Bioquímica Aplicada
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Item Identificação de lipocalinas com domínio de ligação a histamina e serotonina e validação de genes de referência em transcriptomas de glândula salivar, intestino e ovário do carrapato Amblyomma sculptum(Universidade Federal de Viçosa, 2015-06-26) Soares, Adriano Carlos; Siqueira, Cláudio Lisias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/2818008516268315As lipocalinas constituem uma família de pequenas proteínas extracelulares com cerca de 200 resíduos de aminoácidos e massa molecular de 20 Kda possuem forte divergência em suas sequências de aminoácidos mas mantêm a sua estrutura tridimensional estritamente conservada. Sua diversidade funcional e reconhecimento molecular, contribuem para a utilização dessas proteínas como base para o desenvolvimento de alguns biofármacos. Os genes constitutivos participam de diversas funções do metabolismo celular e são utilizados como controle endógeno sendo fundamentais para validação dos resultados no estudo da expressão utilizando real time RTq-PCR. Em relação a esses genes, ainda não foram publicados trabalhos que identifiquem e validem genes constitutivos como genes de referência para a espécie Amblyomma sculptum (Complexo Amblyomma cajennense). Atualmente, transcriptomas de órgãos e tecidos de carrapatos do gênero Amblyomma têm sido publicados identificando uma variedade de transcritos de lipocalinas com domínio de ligação a histamina e serotonina (SHBP). Neste trabalho, realizamos por predição in silico a identificação de nove lipocalinas com domínio de ligação a serotonina e histamina estabelecendo possíveis relações filogenéticas funcionais de transcritos de lipocalinas identificadas no transcriptoma de glândula salivar do A. sculptum. Realizamos o desenho e a validação de 3 primers de genes de lipocalinas identificadas, lip4, lip7 e lip24. Foram analisados e validados 3 primers de genes constitutivos (g6pdh, 3ohcoadh e gapdh) candidatos potenciais a genes de referência em glândulas salivares, intestinos e ovários do carrapato A. sculptum em situação de não infecção/infecção com R. amblyommii. Foram validados 3 modelos estruturais correspondentes às proteínas lipocalina 4, lipocalina 7 e lipocalina 24. E ainda, realizou-se a análise da expressão diferencial de lipocalinas e potenciais genes de referência em glândula salivar, intestino e ovário de A. sculptum. Os dados obtidos na análise de expressão gênica por real time RT-qPCR suportam a hipótese de que os três genes de lipocalinas interferem na interação microrganismo-vetor sendo necessários trabalhos adicionais para verificação da validade desta hipótese, uma vez que dentre as 121 lipocalinas preditas no transcriptoma de glândulas salivares, somente nove apresentam domínios SHBP sugerindo um papel especial na função destas nos tecidos estudados.Item Bioprospecção de produtos naturais antitumorais em coleção de extratos de espécies arbóreas da Mata Atlântica(Universidade Federal de Viçosa, 2015-07-08) Almeida, Alisson Andrade; Leite, João Paulo Viana; http://lattes.cnpq.br/1803932328458637O câncer é a segunda enfermidade com maior letalidade em todo o mundo. A descoberta de novas drogas anticâncer de origem vegetal tem incentivado a avaliação da atividade antiproliferativa de extratos vegetais. A Mata Atlântica possui cerca de 20.000 espécies vegetais, muitas delas ainda desconhecida pela ciência. O objetivo desta pesquisa foi construir uma coleção de extratos (BIOPROS Extracts Library) oriundos de árvores nativas do bioma Mata Atlântica e avaliar a atividade anticâncer in vitro destes extratos frente a 3 linhagens de células tumorais, MCF-7 (mama), B16-F10 (melanoma murino) e HepG2 (fígado) pelo ensaio do redução do MTT. Os extratos foram obtidos a partir do material vegetal pulverizada pelo processo de maceração com solvente orgânico e sequencialmente com solvente aquoso. Em seguida, os solventes foram removidos obtendo-se os extratos secos, que foram acondicionados em frascos de vidro devidamente identificados e armazenados à temperatura de -20 oC. No ensaio biológico, todos os extratos foram testados inicialmente na concentração de 100 μg/mL. Os extratos que inibiram o crescimento celular acima de 75% (GI 75 ) foram testados novamente em diferentes concentrações dentro da faixa (3,125 – 200 μg/mL) para calcular o IC 50 . A seletividade destes extratos foi avaliada em células da linhagem VERO. A BIOPROS Extracts Library tem 196 extratos de 49 espécies acessadas. Os extratos orgânicos de folhas (EOF) das espécies Casearia sylvestris Sw. e Aureliana velutina Sendtn. inibiram o crescimento celular da linhagem B16-F10 (IC 50 = 3,81 μg/mL e 6,22 μg/mL, respectivamente). Já o EOF de Acnistus arborescens (L.) Schltdl. mostrou atividade citotóxica contra HepG2 (IC 50 = 5,01 μg/mL). Esses extratos foram citotóxicos para as células VERO apenas em altas concentrações, sugerindo seletividade. Estes resultados sugerem que estas espécies podem ser fontes de substâncias com potente atividade antitumoral.Item Avaliação do efeito cicatrizante de Inga subnuda e Pseudopiptadenia contorta em feridas cirúrgicas em coelhos(Universidade Federal de Viçosa, 2015-07-10) Vieira, Geisla Teles; Oliveira, Tânia Toledo de; http://lattes.cnpq.br/6343243219299412Cicatrização de ferida é um processo sistêmico e dinâmico que envolve as etapas de inflamação, proliferação e remodelação e, tem por objetivo restaurar a continuidade do tecido. Embora a reparação tecidual seja um processo sistêmico, é necessário favorecer condições locais por meio de terapia tópica adequada para viabilizar o processo fisiológico. Na medicina popular, tinturas das cascas das espécies arbóreas de Inga subnuda (ingá) e Pseudopiptadenia contorta (angico) são utilizadas no tratamento de feridas cutâneas. Tendo em vista esse uso popular, este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito destas plantas na cicatrização de feridas cirúrgicas induzidas em coelhos. Foram preparados extratos hidroalcoólicos das cascas de ingá e angico por maceração, e realizadas análises de prospecção fitoquímica e atividade antioxidante pelo método de DPPH. Preparados, os extratos de ingá e angico foram adicionados a Creme Lanette 24% até atingir as concentrações de 1% e 5%. Foram utilizados 36 coelhos machos, da raça Albino Nova Zelândia, 60 dias de vida e peso médio de 2,8 Kg (CEUA/UFV, no064/2012). Duas feridas cirúrgicas de dimensão 1,5 x 1,5 cm foram produzidas na região dorsal-torácica dos animais e tratadas durante 14 dias. A primeira foi confeccionada com lâmina de bisturi e denominada Ferida e a segunda com bisturi elétrico, denominada Queimadura. Os animais, divididos em grupos de seis animais, foram tratados com solução salina; extrato de ingá 1%; extrato de ingá 5%, extrato de angico 1%; extrato de angico 5% e pomada Fitoscar®. Índice de contração da ferida (IC) foi medido no 