Isolamento e seleção de procariotos residentes de filoplano do tomateiro com potencial para o controle de doenças da cultura

Abstract

O presente trabalho teve como objetivo isolar procariotos residentes de filoplano de tomateiro como agentes de biocontrole contra o patógeno Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. 300 isolados foram obtidos a partir de folhas sadias de tomateiros coletadas na micro-região de Viçosa-MG, as quais foram submetidas à extração das populações procarióticas epifíticas em solução de tampão fosfato (PBS) com emprego de ultra-som (60Hz, 20 min.) e semeadura de diluições em série em placas de Petri contendo meio 523. Em casa-de-vegetação, numa primeira etapa 79 isolados apresentaram capacidade de reduzir, em média, 82 % da severidade de doença. Desses, numa segunda etapa, 33 isolados apresentaram redução média da severidade de doença em 50 %. Os 33 isolados foram submetidos a testes de antibiose in vitro, em que foi avaliada a potencialidade em inibir o crescimento bacteriano e fúngico dos seguintes patógenos do tomateiro: Pseudomonas syringae pv. tomato, Pseudomonas corrugata, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, Alternaria solani e Corynespora cassiicola. Dos 33 isolados pré- selecionados verificou-se que o isolado RFK-24 foi capaz de inibir o crescimento dos patógenos, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis e Alternaria solani e o RFS-183 em inibir o crescimento dos patógenos Alternaria solani, Xanthomons campestris pv. vesicatoria, Pseudomonas syringae pv. tomato e Pseudomonas corrugata, mas ambos não inibiram o crescimento da Corynespora cassiicola. Os dois isolados foram selecionados para ensaios in vivo e em folíolos destacados, contra os patógenos desafiantes Alternaria solani e Xanthomons campestris pv. vesicatoria. Para ambos foi observada a correlação entre a severidade de doença apresentada em casa-de-vegetação e os resultados em folíolos destacados, como a inibição da germinação de conídios do patógeno fúngico e a supressividade em meio semi-seletivo dos antagonistas sob o patógeno bacteriano. Os resultados obtidos com o método com folíolos destacados e sua correlação com os dados de biocontrole experimental em casa-de-vegetação permitem deduzir que o uso de folíolos destacados pode ser utilizado como método para seleção massal.

This work aimed to select tomato prokaryotic phylloplane residents for biocontrol purposes, by using Xanthomonas campestris pv. vesicatoria and Alternaria solani as challenging pathogens. Additionally, to perform a screening test using detached leaves. Consequently, leaves from healthy tomato plants were collected at Viçosa, MG and epiphytic prokaryote populations were extracted by shacking them in PBS (0,85% NaCl in 0,1M phosphate buffer saline, pH 7.0) following sonication (60Hz, 20 minutes) and serial dilution and plating in culture medium. Three hundred bacterial isolates were obtained and preserved in refrigerator, with periodical tubetube transfer, in a refrigerator. The screening was performed in two selection cycles. In the first selection in greenhouse, with three replicates per isolate and Xanthomonas campestris pv. vesicatoria as challenging pathogen, 79 isolates were able to reduce disease by 82%. In a second selection cycle, using 6 replicates per isolate, the 33 isolates were able to reduce severity by 50% in average. The 33 isolates had their antagonistic potential tested against the tomato fungal and bacterial pathogens Pseudomonas syringae pv. tomato, Pseudomonas corrugata, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, Alternaria solani and Corynespora cassiicola in vitro conditions. Out of the 33 isolates, the isolate RFK-24 inhibited growth of Xathomonas campestris pv. vesicatoria, Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis and Alternaria solani while isolate RFS-183 was able to inhibit Alternaria solani, Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Pseudomonas syringae pv. tomato e Pseudomonas corrugata, but none of them inhibited Corynespora cassiicola. Being RFK-24 and RFS- 183 the ones with a wider antagonistic potential out of the 33 previously selected, they were chosen for continuing the research with detached leaves and the challenging pathogens Alternaria solani e Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. There was a positive correlation between disease severity reduction in plants the greenhouse and in detached leaves, for both antagonists. For situations involving large number of isolates to undergo mass screening, the approach with detached organs may replace the laborious and time consuming greenhouse screening.