Microbiologia Agrícola
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Item COLÔNIA: prototipação de um jogo de tabuleiro para popularização dos alimentos fermentados(Universidade Federal de Viçosa, 2023-08-25) Teixeira, Jonas da Silva; Martin, José Guilherme Prado; http://lattes.cnpq.br/9896919710544129Alimentos fermentados correspondem a um grupo de relevância histórica e cultural; além de constituirem parte significativa da dieta humana, alguns apresentam propriedades comprovadamente benéficas à saúde. Embora a procura por alimentos funcionais e de maior saudabilidade tenha crescido nos últimos anos, ainda se observa certa resistência quanto às características sensoriais de alguns produtos produzidos via fermentação. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um jogo de tabuleiro para popularização dos alimentos fermentados, visando favorecer a adaptação ao gosto destes alimentos, além de contribuir como ferramenta lúdica no ensino-aprendizagem da microbiologia da fermentação de alimentos. O itinerário da pesquisa foi conduzido pelo método Design Science Research (DSR). Para concepção inicial dos principais conteúdos a serem abordados no jogo e os desafios observados no ensino tradicional, foram entrevistados especialistas (docentes) das áreas de Microbiologia, Nutrição e Tecnologia de Alimentos; um especialista em jogos de tabuleiro também foi entrevistado, contribuindo para a criação de uma lista de concorrência. O desenvolvimento do jogo se iniciou por um processo de abstração até a confecção manual de um protótipo de baixa fidelidade. Para sua avaliação, 44 estudantes de Graduação foram recrutados para compor o painel de jogadores. Entrevistas foram aplicadas para avaliação dos aspectos de jogabilidade e mecânica, sendo submetidas à análise de conteúdo Bardiniana utilizando-se a ferramenta Iramuteq. Para avaliação dos diferentes objetivos do uso do jogo foi utilizada uma abordagem de triangulação de métodos mistos. Os resultados demonstraram que o jogo contribuiu para o ensino aprendizagem, gerando motivação e confiança, além de possibilitar o incentivo à introdução e adaptação ao gosto de alimentos novos junto ao público-alvo. Palavras-chave: Microbiologia. Fermentação. Serious Games. Design Science Research.Item Aplicação de microrganismos lipolíticos em alimentos e na biodegradação de poliuretanos(Universidade Federal de Viçosa, 2023-05-03) Salgado, Cleonice Aparecida; Vanetti, Maria Cristina Dantas; http://lattes.cnpq.br/7129515359990634Os microrganismos são considerados fontes inestimáveis de compostos extracelulares, como enzimas, tornando-os o centro da investigação científica, tanto nos aspectos de biodeterioração em que estão envolvidos, quanto para aplicação biotecnológica. As lipases são enzimas responsáveis principalmente, pela hidrólise dos triacilgliceróis e amplamente exploradas comercialmente. Além da hidrólise, conseguem catalisar a reação reversa, a esterificação e, também reações como transesterificação, interesterificação, acidólise e aminólise. Dese modo, as lipases são reconhecidas como catalisadores promissores no melhoramento da qualidade sensorial de diversos produtos alimentícios além de, biodegradarem diversos substratos. A lipase de Serratia liquefaciens L135 foi identificada como uma poliuretanase, ou seja, uma enzima com a capacidade de biodegradar poliuretanos (PU). Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de explorar o potencial desta enzima na indústria de alimentos e na biodegradação de poliuretanos por S. liquefaciens isoladamente ou em consórcio microbiano. Para isso buscou-se isolar potenciais biodegradadores de PU do intestino de larvas de Galleria mellonella e avaliar o efeito da associação com S. liquefaciens na biodegradação de PU in vitro. O primeiro capítulo apresenta uma revisão de literatura que abrange as aplicações de lipases em indústrias de laticínios; óleos e gorduras; panificação e confeitaria; carnes; sabores e aromas; e outras indústrias alimentícias. Além disso, aborda as técnicas de fermentação de baixo custo e engenharia de proteínas, como promissoras para produção de lipases microbianas. No segundo capítulo são apresentados resultados de estudos in silico e in vitro do potencial biodegradador de PU por S. liquefaciens L135 e sua poliuretanase. Para o estudo in silico, foram construídos monômeros e tetrâmeros de PU para realizar o docking molecular com a poliuretanase modelada e validada de S. liquefaciens. Foi possível verificar que os PU ligaram ao resíduo de aminoácido S207, que faz parte da tríade catalítica e é responsável pela ação hidrolítica da poliuretanase. Os monômeros apresentaram melhores scores de ligações, quando comparados com os tetrâmeros, devido às interações estéricas repulsivas. Os