Microbiologia Agrícola

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    Identificação e caracterização de uma poliuretanase com atividade lipolítica secretada por Serratia liquefaciens L135 isolada de leite cru
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-02-26) Salgado, Cleonice Aparecida; Vanetti, Maria Cristina Dantas; 7129515359990634
    Serratia liquefaciens é uma bactéria frequentemente encontrada no leite cru refrigerado e possui alto potencial de deterioração proteolítica. Neste trabalho, o potencial lipolítico de S. liquefaciens L135, isolada do leite cru refrigerado, foi avaliado e uma enzima lipolítica foi purificada e caracterizada. A atividade lipolítica de S. liquefaciens L135 foi verificada em diferentes temperaturas, sendo 30 °C a temperatura ótima de atividade da enzima. A termoestabilidade da enzima foi avaliada em leite desnatado reconstituído a 10% e o valor D encontrado nas temperaturas de 65, 72, 85 e 95 °C foi de, aproximadamente, 97, 66, 50 e 28 min, respectivamente. O valor Z da enzima foi de 60 °C e a simulação do tempo / temperatura de pasteurização lenta e rápida não resultou na inativação completa da atividade lipolítica. Além disso, esta enzima foi purificada 3,1 vezes com 21,5% de recuperação e apresentou, por zimografia, massa molecular de, aproximadamente, 65 kDa. A identificação por LC-MS/MS indicou tratar-se de uma poliuretanase, com massa molecular teórica de 64,864 kDa, confirmando a estimativa feita por zimografia, e pI teórico de 4,35. A poliuretanase homóloga identificada possui 615 resíduos de aminoácidos, sequência altamente conservada de lipase (GXSXG) que envolve a serina catalítica e é secretada pelo sistema de secreção do tipo I, chamado transportador ABC. In silico, a poliuretanase complexou-se com substratos de cadeia longa, média e curta, confirmando a atividade lipolítica. A poliuretanase exibiu atividade máxima em pH 8,0 e a 30 °C, foi estimulada na presença dos íons Ca 2+ e Ba2+ e inibida pelos íons Zn2+, Cu2+, Fe2+, Co2+, Ni2+ e Mn2+ na concentração final de 10 mM. Na presença de ditiotreitol (DTT), β-mercaptoetanol e dodecil sulfato de sódio (SDS), a atividade da enzima foi aumentada ou pouco influenciada. No entanto, na presença de Tween-80, Triton X-100 e de ácido etilenodiamino tetra-acético (EDTA), a atividade lipolítica foi inibida. Além disso, dietil pirocarbonato (DEPC) e fluoreto de fenilmetilsulfonil (PMSF), na concentração de 10 mM, inibiram completamente a atividade da poliuretanase, mostrando que os resíduos de serina e histidina são importantes para manter a conformação ativa. Este estudo é o primeiro que descreve que S. liquefaciens isolada do leite cru produz uma enzima lipolítica que apresenta estabilidade nas temperaturas de pasteurização, o que pode comprometer a qualidade do leite e seus derivados.
