Medicina Veterinária
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Item Association of sperm oxidative stress, proteomics and fatty acid profiles in nellore bulls at sexual rest(Universidade Federal de Viçosa, 2023-03-31) Ramírez López, Camilo José; Guimarães, Simone Eliza Facioni; http://lattes.cnpq.br/2019925307607771Association of sperm oxidative stress, proteomics and fatty acid profiles in nellore bulls at sexual rest. Adviser: Simone Eliza Facioni Guimarães. This study was carried out with the objective of determining the effect of sexual rest on the oxidative status of spermatozoa from adult Nellore bulls and its effect on the fatty acid composition and protein profile. Six bulls were used, which were submitted to Breeding Soundness Evaluation and consecutive semen collection by the electroejaculation method. For each semen collection, the physical and morphological characteristics of the ejaculates were evaluated using conventional optical microscopy and phase contrast microscopy. After analyzing the semen qualitative parameters, the first and last ejaculate of each were centrifuged to separate the spermatozoa from the seminal plasma. From sperm aliquots, the enzymatic activity of Super Oxido Dismutase, Catalase and Glutathione S-Transferase was determined by colorimetric methods. The markers of lipid peroxidation, malondialdehyde and nitric oxide were also determined. Using gas chromatography, the fatty acids of sperm from the first and last ejaculate were identified. For proteomic analysis, total sperm proteins were extracted and precipitated in a 4% CHAPS solution, then quantified by the Bradford method and subsequently analyzed by monodimensional short-run electrophoresis and mass spectrometry (LC-MS/MS). Proteins were identified using PEAKS software version 7.0. Proteins were functionally classified by the RPSBLAST tool of BLAST version 2.13.0 into categories from the KOG database. For the label-free quantitative proteomics analysis, proteins identified in at least three technical replicates of each group with a fold-change greater than 1.5 times were included. Data were analyzed using GraphPad Prisma software version 9.1. Four semen collections were necessary so that the bulls at sexual rest presented sperm parameters compatible with reproductive fitness. Differences (p<0.05) were observed between all physical and morphological characteristics of the first and last ejaculate. A total of 974 proteins were identified, of which 735 were common between the two groups and 123 and 116 proteins were unique to spermatozoa from the first and last ejaculate, respectively. Functional classification analysis revealed that KOG categories with the highest number of classified proteins were Posttranslational modification, protein turnover, chaperones and Cytoskeleton and Signal transduction mechanisms. The protein abundance profile showed that 6 proteins were differentially abundant in spermatozoa from the first ejaculate and 30 proteins weredifferentially abundant in spermatozoa from the last ejaculate. In addition, gas chromatography analysis allowed the identification of 19 fatty acids, 47.3% of the saturated type and 52.7% of the unsaturated type. The C12:0 and C18:0 fatty acids showed difference between the two groups, being more abundant in the spermatozoa of the last ejaculate. The results indicate that oxidative stress may be related to sperm characteristics displayed by bulls at sexual rest, since the accumulation of by-products of lipid peroxidation can cause alterations in the metabolic pathways used by spermatozoa to generate energy used for motility and alter fluidity. of the membrane causing sperm abnormalities. Keywords: Bovine. Semen. Antioxidants. Lipids. Proteins.Item Proteomic applications for studies of bull fertility(Universidade Federal de Viçosa, 2022-10-20) Viana, Arabela Guedes de Azevedo; Neves, Mariana Machado; http://lattes.cnpq.br/3257628340084374During spermatogenesis, the immature spermatozoon undergoes a series of morphological changes, and the nucleus is highly condensed to protect the DNA. Thus, the apparently transcriptionally silent sperm exclusively depends on the extracellular factors for survival and functionality. The seminal plasma (SP) is a fluid produced by accessory sexual