Microbiologia Agrícola
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Item Predição metagenômica, isolamento e caracterização de bactérias diazotróficas do solo de café arábica(Universidade Federal de Viçosa, 2025-02-25) Guimarães, Cleidiana Vieira; Silva, Marliane de Cassia Soares da; http://lattes.cnpq.br/1647689474581844Microrganismos diazotróficos ou promotores de crescimento de plantas (PGPR) contribuem para o fornecimento de nitrogênio assimilável (NH4?) as plantas. Investigações sobre esses grupos microbianos em culturas não leguminosas, como o café, oferecem insights promissores alinhados às demandas da agricultura de baixo impacto ambiental. Neste estudo, investigamos comunidades bacterianas associadas ao solo de duas fazendas produtoras de Coffea arabica. Realizou-se uma predição metagenômica de potenciais bactérias fixadoras de nitrogênio, com base nos genes estruturais nifHDK, vnfHDK e anfHDK, que codificam as isoformas Fe-Mo, Fe-V e Fe-Fe da nitrogenase. Paralelamente, foram realizados o isolamento, identificação molecular e testes in vitro com microrganismos cultiváveis dessas áreas. A análise metagenômica revelou a presença de táxons com genes de isoformas alternativas da nitrogenase no solo da Fazenda 2. Entre os gêneros isolados, destacaram-se Priestia, Dyella, Streptomyces e Luteibacter, com capacidade para fixação biológica de nitrogênio, produção de fitohormônios e solubilização de fosfato inorgânico. Os resultados indicam que a comunidade de bactérias diazotróficas do solo é dinâmica e que abordagens metagenômicas combinadas com o isolamento microbiano se complementam, permitindo não apenas a identificação de diversidade genética funcional latente, mas também a possibilidade de validação do potencial biotecnológico de diazótrofos de vida livre em cafeeiros. Palavras-chave: Fixação Biológica de Nitrogênio; Predição funcional; Microbiota do SoloItem RNAi em Colletotrichum lindemuthianum: caracterização das proteínas-chave e desafios para a aplicação(Universidade Federal de Viçosa, 2025-03-25) Rosa, Rafael Oliveira; Queiroz, Marisa Vieira de; http://lattes.cnpq.br/8163562962122113O agente etiológico da antracnose, uma das principais doenças do feijão-comum (Phaseolus vulgaris L.), é o fungo Colletotrichum lindemuthianum. Devido à alta variabilidade genética do patógeno e as limitações das estratégias convencionais de controle, como o uso de cultivares resistentes e fungicidas, torna-se necessário o desenvolvimento de novas abordagens eficientes e sustentáveis. Neste contexto, o RNA de interferência (RNAi) surge como uma alternativa promissora, permitindo o silenciamento de genes essenciais para a patogenicidade do fungo. Com isso, o presente estudo teve como objetivos: caracterizar os principais componentes da maquinaria de RNAi em C. lindemuthianum; avaliar a expressão dos genes-chave durante a interação com o feijão-comum; investigar a capacidade do fungo de captar dsRNAs exógenos; e silenciar genes-alvo quando aplicados por pulverização (SIGS). A análise do genoma de C. lindemuthianum permitiu identificar proteínas- chave da maquinaria de RNAi, incluindo duas Argonautas (AGO), duas Dicer-like (DCL) e três RNA polimerases dependentes de RNA (RdRPs). Dentre essas, ClAGO2, ClRdRP2 e ClRdRP3 foram descritas pela primeira vez na espécie. Todas as proteínas apresentaram domínios altamente conservados, e a análise filogenética indica que os genes que as codificam foram mantidos nos genomas, com maior proximidade entre espécies do mesmo complexo taxonômico do gênero Colletotrichum. A expressão dos genes AGO1, RdRP3 e DCL1 do fungo na interação com a planta variou ao longo do tempo e da linhagem avaliada. Foram obtidos 18 e 180 transformantes de C. lindemuthianum e C. truncatum, respectivamente, expressando GFP. A produção de dsRNAs apresentou baixo rendimento em dois métodos testados (in vivo e in vitro), resultando em uma média de 12,2 µg de dsRNA sintetizado pelo kit comercial. Os ensaios de captação de dsRNA por microcultivo indicaram que C. lindemuthianum é capaz de perceber dsRNAs exógenos, com aumento no número e tamanho de vacúolos, porém os resultados foram inconclusivos quanto a absorção. A pulverização dos dsRNAs direcionados a ClSGE1 (regulador transcricional putativo) e ClpacC (regulador transcricional em resposta ao pH) a 4 ng.