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    Validação do potencial anti-quorum sensing de compostos naturais e anti-inflamatórios em bactérias gram-negativas
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-03-29) Vargas, Erika Lorena Giraldo; Vanetti, Maria Cristina Dantas; http://lattes.cnpq.br/4757123615552425
    Quorum sensing (QS) é um mecanismo de comunicação célula-célula mediado por moléculas sinalizadoras que levam à expressão gênica diferencial em resposta a alta densidade populacional. Numerosas espécies de bactérias utilizam este mecanismo de comunicação intra e intercelular para promoverem as mudanças necessárias para adaptação em ambientes diversos. Chromobacterium violaceum é um patógeno humano oportunista que utiliza o QS mediado por acil homoserina lactonas (AHLs) para regular fenótipos como a formação de biofilme, produção de cianeto, síntese do pigmento violeta denominado violaceína, entre outros. Esta bactéria regula a produção de violaceína pelo sistema QS CviI/CviR, que produz e responde a AHLs de diferentes comprimentos de cadeia acila. Ao contrário do sistema de QS por AHLs completo presente em C. violaceum, em Salmonella, esse sistema é incompleto, devido a ausência da sintase da molécula sinal. Entretanto, Salmonella possui a proteína SdiA, homóloga a proteína LuxR, que permite detectar as AHLs produzidas por outras bactérias. Neste trabalho, foi realizada a prospecção in silico de moléculas indutoras do mecanismo de quorum sensing assim como, de prováveis inibidores (quorum quenching-QQ) de C. violaceum e testes in vitro foram realizados para avaliar o efeito destes compostos sobre a produção de violaceína. Além disso, foi testado o efeito do composto fitol e furanona na interferência de processos regulados por QS no metabolismo de Salmonella. Testes in silico mostraram que as AHLs, compostos de plantas e anti-inflamatórios não esteroides (AINEs) foram capazes de se ligar a proteína CviR de C. violaceum com altos escores de afinidade. Além disso, testes in vitro mostraram que a maioria dos compostos testados inibiu a produção de violaceína, sendo que, dentre os compostos de plantas, concentração de 600 µg/mL de ácido margárico e ácido palmítico foi mais efetiva para inibir a produção de violaceína por C. violaceum ATCC 12472 e mutante CV026. No entanto, dentre os AINEs testados na concentração de 500 µg/mL, somente o cetoprofeno mostrou inibição deste fenótipo nas duas estirpes. O crescimento de Salmonella na presença de 0,05 µM de N-dodecanoyl-homoserina lactona (C12-HSL), 0,05 µM de furanona ou 600 µg/mL de fitol durante 24 h de incubação em condições de anaerobiose não foi inibido. Entretanto, na presença de C12-HSL a concentração de tiol livre aumentou em fase exponencial de crescimento com 6 e 7 h de incubação, mas retornou ao mesmo nível observado em células cultivadas na ausência de C12-HSL, quando furanona e fitol foram adicionados na cultura, comparado com o tratamento controle. Os níveis de coenzima NADPH foram significativamente aumentados na presença de C12-HSL, furanona e fitol, enquanto o consumo de glicose foi menor em 6 h de incubação com C12-HSL. A produção de ácidos orgânicos em condições anaeróbias não foi afetada pelas moléculas de QS e QQ. Os resultados do presente trabalho mostraram a importância do docking molecular como uma ferramenta in silico válida para prospecção de compostos QQ em bactérias. A maioria dos compostos indicados in silico como potenciais QQ e testados in vitro inibiu a produção de violaceína em C. violaceum, indicando que podem interferir com o mecanismo de comunicação celular. Além disso, os resultados da influência de moléculas de QS e QQ sobre alguns processos metabólicos em Salmonella revelam a importância de conhecer e compreender os efeitos destes compostos, a fim de encontrar maneiras de reduzir a patogenicidade e, portanto, diminuir o número de surtos de salmonelose registrados em todo o mundo.