glands, epididymides, and testes, and plays crucial roles in the ejaculated sperm. Understanding the complexity of the SP proteins is still a challenge and proteomic approaches have been widely used to uncover SP proteins and, consequently, potential protein biomarkers of bull fertility. To verify the state of the art of the SP proteome and its relationship with sperm fertility in bulls, we applied an extensive and systematic literature search to select 71 and 29 studies for systematic review and meta-analysis research, respectively. Qualitatively, the exposure to a single protein, such as osteopontin (OPN), binder of sperm proteins (BSPs), and heparin- binding proteins (HBPs), positively associates with sperm motility, capacitation, and fertilizing ability. Quantitatively, our meta-analysis revealed that seminal proteins ameliorate sperm parameters. BSPs and beta-defensin 126 highly favored sperm protection when cells were collected from the epididymis by retrograde flux and analyzed under room temperature conditions. Total SP proteins improved the motility and quality of Bos taurus sperm collected by artificial vagina, mainly in the presence of HBPs. Due to the diversity of methodologies applied in the eligible studies, the translational aspects of SP research should be taken into consideration to precisely define how seminal proteins can be harnessed to advance reproductive biotechnology. Then, we suggested that future studies should evaluate intact proteins to ascertain their biological functions. To address this question, we evaluated the associations between seminal proteoforms in bulls with contrasting freezability statuses. We employed top-down mass spectrometry to generate sperm and seminal plasma proteoform atlas of bulls with low (LF; n = 6 ) and high (HF; n = 9) semen freezability. Sperm and seminal plasma proteins were fractionated by tandem size exclusion chromatography (< 30 kDa) and analyzed by mass spectrometry (operated in protein intact mode). We characterized 299 and 267 bull SP and sperm proteoforms, respectively; most of them, truncated. Interestingly, the two proteins that presented the greatest number of proteoforms play opposite roles in the regulation of calcium intake, the c-type natriuretic peptide and the caltrin. A truncated proteoform of beta-defensin 10 with pyrrolidone carboxylic acid in the N-terminal was exclusively identified in the SP of HF bulls and may be further investigated to be pointed out as a potential biomarker. Eight truncations of OPN, including one with a serine phosphorylation site, were uniquely expressed in the SP of LF bulls. Regarding sperm proteoforms, we described the acetylation of histone H2A type 1 and c-Myc protein binding proteoform in LF sires, which may indicate a deficiency in DNA packing and/or nuclear activity. This first sperm and seminal plasma proteoform atlas of any species, showed that post-translational processing appears to define bio-attributes of proteins and their empirical associations with sperm cryoresistance. Keywords: Bull. Fertility. Seminal plasma. Proteins. Proteoforms. Systematic review. Meta- analysis.Item Predictors of success in the breeding soundness evaluation and infertility in bulls(Universidade Federal de Viçosa, 2022-08-26) Diaz Miranda, Edgar Andres; Guimarães, Jose Domingos; http://lattes.cnpq.br/5205157254175928Bull fertility is critical for the profitability and sustainability of the cattle industry. To date, the Breeding soundness evaluation (BSE) is the best methodology to estimate the reproductive potential of future bulls. However, the guidelines for the BSE differ between practitioners and societies, perhaps due to a lack in research in this area. Therefore, our first study hypothesized that by the implementation and use of strict BSE guidelines the number of approved Nellore bulls and their reproductive quality would increase overtime. Furthermore, our second study hypothesized that bulls born early in the calving season are more likely to be approved in their first BSE when compared to males calved later. To evaluate these two hypotheses, records of 20 years and 46,566 BSE were used in two separate analyses including a multivariate logistic regression to measure the effect of the year and farm, and to predict the probability