µL-1 não foram capazes de controlar a antracnose no feijão-comum nas condições avaliadas. Dessa forma, foi possível caracterizar as proteínas envolvidas no mecanismo de RNAi e demonstrar que C. lindemuthianum é capaz de perceber dsRNAs exógenos, abrindo caminho para futuros testes de captação. Além disso, este estudo contribui para a compreensão dos desafios associados a padronização e o uso de dsRNA como estratégia de controle de fitopatógenos e inicia as investigações desse método para C. lindemuthianum. Palavras-chave: RNAi; Antracnose; Feijão-comum; SIGSItem Promotion of microbial phosphate solubilization by clay minerals(Universidade Federal de Viçosa, 2024-08-23) Iglesias Barrera, Gustavo Andrés ; Costa, Maurício Dutra; http://lattes.cnpq.br/8820351730014631A number of physical and chemical interactions between clays and microorganisms have been reported with strong influence on microbial physiology and ecology. However, clay influences on phosphate-solubilizing microorganisms (PSM) remains unknown. PSM are capable of converting low solubility phosphates into soluble orthophosphate that can be taken up by plants. PSM are commonly present in the soil, particularly in the rhizosphere where they maintain associative symbiosis with the host plant. This study aimed at investigating the influence of soil clays (kaolinite, gibbsite, goethite, and hematite) on phosphate solubilization by the fungus Aspergillus niger. In the first chapter, a literature review is presented addressing the potential use of PSM in agriculture. The interaction between clays and microorganisms is reported and the strategies to enhance microbial phosphate solubilization are described. In the second chapter, an investigation on the influence of kaolinite, gibbsite, goethite, and hematite, on organic acid production and phosphate solubilization by the fungal isolate A. niger FS1. The experiments were conducted in modified NBRIP medium containing 3 g L! of Araxá rock phosphate (RP) supplemented with clays at 250, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, and 3000 g L'!. The media were inoculated with 10º fungal conidia and incubated for 7 days at 28ºC. AII clays promoted increases in Araxá RP solubilization. The addition of gibbsite and kaolinite to the culture media led to the highest values of soluble P recorded (453.68 and 407.61 mg L', respectively). Gibbsite increased oxalic acid production by the fungus 8.36 times that of the control treatment. Gibbsite and kaolinite also promoted higher yields of citric acid, with 15.69 and 8.93 mmol L' ', respectively. In the third chapter, the hypothetical mechanisms of promotion of phosphate solubilization by clays were verified. Clays were added directly to the culture media as described above or placed in plastic capsules to prevent direct contact of the particles with the fungus. The effects of increasing concentrations of Fe-EDTA, AlCls, and silicic acid on Araxá RP solubilization and organic acid production were also evaluated. The encapsulation of clay particles did not decrease RP solubilization, indicating that the direct contact of the clays with the fungal mycelium is not required to induce RP solubilization. Significant increases in soluble P (3.89 times that of the control treatment) and oxalic acid were observed with increasing concentrations of AlCl;. Fe-EDTA and silicic acid increased phosphate solubilization by only 29 and 11%, respectively, with no significant increases in oxalic and citric acid production. In the fourth chapter, we investigated the effect of kaolinite, gibbsite, goethite, and hematite on the solubilization of Araxá, Argélia, Bayovar, Catalão, Marrocos, and Patos de Minas RPs and aluminum, calcium, and iron