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    Microbiota do solo de bananeira comercial e do composto orgânico, isolamento de actinobactérias e avaliação do potencial biotecnológico
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-02-27) Melo, Rita de Cássia Cerqueira; Bazzolli, Denise Mara Soares; http://lattes.cnpq.br/0842448011353216
    A bananicultura é uma prática de grande importância socioeconômica difundida mundialmente, e a rizosfera de bananeiras pode apresentar microrganismos benéficos à cultura, bem como fitopatógenos. Da mesma forma, sistemas de compostagens podem veicular microrganismos benéficos e ou indesejáveis para o solo de plantios agrícolas, no processo de adubação. Neste contexto, o primeiro capítulo tem o objetivo de analisar a estrutura e diversidade de bactérias e fungos de solo sob cultivo de bananeira de plantio comercial em dois Estados Brasileiros, Bahia e Ceará, e das fases de um sistema de compostagem; no segundo capítulo, considerando o filo Actinobacteria um dos mais abundantes nestes ambientes, região rizosférica e sistema de compostagem, e com expressivo potencial biotecnológico já descrito, o objetivo foi isolar e identificar actinobactérias e avaliar o seu potencial biotecnológico no controle in vitro de fungos e bactérias patogênicas; e, no terceiro capítulo, a partir dos resultados do capítulo dois, o objetivo foi avaliar in vivo o efeito de bactérias do gênero Streptomyces na promoção do crescimento vegetal de bananeira e na supressão da doença mal-do-Panamá, doença causada pelo fungo Fusarium oxysporum f. sp. cubense, uma das mais importantes doenças da bananeira. Com o resultado das análises de bioinformática, na abordagem independente de cultivo deste trabalho referente ao capítulo um, foi possível observar diferenças na composição taxonômica e abundância de grupos microbianos nas amostras dos dois Estados e nas quatro fases da compostagem. Na abordagem dependente de cultivo, capítulo dois, 62 actinobactérias foram isoladas e identificadas por características morfológicas/culturais e pelo sequenciamento parcial do gene DNAr 16S. A fim de verificar o potencial antagonista in vitro, os 62 de actinobactérias foram avaliados pelo teste de pareamento de culturas contra três fungos filamentosos: Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc), Fusarium oxysporum (FO) e Colletotrichum lindemuthianum (CL). Doze isolados inibiram Foc, 11 inibiram o FO e 44 inibiram o CL, sendo que 10 isolados apresentaram atividade antagonista contra os três fungos filamentosos. Os metabólitos produzidos pelos 12 isolados que inibiram Foc, incluindo os 10 isolados que inibiram os três fungos filamentos, foram liofilizados e avaliados pelo teste de difusão em disco de papel. O extrato de um isolado apresentou atividade contra Candida albicans, cinco apresentaram atividade contra Staphylococcus aureus e sete contra Actinobacillus pleuropneumoniae. Em testes com mudas de bananeira da variedade Prata anã, capítulo três, os 12 isolados promissores para o controle de Foc foram testados in vivo em condições de casa de vegetação, para avaliação do potencial na promoção do crescimento vegetal de bananeira, bem como na supressão da doença mal-do-Panamá. As plantas tratadas com o isolado CAB-C 50 mostraram um maior desenvolvimento, diferindo dos demais tratamentos em função das diferentes variáveis avaliadas: altura da planta, diâmetro do pseudocaule, número de folhas, massa fresca, massa seca (p < 0,01 e 0,001). Na supressão da doença, os tratamentos com os isolados CAB-C 12, CAB-C 21, CAB-C 24, CAB-C 25 e CAB-C 50 foram os que mais diferiram do controle Foc, sendo os tratamentos com os isolados CAB-C 12 e CAB-C 50 os mais promissores. Um consórcio composto por quatro diferentes isolados Streptomyces sp., os mais promissores para o controle do Foc em teste in vitro, mostrou-se eficiente para a redução da doença no período avaliado. Assim, com este trabalho, foi possível verificar diferenças na composição microbiana (bactérias e fungos) em solos sob cultivo de bananeira e em composto maduro (fase IV da compostagem) e que existem actinobactérias com potencial para o controle de microrganismos patogênicos (fungos filamentosos e leveduriformes; e bactérias Gram negativas e Gram positiva) bem como potenciais agentes de promoção do crescimento vegetal de mudas de bananeira da variedade Prata anã. Palavras-chave: Agricultura. Actinomicetos. Controle Biológico. Antibiose. Promoção de crescimento.