PU, Impranil® e poli[4,4'-metilenobis(fenilisocianato)-alt-1,4- butanodiol/di(propilenoglicol)/policaprolactona] (PCLMDI), foram usados para as análises in vitro. A biodegradação do Impranil® por S. liquefaciens e sua poliuretanase foi confirmada em ágar pela formação de halos transparentes. Além disso, foram preparados discos de Impranil® e filmes de PCLMDI e a biodegradação durante o cultivo de S. liquefaciens foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Foi possível averiguar a formação de rachaduras e poros na superfície dos PU, configurando o processo de biodegradação. No terceiro capítulo, foi feito o isolamento da bactéria Staphylococcus warneri do intestino da larva de G. mellonella, com potencial de biodegradação de PU. O isolado S. warneri, denominado de UFV_01.21, foi avaliado em cultura pura e em consórcio com S. liquefaciens L135 para biodegradação de PU e, em ambas condições, o Impranil® foi utilizado como única fonte de carbono. Com seis dias de incubação, suspensões de Impranil® em caldo Luria-Bertani (LB) inoculadas com S. liquefaciens, S. warneri e com consórcio microbiano, apresentaram 88, 96 e 76% de biodegradação, respectivamente. Tanto nos discos de Impranil®, quanto em filmes de PCLMDI, S. warneri em cultura pura e em consórcio com S. liquefaciens foi capaz de aderir e formar biofilmes. Por MEV, foi possível confirmar a biodegradação devido a formação de rachaduras, sulcos, poros e rugosidades nas superfícies dos PU avaliados. Esses resultados reforçam o potencial dos microrganismos e suas enzimas para biodegradação de PU. Palavras-chave: Biocatalisadores. Biodegradação. Consórcio Microbiano. Docking Molecular.Item Bactérias Endofiticas da seringueira promovem o controle de Sclerotinia sclerotiorum e o crescimento do feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.)(Universidade Federal de Viçosa, 2022-02-18) Vieira, Mísia Souza; Queiroz, Marisa Vieira de; http://lattes.cnpq.br/7579914906625554O manejo de doenças e a produtividade dependem muitas vezes do uso de fertilizantes e agroquímicos, gerando poluição dos solos e da água e degradação ambiental. Além disso, os agroquímicos afetam o microbioma do solo e, simultaneamente, selecionam patógenos resistentes devido a sua aplicação excessiva. Assim, há uma demanda por estratégias alternativas, como o emprego de bactérias endofíticas promotoras de crescimento para o aumento da produtividade de diferentes culturas, como o feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris), e para o controle de doenças de plantas. Neste trabalho, bactérias endofíticas do caule, folhas e raízes de seringueiras da floresta Amazônica foram identificadas e testadas quanto ao antagonismo ao fitopatógeno Sclerotinia sclerotiorum, causador do mofo-branco, e a capacidade de promoção de crescimento do feijoeiro comum. Foram avaliadas 84 bactérias e foram identificados representantes dos gêneros Achromobacter, Bacillus, Burkholderia, Enterobacter, Ochrobactrum, Paenibacillus, Stenotrophomonas e Tsukamurella. Os isolados 18 (18B22C-AM - Bacillus sp.), 140 (140B5F-AM — Bacillus sp.), 174 (174B28R-AM — Bacillus sp.) e 201 (201B16R-AC — Bacillus sp.) foram eficientes no controle in vitro de S. sclerotiorum, e nesses isolados foram identificados genes de lipopeptídeos, como bacilomicina A, fengicina, iturina A e surfactina. Os isolados 18, 174 e 201 foram eficientes no controle de S. sclerotiorum em plantas de feijoeiro comum. A avaliação dos mecanismos de promoção de crescimento in vitro revelou que os isolados 18, 140 e 174 fixam nitrogênio em meio FNB e os isolados 140 e 174 produzem sideróforos em meio sólido Casaminoácidos (CAA) contendo CAS (cromo azurol S). Todos os isolados promoveram aumento na massa seca da raiz do feijoeiro comum e os isolados 18, 174 e 201 promoveram aumento da massa seca da parte aérea. Portanto, os resultados encontrados demonstram o potencial das bactérias endofíticas de seringueiras para o desenvolvimento de bioinoculantes para o controle do fitopatógeno S. sclerotiorum e para a promoção do crescimento do feijoeiro comum. Palavras-chave: Endófitos. Promoção de crescimento. Controle biológico. Feijão.Item Cinética de solubilização de fosfatos de rocha e promoção do crescimento de Eucalyptus grandis por Aspergillus niger(Universidade Federal de Viçosa, 2022-11-18) Nascimento, Jaqueline Maria do; Costa, Maurício Dutra; http://lattes.cnpq.br/5286287099001962O fósforo (P) adicionado ao solo está sujeito a reações que o tornam indisponível para absorção radicular e nutrição das plantas. Os ácidos orgânicos apresentam a capacidade de solubilizar P de rochas fosfáticas (RF) e ainda podem atuar na disponibilização de P fixado ao solo. Pouco se conhece sobre a cinética de solubilização de P em