phosphate. For this, modified NBRIP medium was supplemented with 3 g L! of each P source above. The media were inoculated with 10º fungal conidia and incubated for 7 days at 28ºC. Gibbsite was the most efficient clay at promoting the solubilization of all RPs tested, reaching 100% cof solubilization for the majority. Kaolinite was particularly effective at the solubilization of iron phosphate, reaching 80.9% of solubilization. Only goethite was capable of enhancing aluminum phosphate solubilization (22./2%). In the fifth chapter, a brief review is presented discussing the question: Are there really microorganisms specialized in phosphate solubilization or is this process merely a side-effect of other microbial metabolic activities? All the findings presented here offer new possibilities for developing innovative strategies to enhance RP solubilization using soil clays. Our results shed light on the interactions between soil clays and fungal hyphae that may operate in the soil to increase P availability to plants. They also improve our understanding on P dynamics in the soil involving PSM and clay minerals. Keywords: Soil clays, phosphate solubilization, organic acids, kaolinite, gibbsite, goethite, hematite, phosphate solubilizing microorganisms.Item Influência da microbiota psicrotrófica no rendimento de queijo Minas Frescal elaborado com leite estocado sob refrigeração(Universidade Federal de Viçosa, 2006-03-16) Cardoso, Rodrigo Rezende; Vanetti, Maria Cristina Dantas; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783874H3; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4702817D8; Pinto, Cláudia Lúcia de Oliveira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783521J6; Furtado, Mauro Mansur; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783310Z7; Santos, Miriam Teresinha dos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786872Z0; Carvalho, Antônio Fernandes de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781655T2A estocagem do leite cru sob refrigeração favorece a seleção de bactérias psicrotróficas, incluindo espécies produtoras de proteases e lipases termorresistentes que são associadas à perdas de qualidade do leite e seus derivados. Para as indústrias de queijos, um dos principais problemas causados em decorrência da contaminação e do crescimento de bactérias psicrotróficas no leite cru refrigerado é a redução do rendimento durante a fabricação. O objetivo deste trabalho foi relacionar o rendimento do queijo Minas Frescal com a população de bactérias psicrotróficas no leite cru refrigerado granelizado. O leite cru foi estocado a 10 °C, por até quatro dias, posteriormente pasteurizado e, diariamente, utilizado para a fabricação de queijo Minas Frescal. Paralelamente, foram quantificadas as microbiotas psicrotrófica, psicrotrófica proteolítica e lipolítica e a atividade proteolítica e lipolítica do leite cru. A manutenção do leite cru a 10 °C possibilitou um crescimento da microbiota psicrotrófica, com um aumento de dois ciclos logarítmicos na população de bactérias psicrotróficas proteolíticas e de, aproximadamente, três ciclos logarítmicos na população de bactérias psicrotróficas lipolíticas, após quatro dias de estocagem. As atividades proteolítica e lipolítica aumentaram durante a estocagem do leite cru refrigerado, apresentando valores superiores aos do leite recém-ordenhado. Foi constatada uma redução de 6,78 % no rendimento em termos de litros de leite por quilograma de queijo e de 6,38 % em gramas de sólidos totais no queijo por litro de leite quando o queijo Minas Frescal foi fabricado com leite refrigerado armazenado por quatro dias. O leite cru que resultou nestas perdas de rendimento apresentava uma população de 108 UFC mL-1 a 109 UFC mL-1 de bactérias psicrotróficas e a população de bactérias psicrotróficas proteolíticas e lipolíticas era superior a 107 UFC mL-1. Verificou-se ainda, para o mesmo período de estocagem, um aumento das concentrações de nitrogênio total, gordura e sólidos totais no soro proveniente