of approval in Nellore young bulls at their first BSE according to their dams calving date. Bulls were classified as approved (satisfactory potential breeders and qualified for natural breeding service) and not approved (deferred and unsatisfactory potential breeders). Overall, there was no improvement in the percentage of approved bulls. However, there was an increase in the number of bulls approved in the first BSE and an increase in the percentage of bulls classified as satisfactory potential breeders (P-value <0.05), which means that the quality of the bulls improved over time. On the other hand, it was demonstrated that the calving date affected the probability of approval at the first BSE. Hence, bulls born on day 0 of the calving season had 1.26 more chances to be approved at the first BSE than bulls born 21 days later. In our studies, 53% of the bulls were not approved due to poor sperm quality, specifically abnormal sperm morphology. Bull ejaculates with the aplastic midpiece defect (AMD) have poor motility and fertility and it’s related to have a putative genetic origin. Therefore, our third study aimed to understand the origin and factors contributing to the abnormal sperm production of the AMD in Dairy Gyr bulls. Six Dairy Gyr Bulls (three control bulls and three bulls with AMD) obtained from the same farm and management were castrated to conduct a sperm morphofunctional and proteomic study and evaluate the redox state of reproductive tissues. The morphological analysis demonstrated that the AMD is a consequence of defective spermiogenesis. Control bulls also produced a high percentage of AMD but have an effective mechanism of removal of the defective sperm prior to epididymal transit. This mechanism generates mild oxidative stress in the testis and caput of the epididymis (measured as MDA and CAT; P-value <0.05); however, the redox state was reestablished in the corpus and cauda of the epididymis. Furthermore, qualitative and quantitative proteomic analysis showed that the sperm maturation of the bulls with the AMD should be deficient once they had differences in protein expression and a poor enrichment of critical pathways for sperm fertility. Finally, our last study hypothesized that binder of sperm (BSP) proteins could be used as a potential biomarker of defective sperm. Therefore, we characterized the binding properties and abundance of the BSP proteins after discontinuous gradient centrifugation and found that; in the supernatant fractions, there was an increase of BSP proteins abundance when compared to the sperm pellet fractions (P- value <0.05). In the sperm pellet fractions, BSP1 and BSP3 bound predominately to the acrosomal region of the sperm head, whereas BSP5 had a high affinity for the midpiece. Furthermore, high BSP proteins abundance was found to be correlated with acrosome and membrane damage induced by permeabilization. Therefore, the abundance of BSP proteins could be used as biomarker of defective sperm or sperm with compromise function. Our results allowed us to complement the knowledge on bull fertility, from the basic but functionally BSE to biomarkers for defective sperm specially on Bos indicus cattle. Keywords: Bull fertility. Sperm morphology. BSPs. Biomarkers.Item Transferência gênica mediada por espermatozoides bovinos associados a vetores lentivirais(Universidade Federal de Viçosa, 2020-02-20) Lemos, Diana Rangel de; Camargo, Luiz Sergio de Almeida; http://lattes.cnpq.br/6174577697563157Para otimização da produção de embriões bovinos geneticamente modificados (GMs) foi avaliada a possibilidade de produção in vitro (PIV) utilizando espermatozóides como carreadores de vetores lentivirais (VLs), visto que não consta na literatura relatos utilizando essa estratégia em bovinos. Foram avaliados a produção de embriões GMs com o transgene da proteína verde fluorescente (GFP) e posteriormente com o gene do fator IX de coagulação humano (FIX) como modelo de proteína recombinante humana (PRH), devido à importância desta proteína para pacientes com hemofilia B. Foi confirmada a expressão do GFP em células HEK e MDBK, após transdução das partículas, entretanto não foi possível realizar a seleção das células transduzidas. O mesmo resultado foi encontrado em fibroblastos transduzidos com o