7o, 10 e 14o dia pós-operatório. Após o 14o dia de tratamento os animais foram eutanasiados e amostras de sangue coletadas para análise bioquímica e hematológica. Em seguida, amostras das feridas e queimaduras foram extraídas cirurgicamente, processadas rotineiramente e coradas com hematoxilina-eosina e picrosirrius. O parâmetro estereológico de densidade volumétrica foi calculado para contagem de fibroblasto, vaso sanguíneo, células inflamatórias, e índice de maturação do colágeno (IMaC). Os resultados foram analisados pela ANOVA, seguido pelo teste de Tukey. Resultados da prospecção fitoquímica e de DPPH mostram presença de flavonoides, taninos e saponinas, e, atividade antioxidante dos extratos de ingá e angico. Os resultados hematológicos e bioquímicos mostram que os animais tratados com os extratos vegetais não apresentaram infecção sistêmica e nem alterações hepáticas e renais. Os parâmetros estereológicos indicam que os extratos de ingá e angico contribuíram para a promoção da fibroplasia, angiogênese e maturação do colágeno nas feridas cirúrgicas. Pelo índice de contração, conclui-se que os extratos de ingá e angico apresentaram efeito cicatrizante tanto na ferida quanto na queimadura, sendo mais efetivos na fase proliferativa. Este estudo forneceu evidências do efeito cicatrizante dos extratos de ingá e angico e do potencial uso como medicamento fitoterápico. Porém, mais estudos são necessários para elucidar o mecanismo de ação destes extratos no processo terapêutico.Item Determinação da atividade citotóxica do extrato vegetal de Croton urucurana Baill em linhagens de células tumorais(Universidade Federal de Viçosa, 2015-07-15) Monteiro, Luana Pereira; Oliveira, Tânia Toledo de; http://lattes.cnpq.br/0459373882356070O câncer é uma doença caracterizada pelo aumento descontrolado da proliferação celular. Em geral ocorrem paralelamente ao aumento do crescimento e perda da diferenciação celular. Assim as células cancerígenas perdem suas características originais de diferenciação e se tornam atípicas. As leucemias são neoplasias malignas que acometem as células do sangue e tem origem na medula óssea. São cânceres de grande incidência e de difícil tratamento, havendo, portanto, uma constante procura por terapias mais eficientes. O presente trabalho investigou a ação citotóxica do extrato hidroalcóolico de Croton urucurana em células leucêmicas humanas U937 e THP-1. As linhagens de células U937, THP-1 foram plaqueadas em volume de 100 μL/poço (1x10 6 cels/mL) em placas de 96 poços, tratadas com extrato nas concentrações finais de 50 μM, 100 μM, 200 μM e 400 μM e 800 μM para os testes de viabilidade celular com MTT (-3-(4,5-dimetil-2-tiazol) 2,5-difenil-2-H-brometo de tetrazom). Após 48h a viabilidade foi avaliada pelo MTT e o sobrenadante utilizado para dosagem da enzima Lactato Desidrogenase (LDH). Microscopia de fluorescência foi usada para avaliar a apoptose. O extrato foi capaz de induzir apoptose em ambas as linhagens de células testadas nas concentrações 400 e 800 μg/mL (p≤0,05). O aumento percentual da morte celular por apoptose foi associado a alterações no potencial de membrana mitocondrial sugerindo o envolvimento da via intrínseca de ativação da apoptose.Item Insights into regulatory mechanisms of the NIK-mediated antiviral defense: new components and the molecular bases of the defense(Universidade Federal de Viçosa, 2015-07-20) Machado, João Paulo Batista; Fontes, Elizabeth Pacheco Batista; http://lattes.cnpq.br/2180362685478284The NSP-interacting kinase (NIK) protein, identified through interaction with the geminivirus nuclear shuttle protein (NSP), displays structural, biochemical and biological characteristics consistent with an authentic receptor kinase involved in defense response against geminivirus infection. The activation of this immune receptor leads to phosphorilation of the ribosomal protein L10 (RPL10) and in the subsequent nuclear relocation of this ribosomal protein. Apart from the identification of RPL10 as a downtream component of the defense signaling, others molecular connections that link the NIK activation to the antiviral response, as well as the nature of this defense mechanism, remain to be determined. In this investigation, a new downstream effector component of the NIK-mediated signaling pathway, a transcription fator designated LIMYB (L10-Interacting Myb domain-containing protein), was identified by its capacity to interact with RPL10 through yeast two-hybrid system. Co-immunoprecipitation and bimolecular fluorescence complementation assays showed that RPL10-LIMYB complex occurs stably in the plant, specifically in the nucleus of plant cells. Functional characterization studies showed that LIMYB acts as an authentic transcription fator, binding to and inhibiting expression of ribosomal protein promoters. These results suggest that NIK-mediated antiviral defense mechanism is based on host translation suppression. To examine this hypothesis, the translation levels in tomato lines overexpressing the constitutively active mutant of AtNIK1 (T474D) was initially assessed. The results demonstrated that transgenic lines had lower accumulation of newly synthesized proteins when comparated to WT plants. Subsequently, T474D-overexpressing tomato lines were infected with two highly divergent begomovirus species, ToYSV (Tomato yellow spot virus) and ToSRV (Tomato severe rugose virus). The transgenic lines either displayed attenuated symptons or were asymptomatic. These findings were associated with delay in viral infections, lower infection rates and reduction in viral DNA accumulation in systemically infected leaves. Despite the tolerance phenotype and lower rates of protein synthesis displayed by T474D-overexpressing lines, no difference in the development, physiological performance and horticultural traits was observed between T474D-overexpressing and WT or AtNIK1-overexpressing lines. Finally, whether the reduction in overall levels of host translation caused by overexpression of T474D could affect the viral proteins synthesis was examined. For this purpose, polysomal fractions were isolated from WT and T474D lines infected with ToYSV and examined for the presence of viral mRNA. The results showed lower association of mRNA encoding viral capsid protein at the polysomes fractions of T474D lines when comparated to that of untransformed lines. Collectively, these results indicate that begomovirus are not able to maintain high levels of viral mRNA translation into T474D-overexpressing lines, indicating that the global suppression of the protein synthesis identified in these genotypes may efficiently protect cells against infection by these virus. However, studies of global changes in gene expression of nik1 null alleles revealed that loss of NIK1 function promoted induction of components of the main brassinosteroid signaling hub and of hubs involved in salicylic acid