Inseminação artificial em tempo fixo e transferência de embriões na eficiência reprodutiva de fêmeas bovinas

Abstract

Objetivou-se neste trabalho avaliar, em protocolos de sincronização da ovulação, a dinâmica folicular e a eficiência reprodutiva em vacas da raça Nelore com a administração de benzoato de estradiol (BE) associado a suplemento injetável de aminoácidos e polipeptídeos, após o uso de hormônios estimulantes gonadotróficos (eCG e FSH-p) em vacas da raça Nelore e em vacas da raça Girolando e depois da administração de somatotropina bovina recombinante (bST-r) associado ao BE em vacas da raça Girolando, bem como estudar a eficiência de associação de flushing nutricional sobre a resposta superovulatória, número, qualidade e morfologia dos embriões de vacas da raça Nelore. Foram realizados cinco estudos. Nas análises estatísticas, utilizou-se o programa SAS® 9.0 a 5% de probabilidade. No estudo I, pelo experimento I analisou-se a dinâmica folicular, utilizando 32 vacas Nelore em fatorial 2 x 2, com a administração (TSuplemento) ou não (TControle) de suplemento injetável de aminoácidos e polipeptídeos e dois protocolos de sincronização da ovulação: o TBE9, com aplicação de BE no dia 0 e 9, e a IATF realizada 50-56 h após a retirada do dispositivo de progesterona; e o TBE8, similar ao anterior, com a segunda dose de BE no dia 8 e a IATF 48 h após a retirada. No experimento II, verificou-se a eficiência reprodutiva em TControle (n = 48), TSuplemento (n = 52), TBE8 (n = 51) e TBE9 (n = 49). No experimento I, não foi observado (P>0,05) efeito dos protocolos e do suplemento na dinâmica folicular. O diâmetro do folículo pré-ovulatório foi 11,06; 10,36; 11,25; e 10,18 mm, nas vacas do TControle, TSuplemento, TBE8 e TBE9, respectivamente. No experimento II, não houve diferença (P>0,05) na taxa de prenhez na IATF, no repasse por touros e na acumulada, respectivamente, para TControle (56,25; 38,09; e 72,92%), TSuplemento (50,00; 65,38; 80,77%), TBE8 (54,90; 52,17; 78,43%); e TBE9 (51,02; 62,00; 75,51%). A administração de suplemento de aminoácidos e polipeptídeos injetável e o intervalo de administração do BE à IATF não influenciaram a dinâmica folicular, o intervalo até a ovulação e as taxas de prenhez na IATF, no repasse por touros e na acumulada. No estudo II, pelo experimento I avaliou-se a dinâmica folicular, utilizando 30 vacas em três tratamentos: TeCG (n = 10) - no dia 0, inserção de dispositivo intravaginal de progesterona mais 2 mg BE IM; no dia 8, remoção do dispositivo e aplicação 300 UI de eCG IM, 0,15 mg de PGF2α e 1 mg de BE; no dia 10, realizou-se a IATF 48 h após a remoção do dispositivo; TFSH48 (n = 10) - similar ao tratamento anterior, sendo a dose de eCG substituída por 10 mg NIH de FSH-S1 (FSH-p); TFSH42 (n = 10) - similar ao TFSH48, sendo a IATF realizada 42 h após a retirada do dispositivo. No experimento II, verificou-se a eficiência reprodutiva em tratamentos similares aos do experimento I: TeCG = 33 vacas; TFSH48 = 32 vacas; TFSH42 = 32 vacas. No experimento I, não se verificou (P>0,05) diferença na média de folículos por animal (11,93±2,67), no diâmetro do maior folículo (9,63 ± 1,54 mm), no diâmetro do segundo maior folículo (7,20 ± 1,14 mm), na taxa de crescimento do folículo ovulatório (0,07 ± 0,04 mm/h) e na taxa de ovulação (83,33%). No experimento II, a taxa de prenhez das vacas não diferiu (P>0,05) entre os tratamentos (TeCG = 54,54; TFSH48 = 53,12; TSFH42 = 62,50%). Portanto, o uso de eCG ou FSH-p não diferenciou em efeitos sobre a dinâmica folicular e eficiência reprodutiva em programas de IATF. No Estudo III, pelo experimento I notou-se a dinâmica folicular, utilizando 30 vacas: TControle (n = 10) - dia 0, inserção de dispositivo de progesterona + 2 mg de BE; dia 8, remoção do dispositivo + 112 mg de d-cloprostenol + 1 mg de BE; dia 10, IATF realizada 44 h após a retirada do dispositivo; TeCG (n = 10) - similar ao TControle, com administração no dia 8 de 300 UI eCG; TFSH (n = 10) - similar ao TControle, sendo que no dia 8 foram administrados 15 