transgene FIX. A produção in vitro de embriões co-incubados com VLs durante a fertilização in vitro (FIV) prejudicou a taxa de clivagem e consequentemente a de produção de embriões. Já quando a co-incubação ocorreu durante o cultivo in vitro (CIV) não houve diferença estatística (p>0.05) nas taxas de desenvolvimento embrionário entre os tratamentos estudados. Apesar das células do cumulus terem expressado o GFP após incubação com os lentivírus, o mesmo não foi observado nos embriões. Esse resultado foi confirmado a partir da extração do DNA, que demonstrou ausência de inserção dos transgenes do GFP e FIX, o que diferiu de resultados encontrados em estudos similares. Dessa forma, os VLs estudados foram capazes de transfectar as células do cumulus, demonstrando sua eficiência na transdução de células somáticas, entretanto, não houve a produção de embriões geneticamente modificados a partir da co-incubação dos VLs com espermatozóides bovinos. Palavras-chave: Espermatozóides. Vetores lentivirais. Transferência gênica. Proteínas recombinantes humanasItem Parâmetros reprodutivos em touros: análise proteômica do plasma seminal e teste de congelabilidade do sêmen(Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-31) Okano, Denise Silva; Guimarães, José Domingos; http://lattes.cnpq.br/7557484760658442Na espécie bovina existem animais que acumulam espermatozoides senescentes na cauda do epidídimo, devido a abstinência sexual, esses animais caracterizam-se por ejacularem grande volume de sêmen com baixa motilidade espermática e que com coletas consecutivas tem o aumento gradual dessa característica. Essa condição se apresenta principalmente em touros criados sob manejo extensivo, e o uso desses animais pode diminuir a eficiência reprodutiva durante a estação de monta (BARTH 2007). O plasma seminal é uma mistura bioquimicamente complexa e que tem importância significativa na regulação da função espermática. Diante disso, o objetivo desse estudo foi identificar o perfil proteômico em ejaculados de touros aprovados e em repouso sexual imediatamente após a avaliação do primeiro ejaculado. Foram utilizados seis touros em repouso sexual, e dois animais como controle. Três grupos foram formados, sendo o grupo A constituído por amostras do sêmen da primeira coleta dos touros em repouso sexual; grupo B: amostra de sêmen da última coleta dos touros em repouso sexual; e grupo C: amostra de sêmen dos touros controle. Todos os touros foram submetidos à avaliação andrológica pelo método de eletroejaculação e foram avaliados os aspectos físicos e morfológicos dos ejaculado por meio de microscopia óptica convencional e de contraste de fase. Depois das análises, os ejaculados foram centrifugados e os sobrenadantes (plasma seminal) foram usados para estudo proteômico. Depois da centrifugação, as proteínas do plasma seminal foram quantificadas pelo método de Bradford e analisadas por meio de eletroforese monodimensional e espectrometria de massas (LC-MS/MS). As proteínas foram identificadas pelo MASCOT e validadas estatisticamente usando o software SCAFFOLD Q+. As proteínas foram caracterizadas de acordo a suas classes e processos biológicos pelo STRAP usando os termos de ontologia gênica depositados no banco de dados UniprotKB. As proteínas diferencialmente abundantes foram quantificadas pelo método emPAI considerando unicamente aquelas proteínas com foldchange superior a 1,5 vezes. Os dados referentes à motilidade espermática foram submetidos à transformação angular (Y^'=arcsen√Y). As variáveis quantitativas foram analisadas por ANOVA. As variáveis qualitativas foram analisadas pelo teste de Kruskal-Wallis. O nível de significância adotado foi α = 5%. Foram encontratros 1,67% de touros em repouso sexual (7/419). Houve diferença (p<0,05) em relação à motilidade, vigor e turbilhonamento espermático entre os grupos, porém não houve diferença das características morfológicas. Na análise proteômica foram identificadas 93 proteínas no plasma seminal. A maioria delas envolvidas no processo celular (36,22%), regulação biológica (35,20%) e interação celular (19,12%). Das proteínas identificadas 6 foram diferencialmente expressas entre o grupo A e B (ALBU, NPC2, Z13, SPAD1, CCL2, F1N1Z8), e 4 (Q4R0H2, SPAD1, NPC2 e Z13) foram diferencialmente expressas