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    Diversity of viruses present in cattle rumen and in genomes of Ralstonia sp species complex
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-09-16) Souza, Flávia de Oliveira; Zerbini, Poliane Alfenas; http://lattes.cnpq.br/9310917843169627
    Viruses are microorganisms present in all environments and can infect all types of organisms. Viral infection affects the dynamics and characteristics of its hosts, depending on the type of infection cycle the virus uses. Efforts have long been made to discover and characterize new viruses through techniques such as filtration, tissue culture, electron microscopy, serology, and vaccination under laboratory conditions. Advances in nucleic acid sequencing techniques, bioinformatics and independent laboratory culture maintenance techniques such as metagenomics have been used in studies to discover and characterize viruses in various environments. The ecological relationship between viruses and a given host group has been accessed through bioinformatics, identifying virus- derived sequences in already sequenced bacterial genomes. This analysis is possible because some bacteria-infecting viruses can integrate into the bacterial genome and remain in the form of a pest, replicating their genome along with the bacterial genome. In this sense, the growing number of complete sequences of bacterial genomes available in databases has made it possible to search for evidence of viruses integrated into these genomes on a global scale. Ralstonia solanacearum is the main phytopathogenic bacterium that causes bacterial wilt disease, capable of infecting about 200 cultures, distributed in about 50 different botanical families. In addition, R. solanacearum is recognized as a group of bacteria with genetic diversity, where strains can be phenotypically subdivided into four phylotypes. Despite current efforts to isolate infecting viruses, little is known about the occurrence and composition of pests in the genomes of Ralstonia spp. However, the importance of viruses in a complex environment has also been the focus of studies. In fact, viral diversity in different ecosystems has been accessed through independent laboratory culture methods and without the need to know the host of these viruses. The main environments surveyed are seawater, soil, feces and intestines of human and mammalian animals. The rumen is a component of the gastrointestinal system of ruminant animals that has as one of its main characteristics a complex population of microorganisms residing in this environment. Ruminate animals are unable to produce enzymes to degrade the fiber ingested in food. Ruminal microorganisms, unlike animals, produce these enzymes and, therefore, are directly responsible for obtaining energy from the animal and, consequently, for its health and profitability. Therefore, rumen microbiota is the focus of research, but studies on rumen viroma are still scarce. Due to the complex relationships between viruses and their hosts, either in relation to a specific group of bacteria, such as plant pathogens, or in symbiotic environments such as bovine rumen, we proposed to analyze the presence of virus derived sequences in the species complex genomes. Rasltonia solanacearum (RSC) available from the National Center for Biotechnology Information (NCBI) database. We also accessed the viroma of two dairy cows from the Federal University of Viçosa and were able to isolate the first mimivirus-like virus from these rumen samples. Keywords: Viral Diversity. Viral Ecology. Rasltonia species complex. Rumen virome.
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    Avaliação da promoção de crescimento vegetal, controle de fitopatógenos pelo Bacillus toyonensis BAC 3151 e caracterização do plasmídeo pBt52
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-24) Silva, Mirele Lopes da; Queiroz, Marisa Vieira de; http://lattes.cnpq.br/9323296572880336
    O feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.) é uma cultura de grande importância econômica para o Brasil, sendo o país o maior produtor. Além desse cenário, o feijão é um grão importante para o consumo humano. O aumento da produtividade e redução dos custos de produção tem sido associados com o uso de micro-organismos que possam ser integrados ao manejo. Alguns micro-organismos podem promover o crescimento das plantas por mecanismos diretos e indiretos como, por exemplo, fixação de nitrogênio, produção de sideróforos, solubilização de fosfato, produção de compostos orgânicos voláteis, produção de enzimas hidrolíticas e controle de patógenos. O feijoeiro comum, assim como os demais vegetais, também é colonizado por micro-organismos endofíticos e por micro-organismos fitopatogênicos. Estudos sobre a diversidade tanto de fungos quanto de bactérias endofíticas cultiváveis do feijoeiro já foram realizados. A diversidade de bactérias endofíticas foi mapeada em três cultivares de