionados com Sinal de transdução (3.158 CDS), seguido de 1887 CDS anotadas com os transportadores e 1.523 CDS relacionados maquinaria de transcrição. A avaliação individualizada dos transcriptomas MDG e OVA no tocante a infecção e não infecção por R. amblyommii (infectados vs não infectado) revelou um padrão oposto entre os dois órgãos, com quase todos os processos celulares am MDG superexpressos em resposta à infecção por riquétsia, enquanto a maioria dos processos celular em ovário (OVA) foram down regulados em resposta à infecção por R. amblyommii. Essa down regulação de processes em ovários de carrapatos infectados por rickettsiae corrobora estudos in vitro com outras especíceis de carraátos infectados com Rickettsia spp. o que concorda com outros estudos in vivo com foco ovipostue de carrapatos infectados. com queda das funções fisiológicas da femeas ingurgitada e queda no rendimento da oviposição. Também foi observado up-regulação de proteínas no intestino, em resposta à infecção, sendo essas relacionadas com processes de infecção rickettsial em ́celulas de mamíferos bem como outros invertebrados, tais como actina, complexo Arp 2/3, domínio WASP, proteína tirosina quinase, clatrinas, intergrinas e ontre outras. Estes resultados sugerem que, de forma semelhante à verificada em células de mamíferos e em outras 17 espécies de carrapatos, estas proteínas estar envolvidas durante o processo de infecção do trato intestinal de A. sculptum. No entanto, a down regulação das principais vias metabólicas, maquinaria de replicação e de síntese proteica em ovários em resposta à infecção por Rickettsia (OI contra ONI) indica que esta batéria se constiui uma carga metabólica e fisiológica para os ovários. Alpem de sugerir possível alvos a sere avaliados na interação rickettsia-carrapato, estes resultados também dão suporte à outros estudos e estratégicas para uma melhor compreensão da biologia deste vetor, bem como para o desenvolvimento de estratégias de combate e controle biológico, como vacinas e acaricidas.