da fabricação do queijo Minas Frescal. As perdas econômicas decorrentes da redução do rendimento da fabricação de queijo Minas Frescal foram estimadas em US$ 15,480.00 por mês, para uma indústria de laticínios processadora de 50.000 litros de leite por dia e que destine 33% do leite captado a fabricação de queijo Minas Frescal.Item Análise da diversidade genética de isolados de Phaeoisariopsis griseola por meio de marcadores moleculares(Universidade Federal de Viçosa, 2007-08-15) Abadio, Ana Karina Rodrigues; Araujo, Elza Fernandes de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783675E2; Salomão, Tânia Maria Fernandes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787017A5; Queiroz, Marisa Vieira de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4785812Z5; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4704734Y2; Bazzolli, Denise Mara Soares; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4761710D6; Pereira, Olinto Liparini; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4767879D4A mancha-angular, causada pelo fungo Phaeoisariopsis griseola, também conhecido como Pseudocercospora griseola (Sacc.) Crous & U. Braun, é uma das doenças mais importantes que ocorre no feijoeiro, causando sérios prejuízos na produção. A forma mais econômica de controle dessa doença é a utilização de cultivares resistentes. Entretanto, estudos relacionados à diversidade genética de P. griseola têm demonstrado grande variabilidade genética nesse fungo, o que tem dificultado a obtenção dessas cultivares. Diante disso, o objetivo desse trabalho foi verificar se as técnicas ERIC-PCR, BOX-PCR, ISSR-PCR e PCR-RFLP da região ITS do rDNA são apropriadas para a detecção de polimorfismos genéticos que permitam estimar a diversidade genética de isolados de P. griseola provenientes dos estados de Goiás, Minas Gerais, Espírito Santo e Paraná. O DNA total de 29 isolados de P. griseola foi extraído e, posteriormente, utilizado para amplificação de seqüências ERIC, BOX, ISSR e ITS utilizando oligonucleotídeos específicos. As clivagens da região ITS com as enzimas de restrição AluI, HaeIII, HhaI, HpaII, MboI, MspI e RsaI produziram perfis de restrição idênticos para todos os isolados, e, portanto, a sequência ITS nas condições empregadas não forneceu marcadores que pudessem diferenciar os isolados de P. griseola. Por meio da análise de agrupamento dos resultados obtidos pelas técnicas BOX-PCR, ERIC-PCR e ISSR-PCR, foram detectados 2, 5 e 28 genótipos, respectivamente, entre os isolados estudados. Os resultados obtidos mostraram que as técnicas BOX-PCR e ERIC-PCR foram menos eficientes na detecção de polimorfismo genético entre os isolados de P. griseola. Os melhores resultados foram obtidos com o emprego da técnica ISSR- PCR, que mostrou grande capacidade de detecção de marcadores polimórficos entre os isolados. A diversidade genética estimada poderá auxiliar no desenvolvimento de estratégias adequadas para a obtenção de variedades de feijoeiro resistentes a esse fungo.Item Isolamento, caracterização e atividade fermentativa de bactérias deterioradoras de polpa de manga(Universidade Federal de Viçosa, 2006-04-28) Costa, Esther Dantas; Vanetti, Maria Cristina Dantas; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783874H3; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4733032E1; Mantovani, Hilário Cuquetto; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727026Z7; Passos, Frederico José Vieira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781218J9; Nascimento, Antonio Galvão do; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4797432E8; Santos, Miriam Teresinha dos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786872Z0A manga (Mangifera indica Linn.) é uma das mais importantes frutas tropicais, muito apreciada pelo sabor, aroma e por suas propriedades nutricionais. Os frutos são perecíveis em razão dos fatores intrínsecos, dificultando a sua comercialização in natura. Uma alternativa para reduzir as perdas é a conservação da manga na forma de