P. vulgaris e apresentou diferenças de distribuição entre as classes Actinobacteria, Alphaproteobacteria e Bacilli. Na classe Bacilli foi isolada uma cepa de Bacillus toyonensis, que apresenta um repertório de genes para a produção de vários antimicrobianos, como por exemplo as bacteriocinas. Alguns desses genes de bacteriocinas foram localizados em um plasmídeo pBt52 da bactéria B. toyonensis BAC 3151 que foi caracterizado e explorado. O perfil de plasmídeos de B. toyonensis BAC 3151 foi analisado neste estudo, a fim de atribuir as funções biológicas desconhecidas, pois muitos plasmídeos controlam propriedades importantes, tais como, resistência a antibióticos, utilização de fontes de carbono alternativas e produção de antimicrobianos. Neste estudo foi confirmada a presença do plasmídeo e foram caracterizados todos os genes. O plasmídeo pBt52 transporta gene que codifica bacteriocina, um gene que confere resistência ao antibiótico teicoplanina e vários genes responsáveis pela manutenção e mecanismos de conjugação deste plasmídeo. Além disso, foi avaliado se B. toyonensis BAC 3151 poderia promover o crescimento vegetal de plantas de feijoeiro, por ser um micro- organismos endofítico. O B. toyonensis BAC 3151 apresentou a capacidade de fixar nitrogênio, produzir diversas enzimas hidrolíticas (quitinase, protease e amilase) e compostos orgânicos voláteis, e também promoveu um aumento de 31,5 % e 33,6 % do comprimento das raízes e da massa seca das raízes do feijoeiro, respectivamente. Além disso, apresentou 95,2 % e 87,5 % de atividade de antagonismo in vitro e in vivo ao patógeno Sclerotinia sclerotiorum, reduziu a severidade da antracnose no feijoeiro, causada pelo Colletotrichum lindemuthianum, em 39,3 % e não apresentou atividade de antagonismo ao Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli. Portanto, neste trabalho foi demonstrado os benefícios dessa interação hospedeiro-endófito, na qual o B. toyonensis BAC 3151 tem potencial no controle de doenças fúngicas e de promover o crescimento do feijoeiro. Palavras-chave: Bacillus toyonensis BAC 3151. Promoção de crescimento. Plasmídeo. Micro-organismos. Controle biológico.
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    Caracterização e otimização da produção do bacteriófago lítico vB_EcoM_UFV09
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-02-26) Silva, Jéssica Duarte da; Paula, Sérgio Oliveira de; http://lattes.cnpq.br/0374413607226322
    Bacteriófagos, ou fagos, são vírus que infectam bactérias. Logo após serem descritos, esses organismos já eram usados no tratamento contra bactérias patogênicas, o que chamamos de fagoterapia. Porém, com a descoberta da penicilina no final dos anos 30, a utilização dos bacteriófagos na clínica médica foi perdendo a força até ser praticamente esquecido. O recente aumento de cepas bacterianas resistentes à antibióticos fez com que a fagoterapia voltasse a surgir como alternativa no tratamento de doenças bacterianas. Outra importante aplicação dos bacteriófagos é contra os biofilmes bacterianos. Dentre as enzimas fágicas com importante potencial contra os biofilmes estão as hidrolases do tipo depolimerases, e as lisinas. Sendo assim, o estudo envolvendo bacteriófagos ultrapassa a aplicação médica e começa a ser considerado para contextos mais amplos, em escala ambiental. Uma das principais limitações do uso de bacteriófagos em sistemas ambientais é a quantidade exponencialmente maior de partículas virais do que se é produzido normalmente em laboratório. Estudos e metodologias que visam otimizar e tornar economicamente viável a produção de bacteriófagos em larga escala são de extrema importância e representam uma demanda crescente. Este trabalho teve como objetivo caracterizar de forma morfológica e genômica o fago vB_EcoM_UFV09, que foi isolado a partir de amostras de esgoto, utilizando-se uma estirpe de bactéria Escherichia coli como hospedeira e analisar seu potencial na fagoterapia. Além disso, foi avaliado o impacto dos parâmetros de cultivo: temperatura, tempo de incubação, agitação e Multiplicity of Infection (MOI), na produção viral, comparando-se os resultados obtidos em meio mínimo M9 suplementado com seis fontes de carbono diferentes (acetato, ácido lático, piruvato, glicerol, succinato e glicose) e em meio rico Luria Bertani (LB). Nossos resultados demonstraram que o isolado pertence à família Myoviridae, mais especificamente ao gênero T4. A ausência de genes de patogenicidade e de resistência à antibióticos no genoma do vB_EcoM_UFV09, assim como a lise obrigatória da célula bacteriana após a infecção viral, são características promissoras para a utilização desse fago no controle do crescimento de estirpes da bactéria Escherichia coli. Além disso, a avaliação do impacto das variáveis de cultivo na produção da progênie viral demonstrou que fontes de carbono como succinato, glicose e LB proporcionam condições fisiológicas mais estáveis para a produção fago vB_EcoM_UFV09 em larga escala.