signaling and antibacterial immunity. These results suggest that NIK1 may function as a negative regulator in development and immunity signaling pathways, despite its antiviral property.Item Resposta de plantas de Coffea arabica (Rubiaceae) às injúrias de Leucoptera coffeella (Lepidoptera: Lyonetiidae) através das vias das lipoxigenases e atividade de polifenoloxidases(Universidade Federal de Viçosa, 2015-07-24) Meriño Cabrera, Yaremis Beatriz; Oliveira, Maria Goreti de AlmeidaA defesa das plantas contra os insetos são processos complexos que envolvem a ativação ou repressão de diferentes vias de sinalização, permitindo assim a sobre- expressão de genes alvo com propriedades de defesa. O objetivo deste estudo foi determinar a relação entre a resposta defensiva de Coffea arabica mediante as vias das lipoxigenases e polifenoloxidases e o processo de herbivoria de Leucoptera coffeella. Foi realizado um experimento com dois tratamentos: 1) plantas de café infestadas e 2) plantas não infestadas com bicho–mineiro. Cada tratamento foi composto por 10 repetições e avaliou-se a atividade das lipoxigenases e polifenoloxidases; e a produção de inibidores de proteases no cafeeiro. Em L. coffeella a atividade de tripsina-like foi verificada usando os substratos L-BApNA e L-TAME e a quimotripsina-like foi determinada com BTpNA e ATEE. As cisteíno-proteases deste inseto foi obtida utilizando L-BApNA e proteases totais usando azocaseína como substrato. Todas as atividades enzimáticas foram determinadas por espectrofotometria. Houve um aumento nas atividades enzimáticas das plantas infestadas em relação as não infestadas nas vias estudas (lipoxigenase: F= 29,4; p= 0,00022 e polifenoloxidases: F= 8,41; p= 0,00022) e na produção de inibidores de proteases (F= 9,64; p= 0,0022). A partir das análises de correlação de Pearson, observou-se que a quimotripsina-like e os inibidores de proteases apresentaram uma relação inversa (r= -0,82; p= 0,03). Já a tripsina-like teve correlação direta com as atividades das lipoxigenases (r= 0,6; p= 0,03) e polifenoloxidases (r= 0,82; p= 0,03). Diante do exposto, nas larvas de L. coffeella existe atividade tanto serino como cisteíno-proteases, mas a atividade serino-proteases é a mais expressada no intestino destes insetos. A produção de inibidores de proteases e as atividades de lipoxigenases e polifenoloxidases nas plantas de C. arabica são aumentadas na presença de L. coffeella, o que indica a possível participação destas vias no processo de defesa da planta. Palavras chaves: inibidores, tripsina, bicho-mineiro.Item Desenvolvimento e validação de métodos analíticos para quantificação de marcadores químicos de extratos de Strychnos pseudoquina A.St.-Hil. (Loganiaceae)(Universidade Federal de Viçosa, 2015-07-28) Farias, Letícia Monteiro; Leite, João Paulo Viana; http://lattes.cnpq.br/2142470447578506O Brasil é um país de grande diversidade vegetal sendo detentor de aproximadamente um terço de toda a flora mundial, no entanto, o potencial farmacológico de toda essa biodiversidade ainda é pouco explorado por pesquisadores. O mercado de fitoterápicos tem apresentado crescimento, aumentando o seu acesso à população. Consequentemente, a padronização de fitomedicamentos ganhou importância a fim de garantir a qualidade e os efeitos terapêuticos frente aos seus consumidores. A doença de Chagas é uma doença negligenciada causada por uma infecção parasitária amplamente distribuída em toda a América Latina. Atualmente, duas drogas são utilizadas para o tratamento dessa doença, porém ambas são ineficazes para o tratamento da mesma, portanto, pesquisas visando o desenvolvimento de novos fármacos se fazem necessárias. Visando contribuir para o avanço do potencial farmacológico das espécies vegetais brasileiras, o presente trabalho teve por objetivo, isolamento fitoquímico, desenvolvimento e validação de metodologias analíticas para a quantificação de marcadores químicos e avaliação tripanocida de extratos de Strychnos pseudoquina A.St.-Hil, uma planta medicinal endêmica do cerrado brasileiro, conhecida popularmente como quina-do-cerrado e com reconhecida atividade leishmanicida. Foram isolados os flavonoides quercetina 3-O-metil-éter (SPEA 1) e strychnobiflavona (SPEA 2) de extratos da entrecasca da espécie. Os teores de flavonoides totais expressos em rutina, determinados por espectrofotometria no UV/Vis após reação com cloreto de alumínio, na droga vegetal foi de 10,66 mg/g para o acesso de Jaboticatubas. O método foi validado e apresentou faixa de linearidade (r 2 > 0,99), seletividade, precisão (DPR < 0,26% para SPEA 1 e 0,21% para SPEA 2), exatidão (recuperação entre 95,84% a 100% para SPEA 1 e 94,01% a 98,22% para SPEA 2). Os teores de SPEA 1 e SPEA 2 determinados por HPLC-DAD foi de 0,27% e 0,37% respectivamente. Os métodos desenvolvidos quando aplicados na análise de extratos em acetato de etila provenientes de quatro acessos distintos de S. pseudoquina, bem como em três amostras comerciais, demonstrou que existe variação nos teores dos marcadores, bem como na concentração de flavonoides totais. Os extratos S. pseudoquina testados para atividade tripanocida não apresentaram resultados satisfatórios contra formas epimastigota de T. cruzi. Assim, o presente trabalho resultou na obtenção de métodos para a quantificação marcadores e flavonoides em S. pseudoquina, servindo como subsídio para o desenvolvimento o controle de qualidade de um fitoterápico com ação leishmanicida.Item Efeito do flavonóide naringina associado à fármaco sinvastatina no metabolismo lipídico de coelhos hipercolesterolêmicos(Universidade Federal de Viçosa, 2015-07-30) Soares Júnior, Duílio Teixeiras; Oliveira, Tânia Toledo de; http://lattes.cnpq.br/7154004679156975A Hiperlipidemia é considerada uma dos mais importantes fatores no desenvolvimento da doença arterial coronariana, principal causa de morte de indivíduos adultos no mundo. A dislipidemia é um quadro clínico caracterizado por concentrações anormais de lipídios ou lipoproteínas no sangue, que é determinada por fatores genéticos e ambientais. A Sinvastatina é um fármaco com potencial ação hipocolesterolêmica. Estudos demonstraram que a Naringina possui ação antiinflamatória, impede a oxidação da LDL-c e previne formação de placa aterosclerótica. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do flavonóide Naringina associado ao fármaco Sinvastatina, em diferentes concentrações, no metabolismo lipídico de coelhos hipercolesterolêmicos. A hiperlipidemia nos coelhos foi alcançada suplementando a dieta com 20 ml diários de gordura animal via oral. Os níveis de colesterol e triacilglicerol aumentaram consideravelmente quando comparados ao grupo que recebeu apenas ração, 86,52% e 83,96% respectivamente. Os tratamentos com naringina 25mg associada a sinvastatina 1,2 mg foi a formulação que apresentou os melhores resultados, diminuindo em 60,08% os níveis de colesterol e 65,35% os níveis de triacilglicerol com 28 dias de tratamento. Contudo, apenas no grupo dos animais tratados com 5 mg de Naringina e 0,3 mg de sinvastatina tiveram os valores de Hdl-c aumentados. Os resultados de glicose, ureia e creatinina sofreram poucas variações ao longo do experimento. Já os valores de AST e ALT tiveram uma redução de seus níveis plasmáticos em todos os grupos. De maneira geral os compostos associados de naringina e sinvastatina apresentam ação farmacológicasinérgica no metabolismo lipídico de coelhos hipercolesterolêmicos, contudo não se pode afirmar que os tratamentos utilizados e resultados obtidos de ureia, creatinina, AST e ALT foram capazes de causar nefrotoxicidade e ou hepatotoxicidade nos animais. Testes para avaliação toxicológicas e avaliação de cortes histológicos seriam necessários para avaliar qualquer dano hepático e ou renal nos animais em teste.Item Análise proteômica comparativa da saliva de Rhodnius prolixus, Triatoma lecticularia e Panstrongylus herreri(Universidade Federal de Viçosa, 2015-09-24) Montandon, Carlos Emmanuel; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/7022699709229549Triatomíneos são artrópodes hematófagos transmissores do Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli. É sabido que o comportamento alimentar e a transmissão de patógenos por estes vetores variam entre as diferentes espécies e são dependentes, direta ou indiretamente, de moléculas bioativas da saliva que auxiliam na interação vetor-parasito-hospedeiro. Neste sentido, caracterizamos e comparamos o repertório sialoproteômico de três importantes espécies dos principais gêneros de triatomíneos das Américas: Rhodnius prolixus, Triatoma lecticularia e Panstrongylus herreri, identificando 221 proteínas, sendo 69 de R. prolixus, 100 de T. lecticularia e 52 de P. herreri. Dentre os principais achados, encontramos a alta prevalência de nitroforinas em R. prolixus (68%) e de lipocalinas em T. lecticularia (79%) e P. herreri (49%). Neste contexto, as proteínas mais significativas por spot de R. prolixus, T. lecticularia e P. herreri mais abundantes, apresentando expressiva diferença entre as outras, foram Nitrophorin-4 (28,7%), Salivary lipocalin 5 (65,2%) e Putative triabin (20,5%), respectivamente. Outro achado significativo foi a única molécula presenta nas três espécies estudadas, a proteína não categorizada T1HT34, a qual atuaria como elo proteico entre elas, identificando-se como paráloga da Putative fry-like conserved. Os dados encontrados pela caracterização pelo Gene Ontology, vieram a corroborar achados anteriores, evidenciando-se todas as funções identificadas como beneficiadas pelo repasto sanguíneo dos triatomíneos.Item Impacto do estresse hídrico e biótico (Anticarsia gemmatalis Hübner, 1818) sobre o mecanismo de defesa da soja(Universidade Federal de Viçosa, 2015-11-26) Faustino, Verônica Aparecida; Oliveira, Maria Goreti de Almeida; http://lattes.cnpq.br/4347752666481421O déficit hídrico é um dos principais estresses abiótico capaz de gerar dano para o crescimento e desenvolvimento da planta de soja, principalmente no período de floração e enchimento dos grãos. Além disso, a lagarta-da-soja (Anticarsia gemmatalis), uma das principais pragas desfolhadora da cultura, causa perdas significativas na lavoura. O objetivo deste trabalho foi avaliar o impacto do estresse hídrico no mecanismo de defesa da soja e nos parâmetros bioquímicos da lagarta A. gemmatalis. O experimento foi realizado com a cultivar UFV-16, submetida ou não ao estresse hídrico e à injúria pela lagarta; cultivar UFV-16 submetida ou não ao estresse hídrico sem a injúria pela lagarta, e, cultivar UFV-16 irrigada e reirrigada, submetidas à injúria pela lagarta. Os tratamentos foram compostos por 5 repetições. Avaliou-se a atividade de lipoxigenase e síntese de inibidores de proteases nas folhas de soja. No intestino da lagarta avaliou-se a atividade das proteases totais, da tripsina-like amidásica e esterásica e a concentração de proteína total. A atividade de lipoxigenases nas folhas de soja sob estresse hídrico crescente, com (CL) e sem (SL) a injúria pela lagarta, não apresentou diferença significativa entre os diferentes estresses hídricos (P>0,05). Entretanto, os inibidores de proteases nas plantas de soja em ambos os tratamentos CL e SL, aumentaram até o estresse hídrico ψ am= -1,0 MPa e no ψ am= -1,6 MPa os valores diminuíram. No intestino da lagarta, a atividade de proteases totais foi significativamente menor nas plantas do ψ am= -1,6 MPa. Mas, as atividades da tripsina-like amidásica e esterásica foram decrescentes no intestino das lagartas que se alimentaram das folhas nos três potenciais hídricos: ψ am= -0,6 MPa; ψ am= -1,0 MPa e ψ am= -1,6 MPa. Para a soja irrigada e reirrigada não houve diferença significativa (P>0,05) na atividade da lipoxigenase e na produção de inibidores de proteases. A atividade da enzimas e a concentração da proteína total no intestino da lagarta não apresentaram diferença estatística significativa (P>0,05). Portanto, a cultivar UFV-16 é tolerante ao déficit hídrico ao qual foi submetida, e ainda, responde com defesas às injúrias causadas pela lagarta A. gemmatalis.Item Microbiota associada à Tetranychus spp. (Acari: Tetranychidae) em tomateiro e a resposta bioquímica defensiva dessa planta à herbivoria de pragas agrícolas(Universidade Federal de Viçosa, 2015-11-27) Ribeiro, Fabricio Rainha; Oliveira, Maria Goreti de Almeida; http://lattes.cnpq.br/2639783219310404O Brasil é um dos maiores produtores de tomateiro do mundo, apresentando assim importante papel na economia do país. Como toda monocultura, o tomateiro não está livre de herbívoros-praga, entre as quais se destacam os ácaros Tetranychus urticae (KOCH, 1836) e T. evansi (ácaro-vermelho) e a largata Tuta absoluta (Meyrick, 1917). Visando defenderem-se das injúrias causadas por herbívoros, as plantas possuem diversas estratégias de defesa. Uma delas são as alterações na expressão de seus genes que elevam os níveis de compostos de defesa. Em contrapartida aos mecanismos de defesa desenvolvidos pelas plantas, os insetos tendem a se adaptar e/ou burlar os compostos desta defesa. Isso pode ocorrer através do aumento da síntese de enzimas proteolíticas do intestino dos insetos ou por meio de associação com endossimbiontes. Assim, este trabalho visou identificar a diversidade microbiana em T. evansi e T. urticae, as possíveis interferências da associação microbiana de T. evansi sobre a defesa do tomateiro, além de estudar a resposta de defesa induzida da planta quando submetida, simultaneamente, a diferentes herbívoros e às atividades enzimáticas dos herbívoros quando alimentados com folhas destas plantas. Por fim, foi avaliado o efeito da defesa do tomateiro na reprodução de T. evansi. Primeiramente foi determinada mediante técnica de eletroforese e gel com gradiente desnaturante (DGGE), a diversidade de