RF por ação de ácidos orgânicos, as transformações desse mineral durante o processo de solubilização e capacidade de microrganismos solubilizadores em disponibilizar o P adsorvido ao solo e promover crescimento vegetal. Os objetivos com esse trabalho foram estudar a cinética de solubilização de RF e avaliar alterações morfológicas, químicas e mineralógicas após contato com ácidos orgânicos além de, avaliar a liberação de P e a contribuição para a nutrição e crescimento de plantas de eucalipto por Aspergillus niger FS1. A cinética de solubilização de RF foi realizada utilizando a técnica de stirred flow, com soluções dos ácidos orgânicos. As amostras foram coletadas por 160 mimutos e o P foi quantificado. Ácido oxálico 10 mmol L-1 foi o tratamento que apresentou maior taxa máxima de solubilização para os RF. A eficiência de solubilização aumentou quando o ácido oxálico foi combinado com ácido cítrico. Para estudos sobre a morfologia, composição química e mineralogia dos RF após o contato com ácidos orgânicos foi colocado separadamente 0,3 g de cada RF em frascos Erlenmayer 250 ml e misturados com 100 ml de soluções de ácidos orgânicos a 10 mmol L-1. Os frascos foram incubados a 28 °C, 150 rpm por 48 horas. O material residual foi submetido à MEV com EDS acoplado e à DRX. O tratamento que mais promoveu alterações, morfológicas, químicas e mineralógicas foram aqueles que tinham ácido oxálico em sua composição. O elemento que mais sofreu diminuição nas amostras foi o P. As análises de DRX confirmaram a identidade dos minerais de oxalato de cálcio formados, sendo, whewelita, wedelita e caoxita. A whewelita foi a forma encontrada em todos os RF reativos e a wedelita e caoxita estavam presente nos RF de baixa reatividade. Para avaliar a liberação de P em solo altamente intemperizados e a contribuição para a nutrição e crescimento de plantas de eucalipto foi feita adsorção de P ao solo com quantidades que variaram de 5 a 25 % da CMAP e incubou-se por 40 dias. Tratamentos com Ca2(H2PO4)2 e RF de Araxá também foram avaliados. Aspergillus niger FS1 aumentou a massa seca de raiz das plantas de eucalipto em todos os tratamentos, além de auxiliar no acúmulo de macronutrientes na planta. O acúmulo de P aumentou 234 % na parte aérea e 650 % na raiz. Os microrganismos solubilizadores de P e seus metabólitos são importantes para o processo de solubilização de P de RF e para promoção de crescimento vegetal. Destacando grande potencial de aplicação biotecnológica desses microrganismos e de seus metabólitos. Nossos dados contribuem para a construção de alternativas à adubação fosfatada convencional para culturas agrícolas e florestais buscando diversificar formas de manejo de P. Palavras-chave: Ácidos orgânicos. Fósforo. Microrganismos.Item Whole genome sequencing analysis and biofilm formation in Salmonella Enteritidis PT4 578(Universidade Federal de Viçosa, 2022-12-21) Carneiro, Deisy Guimarães; Vanetti, Maria Cristina Dantas; http://lattes.cnpq.br/8439780121899755Salmonella is an important and versatile foodborne pathogen responsible for numerous infections and deaths worldwide. The difficulty of controlling and eradicating this pathogen is related to its ability to form complex aggregates of cells, called biofilms. In a biofilm, cells are surrounded by a matrix of self-produced extracellular polymeric substances that protect against various types of stress, such as desiccation, sanitization, and host defense. The Salmonella biofilm matrix is composed mainly of curli fimbriae and cellulose. A highly complex genetic network regulates the synthesis of these components. The main regulators associated with biofilm formation are the CsgD protein and the bis-(3'-5')-cyclic dimeric guanosine monophosphate (c-di-GMP), which activate the biosynthesis of most polymers. Quorum sensing, a cellular communication mechanism, is also described as an important regulator of biofilm formation in Salmonella. The objective of the present work was to sequence the genome of Salmonella enterica Enteritidis PT4 578, analyze the main characteristics related to virulence and biofilm formation, and compare the genome and morphotype formation, biofilm and motility phenotypes with four related serotypes. Furthermore, evaluate the influence of temperature, atmosphere, and quorum sensing on biofilm formation by this serotype. Genome analyzes showed that Salmonella Enteritidis PT4 578 has 165 virulence genes, representing 3.66% of the coding sequences. Twelve Salmonella pathogenicity islands (SPI) were identified, some extremely conserved, such as SPI1 and SPI2, that encode the apparatus of intracellular invasion and colonization,. A total of thirteen gene clusters related to fimbriae biosynthesis, including the csg operon, were also