entre B e C. Em relação às funções moleculares das proteínas, as principais funções foram de ligação (49,50 %) e atividade catalítica (35,34%). Palavra-chave: Andrologia. Cruzamento. SêmenItem Interação de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis com células espermáticas bovina e a correlação com proteínas de membrana do complexo 85(Universidade Federal de Viçosa, 2019-02-15) Albuquerque, Jéssica Lobo; Moreira, Maria Aparecida Scatamburlo; http://lattes.cnpq.br/6330644367168913A bactéria Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) é o agente responsável pela doença de Johne ou paratuberculose caracterizada por uma enterite crônica, levando à diminuição da produção, descarte de animais, desordens reprodutivas e susceptibilidade a outras doenças, principalmente em ruminantes. Possui o complexo de antígenos 85, constituída por três proteínas 85A, 85B e 85C, presentes no envelope externo, responsável por ligar-se a fibronectina da célula hospedeira. MAP consegue sobreviver às baixas temperaturas da criopreservação, no entanto pouco se sabe da sua viabilidade e sua interação com os espermatozoides, de como esta bacteria pode alterar a viabilidade do material genético antes e pós- congelamento. Assim, este estudo propôs determinar características do espermatozoide bovino na presença de MAP e sua viabilidade pós congelamento bem como estudar esta interação. Foi utilizado um bovino apto para a reprodução para coleta de sêmen e foi inoculado concentrações de baixa e alta carga bacteriana de MAP, avaliando-se quanto a motilidade e vigor, potencial da atividade mitocondrial antes e pós congelamento, e interação de MAP com as células espermáticas através de microscopia de varredura. Além disso foi avaliado a viabilidade de diferentes concentrações de MAP pós congelamento. Foram produzidos anticorpos a partir de proteínas do complexo 85 de MAP (85A e 85B) e utilizados nestas análises. Foi possível determinar a viabilidade de MAP após a criopreservação em amostras de concentrações maiores, o que demonstra o potencial de transmissão deste patógeno através da inseminação artificial (IA). Observou-se que o sêmen bovino na presença de MAP apresenta diminuição na motilidade e vigor proporcional a concentração de MAP e que proteínas de membrana de MAP, 85A e 85B, podem estar relacionados a interação/adesão com as células espermáticas, que ocorre na cauda do espermatozoide principalmente na peça intermediaria.Item Exposição a metais afeta parâmetros espermáticos em ruminantes domésticos? Um estudo de meta-análise(Universidade Federal de Viçosa, 2021-02-26) Ribeiro, Iara Magalhães; Neves, Mariana Machado; http://lattes.cnpq.br/3022841569498685Durante a última década, os tóxicos ambientais foram sugeridos serem potenciais fatores de risco para a infertilidade masculina. Ao contrário dos poluentes orgânicos, os metais não são facilmente degradados e se acumulam ao longo da cadeia alimentar, tornando-se uma das principais causas da redução da qualidade seminal em animais. No entanto, ainda não está claro se os efeitos desses contaminantes são negativos, neutros ou positivos para as células espermáticas. Portanto, uma revisão meta-analítica foi conduzida para determinar se a exposição a doze metais afeta os parâmetros espermáticos de ruminantes domésticos. O modelo de efeitos aleatórios revelou que os metais provocaram um efeito forte e negativo na viabilidade espermática, um efeito moderado e negativo em parâmetros andrológicos e na motilidade espermática, e um efeito forte positivo na produção de metabólitos oxidativos. Por outro lado, a exposição aos metais não afetou a defesa antioxidante, níveis hormonais, concentração espermática e a fertilidade dos espermatozoides. Em geral, os mecanismos toxicológicos dos metais estão relacionados à sua capacidade de gerar estresse oxidativo, ligar-se a grupos tiol de proteínas e mimetizar minerais essenciais. O modelo de efeitos mistos mostrou que todos os moderadores metodológicos, como o tipo de metal, concentração de metal administrada, via de exposição, frequência de dosagem e modelo animal influenciaram de forma diferente os parâmetros espermáticos, considerando a variabilidade dos modelos. Em conclusão, nossos achados indicam que a exposição aos metais causa efeitos nocivos ao