micro- organismos, fungos e bactérias, associados a T. evansi e T. urticae. Além disso, avaliou-se primers específicos para identificação de Wolbachia, Rickettsia, Spiroplasma e Cardinium. Os ácaros não apresentaram associação endossimbiótica com fungos. T. evansi possui maior diversidade bacteriana que T. urticae, sendo predominantemente diferentes as espécies de bactérias entre estes ácaros. As maiorias das bactérias encontradas nos ácaros são do filo Proteobactéria e algumas ainda não foram identificadas. Não foi possível a identificação específica das bactérias com os primeres utilizados. Este é o primeiro trabalho sobre a diversidade vide micro-organismos nessas duas importantes espécies de ácaros. Em outra etapa da pesquisa foi instalado um experimento com os seguintes tratamentos: plantas sem herbívoros; plantas infestadas com T. evansi; plantas infestadas por T. evansi tratados com tetraciclina; plantas infestadas por T. urticae; plantas infestadas por T. evansi + T. urticae; plantas infestadas por T. evansi + T. absoluta; plantas infestadas por T. urticae + T. absoluta; e plantas infestadas por T. absoluta. Para análise da defesa do tomateiro foram avaliadas as atividades de lipase, lipoxigenase (LOX), inibidores de proteases (IP) e polifenoloxidase (PPO). Foram avaliados os efeitos desses compostos de defesa sobre a oviposição de T. evansi. Nos herbívoros, foram feitas análises de atividade de proteases totais, atividade amidásica de tripsina-like, atividade esterásica de tripsina-like, atividade de quimiotripsina-like e cisteíno protease. Essas análises foram feitas em T. evansi, T. urticae, T. absoluta, T. evansi quando a planta foi injuriada por T. evansi e T. urticae juntos e em T. evansi quando atacou a planta com T. absoluta. T. evansi não tratado com tetraciclina não induziu a via de defesa do tomateiro que resulta na produção de IP, embora sua injuria tenha induzido uma maior atividade de PPO, isso não afetou sua oviposição. T. evansi tratado com tetraciclina induziu parcialmente a defesa do tomateiro. Quando esse ácaro injuriou o tomateiro com outros herbívoros, os níveis de IP do tomateiro foram aumentados. Todos os herbívoros possuem atividades para as enzimas digestivas testadas, sendo que para T. evansi tratado com tetraciclina ocorreu uma diferença na atividade de quimiotripsina-like e na atividade de tripsina-like. Estes resultados demostram que possivelmente bactérias endossimbiontes podem auxiliar o ácaro T. evansi a contornar as defesas do tomateiro. O tomate consegue responder ao T. evansi quando esse ataca o tomateiro simultaneamente com outros herbívoros e que as bactérias endossimbiontes de T. evansi alteram as atividades de suas enzimas digestivas.Item Identificação e caracterização das estirpes Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae associadas às mastites bovinas persistente e não persistente(Universidade Federal de Viçosa, 2015-11-30) Silva, Mônica Pacheco da; Ribon, Andréa de Oliveira Barros; http://lattes.cnpq.br/6252277128179977Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae são patógenos contagiosos associados à forma subclínica e persistente da mastite bovina, principal doença da pecuária leiteira. Neste trabalho avaliou-se a presença de dois patógenos em amostras de leite CMT positivas coletadas durante seis meses de animais pertencentes a um rebanho da Zona da Mata de Minas Gerais. Foi encontrada uma alta prevalência dos patógenos contagiosos o que indica possível falta de higiene nos procedimentos de rotina de ordenha ou falha no tratamento da doença. A análise de multilocus de repetições em tandem de número variável (MLVA) revelou apenas um genótipo de S. aureus e seis genótipos de S. agalactiae, alguns dos quais foram associados a infecções persistentes e ao número de parições do animal. A maioria das bactérias isoladas foi considerada forte produtora de biofilme e no caso de S. aureus, os isolados apresentaram uma variada atividade hemolítica. É possível que esses fenótipos contribuam com a persistência da infecção. No capítulo 2, estirpes de S. aureus isoladas de animal com manifestação de mastite persistente ou não persistente foram contrastadas quanto a características importantes para a patogênese bacteriana e virulência in vivo. Genotipagem por eletroforese em campo pulsado (PFGE) revelou que as bactérias possuíam uma similaridade de 90%. As duas estirpes contrastadas apresentaram os mesmos genes de virulência. Porém, elas diferiram significativamente na produção de hemolisina e biofilme, na capacidade de invasão e persistência em células do epitélio mamário bovino (MAC-T). Nos ensaios in vivo realizados com o modelo Galleria mellonella, a estirpe SAU 302 revelou-se mais virulenta do que a SAU 322. Uma forte reação do sistema imune do inseto foi observada mediante infecção com as bactérias. Os resultados mostraram variações fenotípicas entre as estirpes geneticamente relacionadas que podem contribuir positivamente para o desenvolvimento da doença e devem ser cuidadosamente exploradas. Conclui-se que bactérias geneticamente relacionadas podem apresentar uma variação fenotípica não revelada por técnicas de fingerprint do DNA e que esta variação pode ter uma implicação na progressão da mastite bovina. Sugere-se a definição de um conjunto de ensaios fenotípicos relevantes para a doença a fim de caracterizar bactérias isoladas de animais com manifestação conhecida.Item Análise proteômica e metabolômica de soja: aspectos moleculares da tolerância a seca em plantas transgênicas expressando BiP(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-04) Coutinho, Flaviane Silva; Ramos, Humberto Josué de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/5823859828589031Dentre os fatores ambientais, a seca é uma das principais causas na limitação da produção agrícola. Alguns fatores, como indicadores de expansão da área de plantio e alterações climáticas, evidenciam a necessidade de desenvolvimento de genótipos mais tolerantes. Nosso grupo de pesquisa na Universidade Federal de Viçosa (UFV) tem observado que a chaperona molecular BiP atua em respostas a estresses no retículo endoplasmático (ER) e osmótico, conferindo uma maior tolerância à seca. Neste trabalho, foram caracterizados os perfis proteômicos e metabólicos de plantas transgênicas de soja superexpressando a chaperona molecular BiP e de sua isolinha por eletroforese 2DE-MS e GC/MS, respectivamente. E análise de hormônios utilizando LC-MS. Plantas transgênicas apresentaram uma maior abundância relativa de proteínas relacionadas à fotossíntese, o que sustenta a hipótese que estas plantas estão predispostas geneticamente e fisiologicamente a suportar períodos de seca. Ao contrário do genótipo selvagem, plantas transgênicas não apresentaram mudanças significativas em proteínas relacionadas à glicólise, respiração e estresse oxidativo, o que evidencia uma menor percepção do estresse