mg de FSH-p. No experimento II, avaliou-se a eficiência reprodutiva das vacas em tratamentos similares: TControle (n = 49), TeCG (n = 50) e TFSH (n = 50). Não foi observado (P>0,05) efeito do tratamento e do dia na dinâmica folicular. O diâmetro do folículo pré-ovulatório foi de 8,97; 7,59; e 9,38 mm nas vacas do TControle, TeCG e TFSH, respectivamente. No experimento II, não houve diferença (P>0,05) na taxa de prenhez por IATF, na reinseminação e acumulada, respectivamente, para TControle (40,82; 56,25; e 59,18%), TeCG (26,00; 68,42; e 52,00%) e TFSH (38,00; 70,59; e 62,00%). Não se verificou efeito sobre a taxa de prenhez pela adição dos hormônios FSH-p e eCG em protocolo de sincronização da ovulação em vacas Girolando, porém a reinseminação artificial no período de 14 a 45 dias pós-IATF aumentou a taxa de prenhez. No estudo IV, pelo experimento I analisou-se a dinâmica folicular, utilizando 40 vacas em fatorial 2 x 2, constituído da administração ou não de bST-r e dois protocolos: o TBE8, com a aplicação de BE nos dias 0 e 8, e a IATF realizada 44 h após a retirada do dispositivo de progesterona; e o TBE9, similar ao anterior, com a segunda dose de BE no dia 9 e a IATF realizada 48 h após a retirada do dispositivo. No experimento II, verificou-se a eficiência reprodutiva das vacas em delineamento e tratamentos similares (TbST, n = 99; TControle, n = 102; TBE8, n = 100; TBE9, n = 101). Calculou-se a taxa de prenhez das vacas submetidas à reinseminação que retornaram ao estro de 14 a 45 dias depois da IATF, bem como a taxa de prenhez acumulada. No experimento I, não foi observado (P>0,05) efeito da administração de bST-r e dos protocolos na dinâmica folicular. O diâmetro do folículo pré-ovulatório foi similar nas vacas do TControle (8,16 mm), TbST (9,51 mm), TBE8 (8,72 mm) e TBE9 (8,95 mm). No experimento II, não houve diferença (P>0,05) na taxa de prenhez na IATF, na reinseminação artificial e na acumulada, respectivamente, para TControle (35,64; 72,22 e 63,37%), TbST (33,33; 64,29 e 60,61%), TBE8 (37,00; 64,29 e 64,00%); e TBE9 (32,0; 62,22; e 60,00%). A administração de bST-r e o intervalo de administração do BE à IATF não influenciaram a dinâmica folicular e o intervalo até a ovulação. As taxas de prenhez na IATF na reinseminação e a acumulada foram satisfatórias. No estudo V, os tratamentos foram: controle (TControle = 17 vacas) e flushing nutricional (TFlushing = 17 vacas). No TFlushing, forneceu-se a suplementação energética (1% do peso corporal) três dias antes a 18 dias depois do início dos protocolos de superovulação. O condicionamento do ciclo estral e superovulação das vacas foi: dia 0 - inserção de dispositivo intravaginal de progesterona mais 2 mg de BE IM; Dia 7 - início do tratamento superovulatório com 140 a 164 mg de FSH-p administrado em doses decrescentes; Dia 9 - administrou-se 150 μg de PGF2α IM no período da manhã e foi retirado o dispositivo de progesterona à tarde; Dia 10 - administrou-se 1 mg de BE de manhã; dia 11 - realizaram-se duas inseminações artificiais após o início do estro com intervalo de 12 h; no dia 18, fez-se a coleta dos embriões. A resposta superovulatória, o número total de estruturas, o número de embriões viáveis e não viáveis e ovócitos não foram afetados pelo incremento nutricional de energia. Coletaram-se cerca de 6,00 ± 1,15 e 3,38 ± 1,19 estruturas totais, 3,50 ± 0,82 e 2,08 ± 0,85 embriões viáveis, 0,79 ± 0,25 e 0,38 ± 0,26 embriões não viáveis e 0,79 ± 0,22 e 0,38 ± 0,23 ovócitos por vaca nos TControle e TFlushing, respectivamente. Houve maior presença de mórulas(38,09%) e de blastocistos iniciais (25,00%). Não ocorreram diferenças quanto à quantidade de células (TControle = 56,35; TFlushing = 62,69) e de células em divisão caracterizadas pela metáfase (TControle = 1,27; TFlushing = 1,73) dos embriões viáveis. O incremento nutricional com energia e proteína por curto período em vacas da raça Nelore não modificou a dinâmica folicular nem a resposta superovulatória, no que se refere ao número e viabilidade das estruturas coletadas.