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    Análise funcional do RNA pequeno Rna01 na virulência de Actinobacillus pleuropneumoniae
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-30) Rosa, Jéssica Nogueira; Bazzolli, Denise Mara Soares; http://lattes.cnpq.br/5515162837114472
    Actinobacillus pleuropneumoniae (App), o agente causador da pleuropneumonia suína (PPS), é uma bactéria fastidiosa pertencente à família Pasteurellaceae. O estabelecimento da infecção por App envolve a expressão de fatores essenciais para virulência como: exotoxinas, polissacarídeos capsulares, lipopolissacarídeos (LPS) e vesículas de membrana externa (OMVs). Os fatores de virulência podem ser regulados por RNAs pequenos reguladores (sRNA). Foram identificados 35 sRNAs em App, o que inclui o sRNA dependente de Hfq denominado Rna01. Análises de alvos para o sRNA01 mostraram RNAs mensageiros relacionados às vias metabólicas centrais e componentes estruturais de membrana. O mutante para o Rna01 mostrou potencial atenuação em análises preliminares com Galleria mellonella. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi investigar a funcionalidade do RNA pequeno regulador Rna01 na virulência de App e o potencial da linhagem WT_Δrna01 como candidata a vacina viva atenuada. Os resultados obtidos mostraram que a ausência do Rna01 afeta negativamente o crescimento e adesão, reduz a produção de EVs e altera seu perfil proteico. Os testes de sobrevivência com G. mellonella mostraram atenuação da linhagem WT_Δrna01 (sobrevivência de 72%) e aumento da melanização das larvas após 48 horas de infecção. Larvas inoculadas com EVs da linhagem WT_Δrna01 apresentaram menor taxa de sobrevivência (50%). Análises em cultura de macrófagos RAW 264.7 mostraram menor taxa de infecção e produção de óxido nítrico (NO) quando infectadas com o mutante WT_Δrna01. Além disso, a quantidade de bactérias internalizadas por macrófagos infectados também foi reduzida. Todavia, as concentrações das citocinas TNF-α e IL-6 foram iguais e/ou maiores, que as encontradas na linhagem selvagem. Deste modo, sugerimos que a linhagem WT_Δrna01 possa induz resposta do tipo Th17 e Th1 in vitro. Concluímos que o Rna01 afeta positivamente na virulência de App e a linhagem WT_Δrna01 é uma possível candidata a vacina viva atenuada, mas são necessárias análises complementares. Palavras-chave: Pleuropneumonia suína. RNAs pequenos reguladores. Citocinas. Vacina viva atenuada14
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    Caracterização de fungos filamentosos do queijo minas artesanal da região da Canastra
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-29) César, Isabel Cristina da Rocha; Martin, José Guilherme Prado; http://lattes.cnpq.br/2165251978220321
    Produzido desde o início do século XIX, o Queijo Minas Artesanal (QMA) constitui um dos mais antigos e tradicionais queijos produzidos no Brasil. Sua produção é caracterizada pelo uso de leite cru recém-ordenhado em propriedades rurais, geralmente sendo submetido à maturação. De grande importância econômica, a fabricação do QMA é responsável pela geração de renda de inúmeros produtores rurais. Durante o processo de maturação, o complexo ecossistema microbiano dos queijos começa a se desenvolver, sendo que a diversidade microbiana determinará suas características organolépticas finais. Durante sua maturação, tanto os microrganismos iniciantes, que se desenvolvem primeiro, como aqueles microrganismos que não atuaram na acidificação inicial, participam ativamente desse processo. Dentre as principais fontes de microrganismos não adicionados intencionalmente