pelo genótipo geneticamente modificado. O acúmulo intracelular de solutos osmoticamente ativos pode ser um importante mecanismo de ajuste adotado pelas plantas transgênicas. Como evidenciado pelos perfis metabólicos, o acúmulo de aminoácidos pode ser o mecanismo responsável pela manutenção da turgescência celular no genótipo transgênico. Este mecanismo protetor pode possibilitar que a fotossíntese e outras atividades fisiológicas sejam mais operantes em condições de seca. Em condições de déficit hídrico, o ácido salicílico parece ter considerável importância em induzir efeitos de proteção na planta transgênica, podendo ter uma possível ação antagonista ao ácido jasmônico.Item Produção, purificação e caracterização parcial da dextranase de Pochonia chlamydosporia (VC4) e sua aplicação na remoção de dextrana do caldo de cana(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-17) Sufiate, Bruna Leite; Queiróz, José Humberto de; http://lattes.cnpq.br/2650132859878837Dextranases (EC 3.2.1) são enzimas que hidrolisam ligações α-(1,6), α-(1,2), α-(1,3) e α-(1,4) em polissacarídeos de dextrana, sendo produzidas por fungos, bactérias e algumas leveduras. São utilizadas na produção de dextrana para aplicações clínicas, na produção de isomaltooligossacarídeos e oligodextranas prebióticos, em produtos de higiene bucal para o tratamento e a prevenção de cáries e para remoção de dextranas na indústria de açúcar. O objetivo deste trabalho foi produzir, purificar e caracterizar parcialmente a dextranase produzida pelo fungo Pochonia chlamydosporia (VC4) e avaliar sua aplicação na remoção de dextranas em caldo de cana. Os efeitos de diferentes componentes do meio de cultura na produção de dextrana foram analisados através do delineamento de Plackett-Burman e do delineamento composto central. A superfície de resposta foi utilizada para determinar quais os níveis, dentre as variáveis que influenciam a produção de dextranase, proporcionam maior produção desta enzima pelo fungo P. chlamydosporia. Avaliou-se, ainda, a aplicação da dextranase na remoção de dextrana do caldo de cana. O extrato bruto foi parcialmente purificado em resina de troca iônica DEAE-Sepharose. A atividade de dextranase foi avaliada em diferentes pHs, temperaturas e na presença de íons metálicos. Apenas dois componentes do meio de cultura, NaNO 3 e pH, demonstraram efeito significativo (p<0,05) sobre a produção de dextranase. Os níveis de NaNO 3 e pH que proporcionaram maior produção desta enzima foram, respectivamente, 5 g/L e 5,5. A dextranase de P. chlamydosporia mostrou-se eficaz em remover a dextrana presente no caldo de cana, reduzindo em 75% o teor de dextrana após 12 horas, quando comparado com o controle. O rendimento da purificação foi 128%, o fator de purificação foi 2,58, e a atividade específica de 114,66 U/mg. A temperatura e a faixa de pH que resultaram em maior atividade foram, respectivamente, 50 °C, e 5,0 a 6,0. O íon Cu 2+ inibiu a atividade da dextranase em 55%, e o íon Mg 2+ aumentou a atividade em 24%, em relação ao controle.Item Aprimoramento do diagnóstico de Leishmaniose visceral canina por ELISA usando o antígeno NTPDase-2 de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi e padronização do diagnóstico por imunocromatografia(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-23) Souza, Anna Cláudia Alves de; Fietto, Juliana Lopes Rangel; http://lattes.cnpq.br/5714686709236004A leishmaniose visceral canina (LVC), causada pela Leishmania infantum chagasi é foco de diversos estudos, devido à relevância do cão como reservatório. No Brasil, a eutanásia de cães infectados é usada como controle da doença, orientada pelas técnicas de RIFI e ELISA. Porém estas técnicas apresentam limitações, que justificam o aprimoramento do diagnóstico. Em um trabalho prévio do nosso grupo, a proteína recombinante NTPDase-2 de L. infantum chagasi foi usada como antígeno em ensaios de ELISA, mostrando bom potencial para esta aplicação. O objetivo deste trabalho foi aprimorar o diagnóstico por ELISA. Para isto, foi feita a purificação manual e automatizada (FPLC). As purificações manuais forneceram maior grau de pureza e o processo em FPLC forneceu maior rendimento. Assim, várias purificações foram testadas, a fim de obter alto grau de pureza em sistema automatizado. Novos ELISAs foram realizados usando diferentes quantidades de antígeno (0,1 – 0,5 µg), diferentes diluições do soro de cães positivos e negativos (1:40; 1:80 e 1:160) e diferentes substratos de desenvolvimento de cor (TMB e OPD) para revelação. A influência da conformação do antígeno foi avaliada usando-o em condição nativa ou desnaturada. Na padronização do ELISA, 0,1 µg de antígeno e diluição do soro 1:160 foram as melhores condições. O uso de TMB e OPD não geraram diferenças significativas. Além disto, o antígeno renaturado também não levou à diferença significativa, indicando que o reconhecimento antígeno x anticorpo independente da conformação do antígeno. Quanto às purificações em FPLC, a melhor foi obtida usando 0,5 pellet bacteriano referente a 400 mL de indução, que forneceu grau de pureza de 96,6%. Além disso, foram feitos testes preliminares para a padronização deste antígeno em testes imunocromatográfcos. Foram padronizadas as conjugações da Proteína A e anti-IgG de cão a ouro coloidal de 40 nm. Para a linha controle, foi padronizada a concentração 2,5 µg/µL de IgG de cão na membrana de nitrocelulose e diluição do conjugado de 5x. Nossos dados confirmam que a NTPDase-2 tem potencial para o diagnóstico da LVC e que é possível melhorar os níveis de detecção de anticorpos variando as condições do ensaio. Além disto, foi possível iniciar a padronização de um teste imunocromatográfico que poderá futuramente trazer nova alternativa para o diagnóstico da LVC.Item The fate of duplicate genes in plants(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-26) Silva, Hugo Rody Vianna; Oliveira, Luiz Orlando de; http://lattes.cnpq.br/4574871657601012Plants are paleopolyploid organisms that survived the deleterious process of genome duplication. After duplication, copies of the same gene (paralogs) evolve in different ways due to the relaxation of purifying selection, making the duplicated genes the greatest source of evolutionary diversification. However, not all categories of genes are retained in the genomes, or lost, randomly. Several evolutionary models have been proposed to explain the evolutionary fate and biased retention of duplicate genes, to thereby better understand polyploidy. However, the applicability of these models has been ill defined. We used approaches of comparative genomics and molecular phylogeny to investigate the fate of duplicated genes in plants. Initially, we inferred about the ancestry of two small families of duplicated genes — methionine synthase and raffinose oligosaccharides — in the genomes of nine species of plants to then characterize