polpa, suco ou néctar. O tratamento térmico é o processo mais empregado para a conservação desses produtos. Entretanto, a inativação completa de microrganismos durante o processamento térmico normalmente adotado pelas indústrias processadoras de sucos e polpas é limitada pela presença de organismos formadores de esporos e de termorresistentes. Este trabalho teve como objetivos isolar e identificar as bactérias deterioradoras de polpa de manga tratada termicamente e caracterizar a atividade fermentativa desses microrganismos. Amostras de 25 lotes de polpa de manga deteriorada provenientes de duas unidades industriais processadoras de polpa de manga foram analisadas em ágar padrão para contagem, enriquecido com 20 % de polpa de manga esterilizada. Um total de 104 isolados foi obtido e essas bactérias foram caracterizadas como bastonetes, Gram-positivas, formadoras de esporos sendo a grande maioria constituída de anaeróbias estritas, do gênero Clostridium. Destes, os isolados LMA 45, LMA 63, LMA 72 e LMA 104 obtidos de lotes diferentes de polpa de manga provenientes de duas unidades industriais, foram identificados por teste bioquímicos e pelo perfil de ácidos graxos de membrana como Clostridium tyrobutyricum e selecionados para a continuidade deste estudo. Os isolados foram cultivados em caldo BHI com pH variando de 3,0 a 7,0 e em temperatura entre 7 °C e 50 °C. O crescimento de C. tyrobutyricum ocorreu em valores de pH de 4,0 a 7,0 com exceção do isolado LMA 104 que não apresentou crescimento em pH 4,0 em até 48 horas de incubação. Não houve crescimento em pH 3,5. A velocidade específica de crescimento (μ) foi maior em pH entre 6,5 e 7,0 e alcançou valores entre 0,18 e 0,31 h-1. O crescimento foi observado em temperaturas de 10 °C a 40 °C, com ótimo entre 35 °C e 40 °C. A atividade fermentativa de C. tyrobutyricum LMA 45, LMA 63, LMA 72 e LMA 104 foi avaliada em polpa de manga com pH variando de 3,0 a 5,0. A produção de gás foi detectada em valores de pH de 4,0, 4,5 e 5,0 em menos de 50 horas de incubação a 30 ºC, com exceção do isolado LMA 104 cuja produção de gás foi detectada após 100 horas de incubação. Além de gás, os principais produtos da fermentação da polpa de manga com pH entre 4,0 e 4,5 foram acetato e butirato, determinados por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). O consumo de sacarose, glicose e frutose durante a fermentação de polpa de manga com pH 4,0 e 4,5 foi determinado utilizando-se HPLC. Os isolados de C. tyrobutyricum avaliados apresentaram capacidade de crescer em altas concentrações de açúcar, pois fermentaram a polpa de manga com 729,2 mM de açúcares e não utilizaram todo o substrato durante a fermentação. A inibição do crescimento dos isolados em polpa de manga com pH 3,5 permite sugerir a adoção da estratégia de acidificação para garantir a conservação do produto pela indústria, que geralmente processa esse produto com pH 4,0.Item Acúmulo de ácido oxálico e cristais de cálcio em ectomicorrizas de eucalipto(Universidade Federal de Viçosa, 2007-04-04) Gonzalez, Jhon Alexander Zambrano; Silva, Ivo Ribeiro da; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799432D0; Neves, Júlio César Lima; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783076D4; Costa, Maurício Dutra; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728228J5; Barros, Nairam Félix de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783694P8; Borges, Arnaldo Chaer; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783573Z8Este trabalho teve como objetivo determinar o papel dos fungos ectomicorrízicos na absorção e armazenamento de Ca por plantas de Eucalyptus sp., cultivado por 2,5 anos em área com topografia típica em meia laranja de vertente côncavo-convexa da região de Viçosa, MG. Em 73,7 % das ectomicorrizas e raízes observadas, observou-se abundante acúmulo de cristais de oxalato de cálcio (CaOx) nas células do córtex radicular, na forma de drusas e grânulos. A presença conspícua de CaOx foi observada em 56,2% das ectomicorrizas e em 