Refrigeração e congelamento de sêmen equino submetido à seleção espermática em coloide de camada única

Abstract

Apesar de haver perda progressiva da qualidade espermática conforme aumenta o intervalo desde a colheita até o processamento do sêmen, muitas vezes não é possível manipular o ejaculado visando o congelamento imediatamente. Nestes casos o armazenamento refrigerado e a centrifugação em coloide de camada Única (SLC) antes do congelamento podem melhorar o potencial de criopreservação. Desta forma, o objetivo deste estudo foi o de investigar se ejaculados de garanhões Crioulos podem ser armazenados por 8 horas nas temperaturas de 5° C ou 15° C antes de serem submetidos à SLC e congelados, mantendo aceitável percentual de motilidade progressiva após o descongelamento. Sêmen de 16 garanhões foi utilizado, sendo um ejaculado de cada animal (n=106) e diluídos com diluente comercial com base em gema de ovo (Gent®) para a concentração de 50x10º sptz/mL. Cada ejaculado foi dividido em 6 tratamentos, como segue: 1) Centrifugação tradicional e congelamento imediato; 2) SLC e congelamento imediato; 3) Congelamento após centrifugação tradicional com 8h de armazenamento a 5º €C; 4) Congelamento após SLC com 8h de armazenamento a 5º C; 5) Congelamento após centrifugação tradicional com 8h de armazenamento a 15º C; 6) Congelamento após SLC com 8h de armazenamento a 15º C. Os pellets foram ressuspendidos em diluente de congelamento comercial (Equiplus FreezeO) para a concentração de 200x10% sptz/mL e envazados em palhetas de 0,ômL. A motilidade progressiva (MP) foi avaliada pelo sistema CASA (AndroVisionO) nos seguintes momentos: 1) Ejaculado in natura; 2) Sêmen diluído; 3) Após refrigeração (para as amostras armazenadas); 4) Imediatamente antes do congelamento; 5) Amostra descongelada. A MP foi maior para as amostras submetidas à SLC em comparação às centrifugadas da forma tradicional em todos os protocolos. A melhor MP pos-descongelamento foi observada quando a SLC e a criopreservação foram feitas imediatamente após a colheita do ejaculado (p<0,001). Não houve diferença na MP entre os dois protocolos com refrigeração (5° C e 15° C; P>0,05). Um maior percentual de ejaculados apresentou MP 230% quando submetidos a SLC em comparagao ao metodo tradicional, independente do protocolo (P<0.01). As analises foram realizadas por ANOVA e qui-quadrado. É possível armazenar sêmen de garanhões Crioulos por 8 horas na temperatura de 5º C ou 15º C antes de proceder a SLC e o congelamento, obtendo ainda um aceitável percentual de MP pós-descongelamento, contudo há variação entre garanhões.

Although sperm quality deteriorates with increasing time between collection and processing, it is not always feasible or practical to process stallion semen for freezing immediately after collection. Semen storage and processing by Single Layer Centrifugation (SLC) prior to freezing may improve cryosurvival. Thus the objective of the present study was to investigate whether stallion semen can be stored for 8h at 5° or 15° C prior to SLC and freezing, and still provide acceptable post-thaw results. Semen was collected from 16 stallions (n=16), diluted with semen extender (Gent©) to 50x10° spz/mL and splited between the different storage treatments as follows: |) uncentrifuged immediate freezing; li) SLC, immediate freezing; lil) uncentrifuged storage for 8h at 5°C; iv) storage for 8h at 59°C and SLC; v) uncentrifuged storage for 8h at 15°C; and vi) storage for 8h at 15°C and SLC. Sperm pellets were resuspended in freezing extender (EquiPlus Freeze©) at a concentration of 200x10°/mL. Sperm motility was measured by computer assisted sperm analysis (AndroVision©) in the moments: |) in the raw ejaculate immediately after collection; il) after extension; iii) after cooling (for stored samples only); iv) immediately prior to freezing; v) post-thawing. Progressive motility was higher in the SLC samples than in the corresponding uncentrifuged for all storage protocols, the best progressive motility was seen in the samples where SLC was done immediately after semen collection (P<0.001). There was no difference in the progressive motility between the two storage temperatures, 5°C and 15°C (P>0.05). More ejaculates showed an acceptable post-thaw motility of >30% after SLC processing than uncentrifuged , regardless of storage protocol (P<0.01). It is possible to store stallion semen for 8h at 5°C or 15°C prior to SLC and freezing, and still obtain acceptable post-thaw motility, although there is variation between stallions.