The objective was to evaluate follicular dynamics and reproductive efficiency in Nelore cows with the use of estradiol benzoate (EB) on the synchronization of ovulation associated to injectable amino acids and polypeptides supplementation; verify follicular dynamics and reproductive efficiency of hormonal protocols on the synchronization of ovulation using pFSH for Timed Artificial Insemination (TAI) in Nelore cows; verify follicular dynamics and reproductive efficiency when using gonadotropic stimulating hormones (eCG and pFSH) in protocols of synchronization of ovulation in Girolando cows; to evaluate follicular dynamics and reproductive efficiency with the use of EB associated to recombinant bovine somatotropin (bST-r) on the synchronization of ovulation protocols in Girolando cows and to study the efficiency of association of nutritional flushing on the superovulatory response, number, quality and morphology of embryos in Nelore cows. Five studies were conducted.The statistical analysis was performed using SAS® 9.0 program with 5% of probability. In the Study I, with the Experiment I, 32 Nelore cows were evaluated by follicular dynamics in a 2X2 factorial arrangement, receiveing amino acids and polypeptides (Tsupplementation) or no (Tcontrol). Also, two protocols of synchronization of ovulation were used: TEB9, with EB administration on days 0 and 9 and TAI performed at 50-56 h after progesterone device removal; and TEB8, similar to the first one, but with the second dose of EB on day 8, and TAI performed at 48h after its removal. In the experiment II, reproductive efficiency was evaluated in Tcontrol (n=48), Tsupplementation (n=52), TEB8 (n= 51) and TEB9 (n=49). In the experiment I, there were no effects (P>0.05) of the synchronization protocols or of the supplementation on the follicular dynamics. The preovulatory follicle diameter was 11.06; 10.36; 11.25; 10.18 mm for cows in Tcontrol, Tsupplementation, TEB8 and TEB9, respectively. In the experiment II, there was no difference (P>0.05) for pregnancy rate after TAI, after natural mating or accumulated for Tcontrol= (56.25; 38.09; 72.92%), Tsupplementation (50.00; 65.38; 80.77%), TEB8 (54.90; 52.17; 78.43%) and TEB9 (51.02; 62.00; 75.51%). The administration of injectable amino acids and polypeptides supplementation and the interval from EB administration to TAI did not influence follicular dynamics, the interval to ovulation and the pregnancy rates after TAI, after natural mating and accumulated. In the Study II, with the experiment I, follicular dynamics was evaluated using 30 cows in three treatments: 1) TeCG (n=10) - on day 0, insertion of intravaginal progesterone devices plus 2 mg benzoate of estradiol (BE), intramuscularly (IM); on day 8, devices removal and 300 IU eCG IM, 0.15 mg PGF2α and 1 mg EB; on day 10, AI was performed 48 h after devices removal; 2) TFSH48 (n=10) - similar to previous treatment, but instead of eCG, 10 mg NIH FSH-S1 (FSH-p) was done; TFSH42 (n=10) - similar to TFSH48, but AI was performed 42 h after devices removal. In the experiment II, reproductive efficiency was evaluated in treatments similar to those of experiment I: TeCG= 33 cows; TFSH48= 32 cows; TFSH42= 32 cows. In the experiment I, it was not observed (P>0.05) any difference on the average number of follicles per cow (11.93±2.67), on the diameter of the largest follicle (9.63±1.54 mm), of the second largest (7.20±1.14 mm), in the ovulatory follicle growth rate (0.07±0.04 mm/h) and in the ovulation rate (83.33%). In the experiment II, conception rate did not differ (P>0.05) among treatments (TeCG= 54.54; TFSH48= 53.12; TSFH42= 62.50%). Therefore, the use of eCG or pFSH are similar regarding effects on the follicular dynamics and reproductive efficiency in TAI programs. In the Study III, with the experiment I, follicular dynamics was verified, using 30 cows: Tcontrol (n=10) - Day 0, insertion of progesterone device + 2mg EB; Day 8, devices removal + 112mg d-cloprostenol + 1mg EB; day 10, timed artificial insemination was performed 44 h after device removal; TeCG (n=10) - similar to the previous one, but using on day 8, 300 IU