17,5% das raízes laterais finas não-colonizadas, evidenciando o papel das micorrízas no acúmulo de cálcio em Eucalyptus sp. As maiores percentagens de colonização micorrízica foram observadas na área de Encosta, que apresenta limitada disponibilidade de nutrientes e alta saturação por Al. As concentrações de ácidos orgânicos foram quantificadas em diversas frações, a saber, em mg kg-1: folhas (162,3) > ectomicorrizas (118,2) > raízes laterais finas não-colonizadas (116). Os teores de ácido oxálico foram maiores no solo ectomicorrizosférico (91,8 mg kg-1), seguido pelo solo rizosférico (67,2 mg kg-1) e, finalmente, pelo não-rizosférico (38 mg kg-1). Nas ectomicorrizas da área Topo, os teores mais elevados (p<0,05) de ácido oxálico e P, 173,3 e 6,35 mg kg-1, respectivamente, possivelmente resultaram da solubilização de nutrientes pelos fungos ectomicorrízicos associados. A fração que mais contribuiu para a massa de serapilheira foi a em avançado grau de decomposição, sendo constituída de fragmentos de folhas e galhos escuros em contato com o solo. Em geral, a ordem de acúmulo de nutrientes na serapilheira correspondeu a, em kg ha-1: Ca (32,4) > Mg (5,4) > K (4,2) > P (1,7). O conteúdo de Ca na serapilheira e a baixa concentração do elemento no solo revelam a importância da manta orgânica como reservatório de Ca para o eucalipto. A maior concentração e conteúdo de P na serapilheira foram verificados na posição Topo, no entanto, a atividade das fosfatases ácidas nas ectomicorrizas não diferiu entre as amostras das posições topográficas avaliadas. Observaram-se basidiocarpos de Laccaria, Pisolithus, Scleroderma e de fungo ectomicorrízico não-identificado. A existência de densa camada de raízes de eucalipto na fração mais decomposta da serapilheira e na interface desta com o solo revelou intensa colonização da manta orgânica por raízes de eucalipto, com a presença de oito morfotipos distintos de ectomicorrizas, além de hifas, rizomorfos e basidiocarpos. O trabalho demonstra que os fungos ectomicorrízicos participam na ciclagem da serapilheira e no armazenamento de cálcio quando associados a raízes de eucalipto.Item Compostos de reserva e permeabilização de basidiósporos de Pisolithus microcarpus(Universidade Federal de Viçosa, 2011-08-23) Godinho, Carla Soares; Borges, Arnaldo Chaer; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783573Z8; Kasuya, Maria Catarina Megumi; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4721444T5; Costa, Maurício Dutra; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4728228J5; http://lattes.cnpq.br/3157448451994987; Campos, André Narvaes da Rocha; http://lattes.cnpq.br/4718389161844570Os basidiósporos Pisolithus apresentam baixas percentagens de germinação, embora disponham de compostos de reserva para a provisão de carbono e energia durante o crescimento inicial das hifas. Neles, a parede celular altamente hidrofóbica e resistente pode contribuir para a recalcitrância à germinação. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo demonstrar a presença de glicogênio, polissacarídeo, lipídeos, RNA e proteínas em basidiósporos maduros de Pisolithus microcarpus, determinar o perfil de ácidos graxos de basidiósporos de fungos ectomicorrízicos e avaliar métodos de permeabilização da parede celular dos basidiósporos. As técnicas histoquímicas utilizadas na detecção de diferentes compostos de reserva nos basidiósporos evidenciaram a presença de glicogênio, polissacarídeos, proteínas, RNA, lipídeos totais, lipoproteínas, lipídeos neutros e lipídeos ácidos. Detectou-se a presença de onze ácidos graxos distintos nos basidiósporos de P. microcarpus, nove nos de Scleroderma sp. e dezesseis nos de Suillus sp. Os ácidos graxos mais abundantes nas estruturas fúngicas analisadas foram o 18:1w9c e o 16:0. Além do ácido oléico e ácido palmítico, destacaram-se os seguintes ácidos graxos: 16:1w5c, 18:1w5c para P. microcarpus; 12:1at11-12 e 18:00 para Scleroderma sp.; 18:00 e 15:00 para Suillus sp. O perfil de ácidos graxos dos basidiósporos