Avaliação da atividade antimelanoma in vitro e in vivo de um derivado de dibenzoilmetano de uso tópico

Abstract

O câncer, atualmente, é a segunda causa de morte por doenças no Brasil, e o câncer de pele do tipo melanoma é a principal causa de morte dentre as afecções da pele. Neste sentido, considerando-se o impacto social e relevância da doença, buscam-se novas opções de terapias que sejam mais eficazes contra esses agravos. Os dibenzoilmetanos constituem uma classe de compostos que vem sendo amplamente investigada, devido às suas já conhecidas propriedades fotoprotetoras, anti-inflamatórias e antitumorais. Assim, o presente estudo teve como objetivo a avaliação das propriedades antimelanoma de um derivado de dibenzoilmetano com finalidade de aplicação tópica. O composto 1,3-Difenil-2-benzil-1,3-propanodiona foi sintetizado a partir de 1,3-difenil-1,3-propanodiona (dibenzoilmetano). Os ensaios in vitro de citotoxicidade com MTT foram realizados com 3 x 10 3 células plaqueadas por poço em placas de 96 poços, e o composto nas concentrações 0,25 µg/mL, 2,5 µg/mL, 25 µg/mL e 250 µg/mL, com tratamento das células por 48h. O composto apresentou IC 50 de 53,05 µg/mL para as células da linhagem B16F10, derivadas de melanoma murino, e 225,5 µg/mL para as células da linhagem melan-A, derivadas de melanoblastos normais murino, com índice de seletividade de 4,25. Isto significa que o composto é 4,25 vezes mais seletivo para as células de melanoma do que para os melanócitos, o que indica potencial terapêutico para testes in vivo. O teste in vivo foi realizado com base em um modelo de melanoma murino, utilizando-se camundongos da linhagem C56Bl/6, com inoculação subcutânea de 1 x 10 5 células B16F10 na região cervical, e tratamento tópico no mesmo sítio onde foi induzido o tumor. O tratamento foi realizado utilizando-se um gel transdérmico, contendo o composto nas concentrações de 1 mg/mL e 3 mg/mL, e 2% de Aristoflex® como agente gelificante, 5% de propilenoglicol como umectante, 10% de dimetilsulfóxico (DMSO) como promotor de absorção e álcool 70% como inibidor microbiano (q.s.p). O tratamento foi iniciado 24 horas após a indução do tumor, e durou 21 dias. Terminado este período, os animais foram eutanasiados, e foram coletados o tumor, fígado, rim e pulmões dos animais para análises histológicas, além do sangue, para análise do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) do soro. A avaliação do volume tumoral indicou diferenças significativas entre os animais não tratados e os animais tratados, com os animais tratados apresentando menores tumores. Além disso, o VEGF também se apresentou aumentado nos animais não tratados, o que pode representar um possível mecanismo pelo qual o composto esteja agindo sobre as células tumorais. A avaliação histológica das amostras de tumor mostraram amplas áreas necróticas no material coletado a partir dos animais tratados, e indicativos de morte celular por apoptose. Ademais, o fígado se apresentou mais preservado nos animais tratados do que nos animais doentes sem tratamento, ou tratados com a formulação sem o composto ativo (branco). Nas amostras de rim não foram encontradas alterações histológicas, e nas amostras de pulmão, não foi identificado nenhum foco de metástase. A partir destes resultados, pode-se concluir que o composto apresentou significativo papel terapêutico contra o melanoma, com base na rota de distribuição transdérmica da droga.

Currently, cancer is the second main cause of death by disease in Brazil, and melanoma type skin cancer is the main cause of death among skin conditions. This way, considering the social impact and relevance of this disease, new options of more effective therapy against such aggravation are sought. Dibenzoylmethanes constitute a class of compounds which has been broadly studied due to their already known photoprotective, antiinflamatory and antitumoral properties. Thus, the present study aimed to evaluate antimelanoma properties of a dibenzoylmethane derivative with the purpose of topic application. The compound 1,3-diphenyl-2-benzyl-1,3-propanedione was synthesized from 1,3-diphenyl-1,3-propanedione (dibenzoylmethane). The in vitro citoxicity assay with MTT was performed with 3 x 10 3 cells plated per well in 96-well plates, and the compound in 0.25 µg/mL, 2.5 µg/mL, 25 µg/mL e 250 µg/mL concentrations, with cells being treated for 48 hours. The compound show IC 50 of 53.05 µg/mL for B16F10 cell line, derived from murine melanoma, and 225.5 µg/mL for melan-A cell line, derived from murine normal melanoblastos, with a selectivity index of 4.25. This indicates the compound is 4.25-fold more selective to melanoma cells in comparison to melanocytes, which indicates its therapeutic potential for in vivo assays. The in vivo assay was based on a murine melanoma model, using C57Bl/6 strain mice, with subcutaneous inoculation of 1 x 10 5 B16F10 cells in cervical region, and topical treatment at the same site the tumor was induced. Treatment was performed by using a transdermal gel, containing the compound at 1 mg/mL and 3 mg/mL concentrations, and 2% of Aristoflex® as gelifying agent, 5% of propylene glycol as humectant, 10% of dimetyl sulfoxide (DMSO) as absorption promoter and alcohol 70% as microbial inhibitor (q.s.p.). Treatment was initiated 24 hours after tumor cells were inoculated, and lasted 21 days. After such period, animals were euthanized and tumor, liver, lung and kidney samples were harvested for histological analyses, besides blood for vascular endothelial growth factor (VEGF) serum analysis. Tumor volume evaluation indicated significant differences between treated and untreated animals, with treated animals presenting smaller tumors. Moreover, serum VEGF was also higher in untreated animals, what can represent a possible mechanism by which compound acts on tumor cells. Tumor samples histological evaluation showed large necrotic areas in the material collected from treated animals, as well as indications of cell death by apoptosis. Besides, liver was better preserved in treated animals than in sick animals without treatment, or treated with formulation without the active compound (white). In kidney samples, no significant histological alterations were found, and in lung samples, no metastasis sites were identified. From these results, we can conclude the compound presented a significant therapeutic role against melanoma, based on transdermal route of drug distribution.