eCG; TFSH (n=10) similar to Tcontrol, but using on Day 8, 15mg pFSH. In the experiment II, reproductive efficiency was evaluated in cows submitted to similar treatments to those of experiment I: Tcontrol (n=49), TeCG (n=50) and TFSH (n=50). There was no difference (P>0.05) of treatment effect and of the day of follicular dynamics. The average diameter of preovulatory follicle was 8.97, 7.59 and 9.38 mm for cows of TControl, TeCG and TFSH, respectively. In the experiment II, there was no difference (P>0.05) in the pregnancy rate after the first, second insemination and the accumulated, respectively to Tcontrol (40.82; 56.25 and 59.18%), TeCG (26.00; 68.42 and 52.00%) and TFSH (38.00; 70.59 and 62.00%). It was not observed effect on the pregnancy rate when adding pFHS and eCG hormones to protocols of synchronization of ovulation in Girolando cows, but the second insemination performed from 14 to 45 days after the first one improved the pregnancy rate. In the Study IV, with the experiment I, follicular dynamics was performed using 40 cows in 2 x 2 factorial arrangement, with the administration or not of bST-r and two protocols: TEB8, with the use of EB on days 0 and 8, and TAI performed 44 h after progesterone devices removal; and TEB9, similar to the first one, but with the second dose of EB on day 9 and TAI performed 48 h after its removal. In the experiment II, cows reproductive efficiency in similar treatments (TbST, n= 99; TControl, n=102; TEB8, n=100; TEB9, n=101) were evaluated. Cows that returned to estrus (14 to 45 after TAI) were submitted to a second insemination and pregnancy rate was calculated and also the accumulated pregnancy rate. In the experiment I, it was not observed (P>0.05) bST-r or protocols effects on follicular dynamics. The average diameter of preovulatory follicle was 8.16; 9.51, 8.72 and 8.95 mm for cows of TControl, TbST, TEB8 and TEB9, respectively. In the experiment II, there was no difference (P>0.05) for pregnancy rate after TAI (Tcontrol=56.25%; Tsupplementation=50.00%; TEB8=54.90%; TEB9=51.02%), after natural mating (Tcontrol=38.09%; Tsupplementation=65.38%; TEB8=52.17%; TEB9=62.00%), or accumulated (Tcontrol=72.92%; Tsupplementation=80.77%; TEB8=78.43%; TEB9=75.51%). The bST-r administration and the interval from EB administration to TAI did not influence follicular dynamics and the interval to ovulation. Also, pregnancy rate after first TAI,second TAI and accumulated were satisfactory. In the Study V, the treatments were: control (TControl = 17 cows) and nutritional flushing (TFlushing = 17 cows). In TFlushing energy supplementation (1% of body weight) was given from 3 days before to 18 days after the beggining of the superovulatory protocol. The conditioning of estrous cycle and superovulation of the cows was: Day 0 - insertion of intravaginal progesterone devices plus 2 mg EB i.m.; Day 7 - beginning of the superovulatory protocol with 140 to 164 mg FSF-p given in decreasing doses; Day 9 - 150 μg PGF2α i.m. in the morning and progesterone device was removed in the afternoon; Day 10 - 1 mg EB i.m. in the morning; Day 11 - two artificial inseminations were performed after estrous onset in an interval of 12 hours; Day 18 - embryo collection was done. The superovulatory answer, the total number of structures, the number of viable embryos, nonviables and oocytes were not affected by the energy supplementation. Were collected about 6.00 ± 1.15 and 3.38 ± 1.19 of total structures, 3.50 ± 0.82 and 2.08 ± 0.85 of viable embryos, 0.79 ± 0.25 and 0.38 ± 0.26 of nonviable embryos, 0.79 ± 0.22 and 0.38 ± 0.23 of oocytes per cow in TControl and TFlushing, respectively. A greater presence of morula (38.09%) and of initial blastocytes (25.00%) were found. There were no differences on the quantity of cell nucleus (TControl = 56.35; TFlushing = 62.69) and on nucleus of dividing cells characterized by metaphase (TControl= 1.27; TFlushing = 1.73) from viable embryos. The protein and energy supplementation in a short period in Nelore cows did not alter follicular dynamics and the superovulatory answer, in terms of number or viability of the collected structures.