de P. microcarpus apresentou similaridade de 36,8 % com o de Scleroderma sp. O perfil de ácidos graxos dessas duas espécies apresentou similaridade de somente 5,2 % em relação àquele de Suillus sp. O uso de quitinase, liticase e celulase por 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 e 24 h, sob agitação a 80 rpm e a 30 °C, não resultou na permeabilização da parede celular dos basidiósporos. O tratamento dos basidiósporos com ácido sulfúrico nas concentrações de 5, 10, 25, 50 % (v/v), por 5, 10, 25, 50 ou 80 s, também não resultou na permeabilização dos basidiósporos. Os tratamentos com hipoclorito de sódio em concentrações de 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 90 e 100 % da concentração original de cloro ativo (20 g L- 1) e tempos de contato de 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70 e 80 s promoveram a permeabilização da parede celular dos basidiósporos avaliada pela penetração do corante Negro Sudão B. A maior percentagem de basidiósporos permeabilizados, 97 %, foi obtida com o tratamento com hipoclorito a 100 % pelo tempo de 80 s. No entanto, os testes de viabilidade e a observação dos basidiósporos por microscopia eletrônica de varredura evidenciaram a perda da integridade da parede celular e da viabilidade dos esporos quando submetidos a esse tratamento. A exposição dos basidiósporos ao hipoclorito de sódio a 5 % pelo tempo de 40 s foi o tratamento que resultou em maiores percentagens (83 %) de basidiósporos permeabilizados, sem prejuízos na viabilidade e da morfologia desses propágulos. Os resultados obtidos contribuem para a compreensão das variáveis que atuam no processo de germinação dos basidiósporos de P. microcarpus e permitirão o desenvolvimento de estratégias visando melhorar a obtenção de monocários in vitro.Item Escherichia coli Shiga-Toxigênica (STEC) em abatedouro de bovinos no Estado de Minas Gerais(Universidade Federal de Viçosa, 2008-10-03) Gomes, Andressa Pinheiro; Teixeira, Magdala Alencar; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787866Y1; Borges, Arnaldo Chaer; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783573Z8; Moraes, Célia Alencar de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781007D6; http://lattes.cnpq.br/5822691880756911; Vanetti, Maria Cristina Dantas; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783874H3; Pinto, Cláudia Lúcia de Oliveira; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783521J6Escherichia coli Shiga-toxigênica, STEC, tem emergido como patógeno que pode causar infecções de origem alimentar e doenças severas e potencialmente fatais, como Colite Hemorrágica (CH) e Síndrome Urêmico Hemolítica (SUH). A maioria dos surtos de CH e SUH tem sido atribuída a estirpes do sorotipo entero-hemorrágico O157:H7, entretanto existe interesse crescente sobre o risco à saúde humana associado com os sorotipos STEC não-O157 veiculados em produtos de carne bovina, contaminados por fezes de ruminantes. Este trabalho teve como objetivos determinar a ocorrência de STEC em bovinos em matadouro frigorífico, localizado no Estado de Minas Gerais. A amostragem foi realizada em dois lotes, lote A com 75 bovinos e lote B com 51 bovinos, em três etapas da linha de abate: pele, após a sangria; carcaça, após a serragem; e fezes, durante a evisceração. Dez animais de cada lote foram amostrados. As amostras foram enriquecidas em caldo EC modificado, mEC e EC modificado acrescido de Novobiocina, mECn, seguindo-se o isolamento de colônias típicas em meio MacConkey sorbitol. Duzentos e quarenta e um isolados bacterianos obtidos nos dois lotes foram identificados como E. coli. Desses, 104 foram provenientes da pele, 93 do material fecal e 44 das carcaças. Por reação em cadeia de polimerase, foi detectado o gene stx em 18 isolados de E. coli. Esses isolados foram provenientes de seis bovinos, sendo quatro do lote A (origem fecal) e dois do lote B (carcaça). O enriquecimento em meio mECn resultou em isolados originados de um bovino, enquanto no mEC os isolados se originaram