the evolutionary forces that have shaped the evolutionary fate of paralogs, using resequencing data from 31 soybean genomes. Later, we used genomic data from 25 taxonomically different plant species to associate mechanisms of duplication, functional gene category and age of duplication to the biased retention of duplicate genes. In each of the two gene families, paralog evolved in different ways due to the relaxation of purifying selection, which allowed random mutations with adaptive value be fixed by positive selection. However, purifying selection seems to be more restrictive in at least one of paralogs of each gene family, preserving the ancestral function. Both the age and the mechanism of duplication contributed to variation in duplicate genes retention patterns in the 25 target genomes in this study. The fate and retention of duplicate genes in the genomes is apparently shaped by peculiarities inherent to each polyploid organism.Item Isolamento, caracterização e genômica comparativa de patógenos de mastite bovina(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-29) Silva, Danielle Mendes; Ribon, Andréa de Oliveira Barros; http://lattes.cnpq.br/8764422749361513A mastite bovina é considerada por muitos autores a principal doença do rebanho leiteiro. Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae são patógenos contagiosos comumente associados à forma subclínica e persistente da doença. A caracterização de estirpes em circulação nos rebanhos é de extrema importância na definição de estratégias de manejo para o controle da doença e de marcadores de prognóstico da mastite. No capítulo 1, 175 amostras positivas para o teste California Mastitis (CMT) foram coletadas de vacas holandesas e análises microbiológicas revelaram a presença de S. agalactiae em 34,2% das amostras. Em 36% das amostras foi observado o crescimento de bactérias pertencentes a outros grupos, em especial com S. aureus. A tipagem de S. agalactiae pela metodologia multilocus de repetições em tandem de número variável (MLVA) revelou seis genótipos (SagT1-T6), sendo SagT1 o mais prevalente no rebanho e também o mais frequentemente isolado de infecções mistas com S. aureus. Os isolados de S. agalactiae foram fortes produtores de biofilme in vitro e produziram hemólise do tipo beta. A análise de virulência dos isolados em larvas de Galleria mellonella definiu os tipos SagT3 e SagT1 como os mais e menos virulentos, respectivamente. Porém, dois isolados pertencentes a esses tipos não invadiram nem apresentaram efeito citotóxico em células epiteliais bovinas MAC-T. No capítulo 2, genomas de quatro estirpes de S. aureus causadoras de mastite subclínica, sendo SAU302 e SAU1364 isoladas de infecções persistentes e SAU170 e SAU1269 de infecções não persistentes, foram sequenciados. Uma grande conservação foi encontrada entre os genomas, como tamanho médio de 2,6 Mb, 32,8% de conteúdo GC e 2589 CDS. A tipagem por MLST classificou SAU170, SAU302, e SAU1364 como ST126, um tipo frequentemente encontrado em rebanhos brasileiros, e SAU1269, como ST1, associado a infecções humanas e bovinas. A comparação entre os genomas sequenciados e uma referência construída com genomas de dois isolados de mastite bovina, revelou uma identidade maior que 90% para a maioria dos genes anotados. A análise filogenética dos isolados sequenciados agrupou em ramos separados isolados de diferentes manifestações, sugerindo que algumas das particularidades compartilhadas entre isolados podem estar relacionados à persistência das infecções causadas por eles. A análise de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) mostrou SNPs em genes relacionados à adesão das células bacterianas ao hospedeiro e na sequência de agrC, proteína receptora do sinal de quorum-sensing em S. aureus, alguns deles importantes para estrutura da proteína.Item E-NTPDases de Leishmania infantum chagasi: uma revisão de seus papéis biológicos na infecção e padronização metodológica para sua expressão heteróloga em sistema LESXY (Leishmania Expression System)(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-29) Pimentel, Filippe Gadiolli; Fietto, Juliana Lopes Rangel; http://lattes.cnpq.br/3199724546805472As leishmanioses compreendem um amplo espectro de doenças parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania. No hospedeiro vertebrado estes parasitos infectam principalmente os macrófagos, onde conseguem escapar dos mecanismos de defesa e se proliferam. Muitos trabalhos relatam que a sinalização purinérgica é modulada durante o desenvolvimento e ativação das células do sistema imune. Para obterem sucesso na infecção, vários patógenos conseguem subverter a resposta imune através da modulação da sinalização purinérgica, promovendo uma diminuição dos níveis de ATP (molécula pró-inflamatória) e levando a um aumento dos níveis de adenosina (molécula imunossupressora). Este desfecho resulta da atividade conjunta de algumas ecto- nucleotidases, das E-NTPDases e da 5’-ecto-nucleotidase, tema que é abordado no segundo capítulo desta tese. Em Leishmania, as E-NTPDases são consideradas importantes porque participam da via de salvação de purinas, além de serem citadas em diversos artigos como responsáveis por aumento de virulência e infectividade em diferentes espécies. Em trabalhos desenvolvidos por nosso grupo de pesquisa, as E- NTPDases 1 e 2 de L. infantum foram caracterizadas em sistema bacteriano, demonstrando resultados promissores. A possibilidade de expressar essas proteínas em sistema de expressão Leishmania (Leishmania Expression System – LEXSY – Jena Bioscience) nos impulsionou a desenvolver o presente projeto, com o intuito de caracterizar essas enzimas em um organismo bem mais próximo ao original e avaliar o seu potencial uso como vacina viva. Portanto, a clonagem das Lic-E-NTPDases sistema LEXSY é o tema abordado no primeiro capítulo desta tese.Item Anotação e montagem de transcriptomas de intestino médio e ovários do carrapato Amblyomma sculptum, antes e após a infecção por Rickettsia amblyommii(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-29) Moreira, Higo Nasser Sant’anna; Siqueira, Cláudio Lísias Mafra de; http://lattes.cnpq.br/3049631592691033O objetivo deste trabalho foi construir um catálogo de genes para o genoma funcional dos órgãos internos do carrapato A. sculptum, bem como, avaliar os padrões de expressão gênica no intestino médio (MDG) e ovários (OVA) frente à condições de não-infecção (MNI e ONI) e infecção por Rickettsia amblyommii (MI e OI). Como primeiro passo, foi realizada a construção de um transcriptome de referência à partir da montagem de 9 transcriptomas (200 milhões de reads) derivados do intestino médio (3), dos ovários (2) e das glândulas salivares (4). O De novo assembly gerou um total de 460,445 contigs, a partir dos quais foram preditas 27.308 CDS expressas em no transcriptome total do A. sculptum. O mapeamento das reads