sistema reprodutor masculino ao inibir os parâmetros funcionais dos espermatozoides, importantes para uma fertilização bem-sucedida. Além disso, devido à característica ubíqua dos metais e sua alta toxicidade, esta revisão sugere que tais elementos podem contribuir para causas subjacentes de infertilidade. Além disso, este estudo pode direcionar pesquisas futuras sobre as consequências da contaminação por metais na fertilização e no desenvolvimento do embrião pré-implantação. Palavras-chave: Espermatozoides. Metais pesados. Microminerais. Sêmen. Toxicologia.Item Desenvolvimento de touros da raça Nelore com elevado (+34 cm) ou reduzido (-30 cm) perímetro escrotal(Universidade Federal de Viçosa, 2018-12-17) Oliveira, Giselle Dias; Benjamin, Laércio dos Anjos; http://lattes.cnpq.br/1288076073044213O objetivo deste estudo foi descrever a curva de crescimento do volume testicular (VT) em função da idade e avaliar as características espermáticas de touros Nelore com maior e menor perímetro escrotal (PE). Para tanto, utilizou-se um conjunto de dados de exames andrológicos de touros Nelore criados em condições de pastejo, nascidos entre1996 e 2008. Os animais foram mantidos em duas fazendas, uma localizada em Magda/SP e a outra em Dois Irmãos do Buriti/MS. A biometria testicular foi obtida anualmente no momento do exame andrológico, que começa aos 18 meses de idade. Dados do PE, VT e características espermáticas (motilidade espermática e morfologia espermática) foram obtidos. Um total de 443 avaliações de 96 touros foram obtidas. Os touros foram classificados de acordo com PE, medidos aos 18-21 meses de idade, em dois grupos, representando dois extremos do PE: maior, PE> 34 cm (209 avaliações de 46 touros); e menor, PE<30 cm (234 avaliações de 50 touros). As curvas de crescimento do VT foram descritas por meio do modelo logístico usando o MODEL procedure no SAS. A autocorrelação residual foi verificada pelo teste de Durbin-Watson e, quando significativa (P<0,05), foi modelada com erros autorregressivos de primeira ordem (RA (1)). As características espermáticas no período de 18-21 meses e aos 37-48 meses de idade foram analisadas por análise de variância. O ponto de inflexão estimado foi de 507,8 cm 3 aos 419,6 dias para o grupo com o maior PE e 470,8 cm 3 aos 808,4 dias de idade para o grupo com o menor PE. Em relação ao exame andrológico, os touros do grupo com maior PE apresentaram melhores parâmetros espermáticos (P<0,05) em relação aos de menor PE aos 18-21 meses de idade. No entanto, nenhuma diferença (P>0,05) entre os grupos aos 37-48 meses de idade foi encontrada. Diferenças no crescimento do VT e nas características espermáticas entre os grupos avaliados neste estudo provavelmente estão relacionadas à precocidade sexual.Item Seleção espermática em amostras ejaculadas e epididimárias de cães domésticos e efeito da adição de fluido prostático(Universidade Federal de Viçosa, 2019-02-28) Carazo Bustamante, Lina Rosa; Paula, Tarcízio Antônio Rego de; http://lattes.cnpq.br/3210767274928602Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a eficiência da seleção espermática em amostras de ejaculados e epididimárias de cães domésticos, assim como verificar o efeito da adição de fluido prostático em amostras epididimárias, previamente ao resfriamento. Para tal, foram realizados três experimentos. No experimento 1, objetivou-se testar a eficiência da técnica de seleção espermática swim- up modificado com adição de um coloide comercial (Androcoll-C TM ) (SU-AC), quando realizada em diferentes formatos e grau de inclinação do tubo de migração, na tentativa de aumentar as taxas de recuperação e a qualidade espermática em sêmen canino fresco. Quinze amostras seminais obtidas de três cães foram submetidas aos tratamentos a seguir: T0-Controle: sêmen diluído em diluente comercial; T1: SU-AC em tubo Falcon, em posição vertical; T2: SU-AC em tubo de base arredondada, em posição vertical e T3: SU-AC em tubo de base arredondada, posicionado a 45°; após 3 minutos o T2 e T3 foram avaliados e outra alíquota de meio diluente foi reposta e avaliada 30 minutos depois, constituindo os tratamentos T2a e T3a, respectivamente. Não houve diferenças nas taxas de recuperação espermática, defeitos espermáticos totais, integridade de membrana plasmática