no produto incluem-se a matéria-prima, os manipuladores, equipamentos, o ar e as salas de maturação. Dependendo das condições de umidade e temperatura das salas de maturação de queijos, os fungos podem se multiplicar rapidamente. Dessa maneira, a presença de fungos ambientais nesses locais constitui um fator importante, uma vez que são responsáveis por uma maturação desejável ou indesejável, uma vez que atuam alterando sabor, aparência e coloração do produto. Este estudo teve como objetivo caracterizar a micobiota de fungos filamentosos de QMA produzidos nos nove municípios produtores da região da Serra da Canastra. Para a obtenção dos isolados, técnicas como isolamento direto e suabe foram utilizadas. Os mesmos foram identificados por meio de sequenciamento da região ITS utilizando-se os primers ITS1 e ITS4. Dentre os isolados presentes no QMA, o fungo predominante foi Fusarium solani (21,8%), seguido de Geotrichum candidum (16,4%), Aspergillus versicolor (16,4%), Penicillium westerdijkiae (11%), Penicillium steckii (7,3%), Mucor circinelloides (3,6%), Mucor sp. (3,6%), Penicillium citrinum (3,6%), Fusarium oxysporum (3,6%), Fusarium lichenicola (1,81%), Aspergillus nomius (1,81%), Diaporthe infecunda (1,81%), Trichothecium roseum (1,81%), Debaryomyces hansenii (1,82%), Kodamaea ohmeri (1,82%) e Moniliella sp. (1,82%). A partir desses resultados, foi possível observar a variação da diversidade de espécies presentes no QMA da Serra da Canastra dentre as propriedades produtoras.
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    Diversidade da microbiota e aplicação de fungos micorrízicos arbusculares para a revegetação em sítio de pós-mineração de ferro
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-03) Cardoso, Emanuelle Burgos; Kasuya, Maria Catarina Megumi; http://lattes.cnpq.br/6786448273925074
    A ocorrência e distribuição da comunidade microbiana do solo é um dos critérios utilizados na avaliação do progresso dos sítios pós-mineração assim como estabelecimento da vegetação nesses ambientes. O papel crucial dos microrganismos na remediação, recuperação, reabilitação, restauração ou alguma combinação dessas práticas tem sido reconhecido por empresas que visam as boas práticas de mineração, principalmente no processo de descomissionamento. Neste contexto, o encerramento das atividades de exploração de ferro na mina Retiro das Almas, localizada no Quadrilátero Ferrífero, um dos maiores depósitos de minério de ferro do Brasil é alvo dos nossos estudos, que visam caracterizar a comunidade microbiana de dois sítios dentro da mina: um nativo (NT) e outro de pós-mineração revegetado (RV), além de avaliar a eficiência dos inoculantess de fungos micorrízicos arbusculares (FMAs), obtidos in situ no cultivo da gramínea ferro tolerante Paspalum densum para revegetar o sítio de pós-mineração. Assim, a estrutura da comunidade de procariotos abordada e revelada de forma pontual no capítulo 1, indicou maiores métricas ecológicas de diversidade e riqueza no sítio RV do que no sítio NT. Apesar das diferenças na estrutura da comunidade, a maioria dos filos e gêneros de procariotos foram compartilhados entre ambos os sítios, assim como o metabolismo de C e N, além do perfil microbiano de fixadores de nitrogênio e actinobactérias, o que indica resiliência de RV após 10 anos de descomissionamento deste sítio. Toda a comunidade de procariotos foi influenciada por características físico-químicas do solo, assim como a comunidade fúngica, abordada no capítulo 2. Para a comunidade fúngica avaliada em dois períodos distintos, o sítio NT e o período seco revelaram