derivadas de cada órgão contra o transcriptoma de referencia permitiu a identificação de 25,569 CDS expressas nos intestinos (MDG), 21,230 CDS expressas em ovários (OVA), enquanto que 10.697 CDS foram derivados dos transcriptomas de glândula salivar (SG). A anotação do transcriptoma de referência (27.308 CDS) permitiu a identificação de 23,228 CDS relacionados a processos housekeeping, enquanto que 2.177 CDS apresentaram sequência de peptídeos (SignalP) e foram anotadas como proteínas secretads.Um total de 261 CDS foram anotadas como elementos transponíveis, 20 CDS foram relacionadas à transcritos virais, enquanto que 1,622 permaneceram sem anotação, sendo anotadas com Unknown. Entre as 29 classes de genes housekeeping, destacam-se aqueles relacionados com Sinal de transdução (3.158 CDS), seguido de 1887 CDS anotadas com os transportadores e 1.523 CDS relacionados maquinaria de transcrição. A avaliação individualizada dos transcriptomas MDG e OVA no tocante a infecção e não infecção por R. amblyommii (infectados vs não infectado) revelou um padrão oposto entre os dois órgãos, com quase todos os processos celulares am MDG superexpressos em resposta à infecção por riquétsia, enquanto a maioria dos processos celular em ovário (OVA) foram down regulados em resposta à infecção por R. amblyommii. Essa down regulação de processes em ovários de carrapatos infectados por rickettsiae corrobora estudos in vitro com outras especíceis de carraátos infectados com Rickettsia spp. o que concorda com outros estudos in vivo com foco ovipostue de carrapatos infectados. com queda das funções fisiológicas da femeas ingurgitada e queda no rendimento da oviposição. Também foi observado up-regulação de proteínas no intestino, em resposta à infecção, sendo essas relacionadas com processes de infecção rickettsial em ́celulas de mamíferos bem como outros invertebrados, tais como actina, complexo Arp 2/3, domínio WASP, proteína tirosina quinase, clatrinas, intergrinas e ontre outras. Estes resultados sugerem que, de forma semelhante à verificada em células de mamíferos e em outras 17 espécies de carrapatos, estas proteínas estar envolvidas durante o processo de infecção do trato intestinal de A. sculptum. No entanto, a down regulação das principais vias metabólicas, maquinaria de replicação e de síntese proteica em ovários em resposta à infecção por Rickettsia (OI contra ONI) indica que esta batéria se constiui uma carga metabólica e fisiológica para os ovários. Alpem de sugerir possível alvos a sere avaliados na interação rickettsia-carrapato, estes resultados também dão suporte à outros estudos e estratégicas para uma melhor compreensão da biologia deste vetor, bem como para o desenvolvimento de estratégias de combate e controle biológico, como vacinas e acaricidas.Item Parâmetros fisiológicos e produtivos de codornas japonesas, em postura, suplementadas com 1,25-dihidroxivitamina-D3-glicosídeo de origem vegetal(Universidade Federal de Viçosa, 2016-02-29) Souza, Christiane Silva; Oliveira, Maria Goreti de Almeida; http://lattes.cnpq.br/9271561763088890Objetivou-se estudar as variáveis produtivas e fisiológicas de codornas japonesas pós- pico de postura alimentadas com ração contendo suplemento de 1,25-dihidroxivitamina- D3-glicosídeo (1,25(OH)2D3) de origem vegetal associado ou não aos níveis de cálcio (Ca) e fósforo disponível (Pdisp) reduzidos. Dois experimentos foram conduzidos, sendo o primeiro num delineamento em blocos casualizados, com cinco tratamentos (0,0; 0,25; 0,50; 0,75 e 1,00 μg de 1,25(OH)2D3/kg de ração), com seis repetições e seis aves por unidade experimental (UE). O segundo experimento foi num delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial (3x2), com seis tratamentos [1) ração basal (RB); 2) RB + 0,50 μg de 1,25(OH)2D3; 3) RB com redução em 15,0% de Ca e Pdisp; 4) T3 + 0,50 μg de 1,25(OH)2D3; 5) RB com redução em 30,0% de Ca e Pdisp; e 6) T5 + 0,50 μg de 1,25(OH)2D3], sete repetições e seis aves por UE. Os resultados do Experimento 1 mostraram que não houve efeito significativo (p>0,05) do 1,25(OH)2D3-glicosídeo sobre as características produtivas: consumo de ração, produção de ovos por ave dia e por ave alojada, ovos comercializáveis, peso médio do ovo, massa de ovos, conversão alimentar por dúzia e por massa de ovos. A adição de 0,75 μg de 1,25(OH)2D3/kg de ração proporcionou maior espessura e percentual de cinzas nas cascas dos ovos (p<0,05). Os pesos e os respectivos percentuais relativos do coração, fígado, moela e pâncreas, o comprimento intestinal e a excreção mineral não foram influenciados pela vitamina. Verificou-se que a composição orgânica (proteínas colagenosas – PC e totais – PT) e a resistência à quebra (RQ) dos ossos das aves com 47 semanas de idade alteraram-se com o 1,25(OH)2D3 adicional (p<0,05). A RQ das tíbias direitas das aves que receberam ração suplementada com 0,50 μg de 1,25(OH)2D3 foi 20% maior quando comparada com os demais tratamentos. Contudo, não houve modificação da qualidade óssea das aves, uma vez que a composição mineral – cinzas, Ca, P, relação Ca:P, a densidade óssea e os teores de proteínas não colagenosas não se modificaram. No Experimento 2, observou-se que a redução em 15% e 30% nos valores preconizados para Ca e Pdisp, associada ou não ao 1,25(OH)2D3 nas rações não influenciou o desempenho produtivo, a qualidade de ovos e a biometria de vísceras das aves. O percentual de cinzas nas cascas dos ovos, o peso do fígado, o Índice de Seedor e a RQ foram influenciados pelas reduções dieteticas de Ca e Pdisp (p<0,05). Houve interação significativa entre os níveis de Ca e Pdisp x 1,25(OH)2D3 adicional nas rações, para as quantidades de proteínas (PC, não colagenosas e PT) e cinzas (p<0,05) nos fêmures. Apesar das alterações na constituição orgânica e mineral dos ossos, pode-se inferir que não houve desestabilização da matriz óssea das aves. Na avaliação da bioquímica sérica, não houve alteração nos componentes sanguíneos (proteínas totais, albumina (A), globulinas (G) e relação A:G), nos minerais (Ca, P e relação Ca:P) e nas aminotransferases (ALT e AST) das codornas japonesas em postura nos dois Experimentos. A atividade da fosfatase alcalina aumentou mediante a adição de 1,25(OH)2D3-glicosídeo de origem vegetal nas rações. De modo geral, conclui-se que a adição de 1,25(OH)2D3-glicosídeo de origem vegetal nas rações para codornas japonesas em postura de 36 a 45 semanas de idade (Experimento 1), não afetou os resultados produtivos, as excretas, a biometria de órgãos do aparelho digestório, bem como as variáveis ósseas e a bioquímica sérica. No Experimento 2, conclui-se que as codornas japonesas em pós-pico de postura (52 a 61 semanas de idade) alimentadas com ração contendo níveis reduzidos de Ca e Pdisp (em 15 e 30%) associados ao suplemento de 1,25(OH)2D3-glicosídeo de origem vegetal não tiveram os resultados produtivos e fisiológicos afetados pelos tratamentos.