de cinco bovinos. Os isolados stx positivos foram posteriormente analisados para o gene hlyA, codificador de entero-hemolisina. Quatro isolados, positivos para o gene hlyA, foram provenientes de dois bovinos, um do lote A (origem fecal) e outro do lote B (carcaça). Desses, dois isolados da carcaça apresentaram fenótipo entero-hemolítico. Dez dos 18 isolados potencialmente STEC demonstraram ter efeito citotóxico em células Vero. Oito isolados, provenientes de três bovinos distintos, tiveram os amplicons stx seqüenciados. As seqüências traduzidas de três isolados da carcaça e de um das fezes corresponderam a Stx2, com 98% a 99% de identidade, com referências no GeneBank (NCBI). As seqüências inferidas de quatro amplicons, de origem fecal, corresponderam, com 94% a 96% de identidade, a Stx1. A presença de STEC nas fezes e carcaça de bovinos em matadouro frigorífico no Estado de Minas Gerais enfatiza a importância de implementação do sistema HACCP, e a necessidade de implementar, avaliar e validar medidas de controle que minimizem os riscos de contaminação cruzada durante o processo de abate.Item Seleção de leveduras fermentadoras de xilose e análise do exometaboloma de Meyerozyma guilliermondii UFV-1(Universidade Federal de Viçosa, 2014-07-28) Silveira, Fernando Augusto da; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8; Passos, Flávia Maria Lopes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781817D3; Silveira, Wendel Batista da; http://lattes.cnpq.br/7361036485940798; http://lattes.cnpq.br/4876491797184708; Rodrigues, Fábio de Avila; http://lattes.cnpq.br/9412371956762545; Nascimento, Antonio Galvão do; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4797432E8Existe grande interesse na seleção de leveduras que possam converter xilose, principal pentose liberada do pré-tratamento de biomassas lignocelulósicas, em metabólitos de interesse industrial, tais como combustíveis, ingredientes de alimentos, drogas antimicrobianas e fármacos. Portanto, cinco leveduras fermentadoras de xilose foram selecionadas a partir da coleção de culturas do Laboratório de Fisiologia de Micro-organismos do Departamento de Microbiologia da Universidade Federal de Viçosa. Dentre essas, destacou-se a levedura Meyerozyma guilliermondii UFV-1, capaz de consumir totalmente a xilose disponível no meio e convertê-la em etanol e outros metabólitos de interesse industrial. O potencial fermentativo dessa levedura foi avaliado em diferentes concentrações de oxigênio. A produção de etanol foi maior no cultivo em hipoxia cuja concentração de oxigênio dissolvido (OD) no meio de cultivo foi de 10% (1,98 g L-1). A maior produção de xilitol, 5,34 g L-1, foi obtida em hipoxia em Erlenmeyer. Verificou-se o efeito do etanol e dos inibidores ácido acético, furfural e hidroximetilfurfural, formados no pré-tratamento ácido, no crescimento de M. guilliermondii UFV-1. A levedura foi capaz de crescer em concentrações de etanol de 13,5 g L-1 que correspondem aos valores máximos que podem ser produzidos a partir da xilose liberada da hemicelulose. Além disso, M. guilliermondii UFV-1 cresceu nas concentrações de ácido acético, furfural e hidroximetilfurfural normalmente encontradas em hidrolisados hemicelulósicos. A análise do exometaboloma de M. guilliermondii UFV-1 revelou que não houve diferença no perfil de metabólitos produzidos nas duas condições de crescimento avaliadas: baixa velocidade específica de crescimento e velocidade específica de crescimento próxima da máxima. Foram identificados 5 metabólitos de interesse biotecnológico: os ácidos valérico, capróico e butírico, usados como antifúngicos; o glicofuranosídeo, utilizado pela indústria farmacêutica no controle de diabetes; e o ácido málico, composto utilizado na indústria alimentícia como acidulante e realçador de sabor. Portanto, a identificação desses metabólitos extracelulares demonstra o potencial biotecnológico dessa levedura não apenas para a produção de etanol e xilitol, mas de outros produtos químicos de interesse industrial.