e integridade de membrana acrossomal entre os tratamentos (P>0,05); houve uma diminuição dos parâmetros cinéticos, independente do formato do tubo de migração e sua inclinação em relação ao T0 (P<0,05); em posição vertical o formato do tubo não mostrou diferenças nas avaliações seminais (P>0,05); houve diminuição das patologias espermáticas quando usado o tubo de base arredondada inclinado, verificado na avaliação de 30 min após a renovação do meio. Conclui-se que não há melhora dos parâmetros cinéticos avaliados após a técnica de SU-AC; as taxas de recuperação espermática e a integridade celular, não são influenciadas pelo uso de tubos de migração de diferentes formatos e inclinação durante a realização da técnica de SU-AC; o SU-AC permite a obtenção de um número menor de patologias espermáticas, quando realizado em tubo de migração de base arredondada e inclinado com renovação do meio no tubo de migração, com recuperação e avaliação aos 30’. No experimento 2, objetivou-se verificar o efeito da adição de 10 % de fluido prostático (FP) canino, em amostras espermáticas epididimárias (AEEs) prévio ao resfriamento por 24 horas entre 4 - 6 °C, obtidas por meio da técnica de fluxo retrógrado (FR) com uso de meio de manutenção comercial (MM) e soro fisiológico (SF). Foram obtidas AEEs a partir de oito pares de conjuntos testículo-epidídimo, pela técnica de FR com perfusão de MM ou SF com adição de ar. As AEEs foram padronizadas para 50 x 10 6 de espermatozoides / mL em MM (T1); as amostras coletadas com SF, foram subdivididas em três alíquotas, sendo uma ajustada para 50 x 10 6 de espermatozoides / mL em SF (T2); outra alíquota foi ajustada para 50 x 10 6 de espermatozoides / mL com MM acrescido de 10 % de SF (T3); a terceira alíquota foi ajustada para 50 x 10 6 de espermatozoides / mL com MM acrescido de 10 % de FP (T4). Durante 24 horas os tratamentos foram resfriados entre 4 – 6 °C e posteriormente avaliados quanto a motilidade espermática (MOT), vigor espermático (VIG), morfologia espermática, integridade funcional da membrana plasmática e teste de termorresistência (TTR). Não houve efeito (P>0,05) do MM ou do SF, na quantidade e qualidade dos espermatozoides recém coletados, porém, a preservação das amostras em presença de MM durante o resfriamento, influenciou favoravelmente na MOT, VIG e longevidade das amostras (P<0,05). A integridade funcional da membrana plasmática e as patologias espermáticas não mostraram diferenças (P>0,05) após resfriamento. Ao avaliar isoladamente a influência da adição 10 % de FP ao MM, não foram observadas diferenças nos parâmetros avaliados (P>0,05). Conclui-se que a técnica de fluxo retrógrado para recuperação de espermatozoides caninos pode ser realizada mediante perfusão de SF ou MM com adição de ar, sem alterar a qualidade imediata da amostra; para obtenção de características espermáticas desejáveis e duradouras, as amostras armazenadas em MM oferecem melhores resultados após 24 horas de resfriamento; o MM com acréscimo de 10 % de fluido prostático adicionado em AEEs submetidas à refrigeração por 24 horas entre 4 - 6 °C não melhora significativamente os parâmetros qualitativos cinéticos, de integridade de membrana plasmática e do percentual de células normais. Já no experimento 3, objetivou-se avaliar a qualidade de AEEs coletadas por FR, submetidas ao processo de seleção em camada única de coloide (SLC) e à adição de 10 % de FP canino, prévio ao resfriamento por até 72 horas entre 4 – 6 °C. Oito pares de conjuntos testículo- epidídimo foram refrigerados durante 24 horas entre 4 – 6 °C (resfriamento in situ). As AEEs de ambos os epidídimos foram obtidas por FR usando para a perfusão MM e ar, sendo as AEEs associadas posteriormente em uma única amostra. Após avaliações espermáticas, as AEEs de cada animal foram subdivididas e submetidas a dois grupos de centrifugação: G1 – AEEs submetidas à SLC, com o coloide Androcoll-C TM (AC), e G2 – AEEs centrifugada com SF; as amostras obtidas em cada grupo foram ressuspendidas com ou sem FP, para preparação dos tratamentos: T1, AEE centrifugada com AC ressuspendida em MM acrescido de 10 % de FP; T2, AEE centrifugada com AC ressuspendida em MM acrescido de 10 % de SF; T3, AEE centrifugada com SF ressuspendida em MM acrescido de 10 % de FP e T4, AEE