maiores métricas ecológicas de riqueza e diversidade e padrões de distribuiçãona abundância complexos, sobretudo para o filo Glomeromycota, associado com cerca de 90% das plantas terrestres. A inoculação de FMAs, provenientes da técnica on-farm, em rejeito de mineração e pilha de estéril, revelada do capítulo 3 demonstrou que a influência positiva entre ambos ou apenas um destes fatores no crescimento e colonização micorrízica de P. densum. Nossos resultados mostraram que uso da cama de frango em ambos os subprodutos da mineração é fortemente recomendada no processo de revegetação desta gramínea.
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    Antibiotic resistance profiles of enterobacteria isolated from weaned piglets
    (Universidade Federal de Viçosa, 2019-07-29) Barroso, Marlon do Valle; Mantovani, Hilário Cuquetto; http://lattes.cnpq.br/7155160567104646
    Pork meat is the most consumed source of animal protein in the world. In order to achieve this high productive efficiency, swine farming has undergone improvements in several sectors. Among these, the supply of antibiotics to improve animal performance and efficiency has been widely discussed, mainly due to the emergence of multiresistant bacteria. This study aimed to evaluate the susceptibility profile of Enterobacteriaceae isolated from feces of weaned piglets and to investigate the distribution of resistance genes and plasmids in the multiresistant isolates. A total of 618 isolates of the Enterobacteriaceae family were obtained from fecal samples fed a control diet without antibiotics (n = 384) or diet containing colistin and tylosin (n = 234). The susceptibility of the isolates against 12 antibiotics was evaluated using the breakpoint technique. From the isolates obtained, 54% (n = 334) showed resistance to at least four antibiotics and were defined as multiresistant. The highest frequencies of resistance were observed for the antibiotics tetracycline (81%), ampicillin (90%) and amoxicillin (85%). Significant differences in the frequency of colistin (P<0.001), cephalexin (P<0.001), kanamycin (P<0.026) and doxycycline (P<0.001) resistance were observed among the bacterial isolates obtained from treatment control + antibiotics when compared to the control. The isolates were grouped based on genotypic fingerprinting (BOX-PCR) and ninety-four isolates with greater number of resistance phenotypes had the 16S rRNA gene sequenced and the distribution of resistance genes assessed by multiplex PCR. Results indicated a close association between the presence of the resistance genes and the resistance phenotype observed in vitro. At least one gene for the extended-spectrum β-lactamases (bla TEM , bla SHV or bla CTX - M ) was found in all genera of enterobacteria analyzed. In addition, it was demonstrated the transfer, through conjugation, of the mcr-1 gene from the isolate Escherichia coli UFV-627 to the E. coli K12 (Nal R , F - ) recipient strain. These results indicate a high frequency of antibiotic resistance among bacterial isolates obtained from feces of weaned piglets that received rations with or without antibiotics, which corroborates the hypothesis that the gastrointestinal tract of piglets represents a potential reservoir of multiresistant enterobacteria. In addition, the results suggest that horizontal transfer mechanisms, such as conjugation and ICEs, between phylogenetically related species, may mediate the spread of these resistance genes in the gastrointestinal tract of these animals. Keywords: Enterobacteria. Antibiotic resistance. Weaned piglets. ESBL genes. mcr-1 and conjugative plasmids