centrifugada com SF ressuspendida em MM acrescido de 10 % de SF. Após novas avaliações espermáticas os tratamentos foram refrigerados por até 72 horas entre 4 - 6 °C (resfriamento ex situ). Após 24 horas de resfriamento ex situ e após 48 horas adicionais (ou seja, 72 horas desde a coleta das AEEs), foram realizadas avaliações espermáticas nos diferentes tratamentos. As taxas de recuperação espermática foram de 18 e 38 % (para SLC e centrifugação convencional, respectivamente). Não houve diferenças (P>0,05) entre os parâmetros espermáticos antes e após centrifugações. Após 24 horas de resfriamento ex situ foi observada maior MOT no T4 em relação T2, e maior VIG no T3 em relação ao T2 (P<0,05). Após o TTR o T3 e T4 apresentaram performance superior daqueles submetidos à SLC. Após 72 horas de resfriamento ex situ o VIG no T3 foi superior comparado ao T1 e T2 (P<0,05). Os defeitos maiores, menores e totais foram menores em ao menos um dos tratamentos submetidos a SLC (P<0,05). Diante dos resultados obtidos, conclui-se que a perfusão por FR com adição de ar permite a obtenção de AEEs com características espermáticas aceitáveis; a taxa de recuperação é maior nas AEEs centrifugadas com SF do que a obtida após SLC, porém, a SLC previne o aumento de patologias espermáticas após 72 horas de resfriamento; já o acréscimo de 10 % de FP no MM não tem efeito sobre as AEEs nas condições amostradas; as AEEs resfriadas por 24 horas in situ e por até 72 horas ex situ entre 4 - 6 ° C apresentam parâmetros espermáticos compatíveis para utilização em programas de reprodução, com uso potencial em carnívoros silvestres.Item Efeito da estação do ano do clima tropical sobre os parâmetros seminais e hemodinâmico vascular testicular de carneiros da raça Santa Inês(Universidade Federal de Viçosa, 2018-07-27) Rodrigues, Juliana Nascimento Duarte; Guimarães, José Domingos; http://lattes.cnpq.br/6039440427012004Avaliou-se o efeito da estação do ano sobre os parâmetros seminais e dopplervelocimétricos da artéria testicular de ovinos adultos criados em clima tropical úmido. O estudo foi dividido em P1 – inverno amazônico e P2 – verão amazônico. As variáveis fisiológicas, ultrassonográficas e ambientais foram coletadas em três horários do dia durante seis semanas por período, enquanto o sêmen foi coletado duas vezes por semana durante todo o ano. O experimento foi realizado em Belém/ Pará. Foram utilizados seis carneiros adultos da raça Santa Inês. Para o registro dos dados climáticos foi utilizada uma estação meteorológica para obtenção da temperatura de bulbo seco (Tbs) e umidade relativa do ar (URA), e estes dados foram utilizados para determinação do índice de temperatura e umidade (ITU). Foram avaliados os seguintes parâmetros fisiológicos: frequência cardíaca (FC), frequência respiratória (FR), temperatura retal (TR), temperatura escrotal superficial (TES), distensão escrotal (DE) esquerda (DEE) e direita (DED) e taxa de sudação escrotal (TSE) esquerda (TSEE) e direita (TSED). O sêmen foi coletado pelo método de vagina artificial e os ejaculados foram avaliados quanto ao volume, turbilhonamento, motilidade espermática progressiva, vigor espermático, concentração espermática e teste supravital. Os parâmetros dopplervelocimétricos avaliados foram os índices de pulsatilidade (IP) e de resistividade (IR), obtidos pelo Doppler espectral. O verão foi o período do ano com maiores valores médios de ITU e Tbs. Houve correlação moderada entre TSEE e TSED com URA (P<0,05). Os parâmetros dopplervelocimétricos apresentaram correlação moderada com Tbs e URA (P<0,05). Os valores médios de IP e IR foram maiores no verão (P<0,05), não sendo observado diferença entre os testículos. Nenhum parâmetro seminal estudado apresentou diferença entre os períodos (P>0,05). Nenhuma das variáveis fisiológicas, ambientais ou dopplervelocimétricas estudadas mantiveram o mesmo comportamento de correlações com parâmetros seminais nos dois períodos estacionais. Assim, conclui-se que as variações ambientais nas estações de inverno e verão amazônicos, não afetam os padrões seminais de carneiros adultos da raça Santa Inês. No entanto, a hemodinâmica testicular, sofreu influencia do período do ano, tendo valores de IP e IR superiores no verão, porém sem comprometer a termorregulação testicular.