annotated. Under aerobic and anaerobic conditions, Salmonella Enteritidis PT4 578 can form a biofilm on stainless steel coupons at 28 °C and only under aerobic conditions at 37 °C. However, adding of N-hexanoyl homoserine lactone (C12-HSL) to the anaerobic culture medium reverses the biofilm formation phenotype at 37 °C. In this condition, C12-HSL increased the expression of the adrA gene, a diguanylate cyclase related to the synthesis of c-di-GMP and the luxS gene, which is part of another quorum sensing mechanism that uses autoinducer-2 (AI-2), present in Salmonella. Although it did not influence biofilm formation at 28 ºC, C12- HSL also increased luxS expression. The data presented here reinforce the role of conditions of atmosphere and temperature, as well as quorum sensing in Salmonella biofilm formation. Finally, it reports a possible connection between this pathogen's two main quorum sensing mechanisms. Understanding the factors that influence Salmonella biofilm formation can contribute to developing control and eradication strategies. Keywords: Genome analyses. Biofilm. Quorum sensing.Item Endophytic Trichoderma spp. for the control of common bean anthracnose(Universidade Federal de Viçosa, 2021-08-30) Alvarado Moreno, Hanna Lorena; Queiroz, Marisa Vieira de; http://lattes.cnpq.br/7669413148255144Fungi of the Trichoderma genus can protect plants by mechanisms of action such as mycoparasitism, antibiosis, competition and/or systemic resistance induction. Isolates from megadiverse environments such as the Amazon rainforest may have the potential to protect plants of agronomic interest and provide information that amplify the current knowledge of the Trichoderma genus. The objective of the present work was to select Trichoderma spp. endophytes from the Amazon Forest with potential for use as biological control (BC) agents of common bean anthracnose caused by the phytopathogen Colletotrichum lindemuthianum and to know the mechanisms of action by which these selected isolates were able to protect the plants against the phytopathogen. First, 20 Trichoderma spp. isolates were evaluated in a greenhouse and four isolates were selected: Trichoderma sp. VIC44363 17F (T17F), Trichoderma sp. VIC44364 22F (T22F), Trichoderma koningiopsis 24F (Tk24F) and Trichoderma erinaceum 610F (Te610F) which also promoted the growth of common bean. The isolates T22F, Tk24F and Te610F were studied regarding the mechanism of action, whether it is mycoparasitism, antibiosis, competition and/or resistance induction. For this, it was evaluated whether the application site of the antagonist, before the application of the phytopathogen, would influence the BC efficiency. Isolates T22F, Tk24F and Te610F protected the plant when they were applied to the root and leaves in a preventive way, but the isolate Tk24F stood out because it protected the plant in a systemic way when it was applied only to the root and locally when it was applied in the aerial part; similarly, the isolate Te610F stood out because it had a local effect as the disease severity was reduced by application to the aerial part. Subsequently, with the in vitro experiments, it was determined that the isolates Tk24F and Te610F were the most efficient antagonists to C. lindemuthianum due to the mechanisms of mycoparasitism, antibiosis and competition. Finally, with the T17F isolate, a separate study was carried out due to the possibility of it producing mycotoxins that limit its use as a BC agent, as it belongs to the Brevicompactum clade, which is recognized for producing mycotoxins of the trichothecenes type. The characterization of the T17F isolate was carried out through in vitro experiments in which the mechanisms of mycoparasitism, antibiosis and competition were evaluated, and the genome was sequenced to perform a comparative analysis with genomes from other species belonging to the same clade. By in vitro test it was determined that antibiosis is the mechanism used by the T17F isolate to antagonize C. lindemuthianum and other phytopathogenic fungi. By comparing trichothecenes cluster of the isolate Trichoderma sp. VIC44363 with the cluster of T. brevicompactum and T. arundinaceum, it was concluded that Trichoderma sp. VIC44363 can produce the mycotoxin trichodermin, as it lacks the tri23 gene. Trichoderma sp. VIC44363 has the potential to produce new compounds, as it has a cluster that is different from those found in T. brevicompactum. Trichoderma erinaceum 610F and T. koningiopsis 24F are potential biocontrol agents for C. lindemuthianum, due to the joint use of mechanisms that inhibit the infection of C. lindemuthianum. Keywords: Endophytes. Transformation with RFP. Colonization. qPCR. Transcriptomics. Genomics. Brevicompactum. Viride.Item Diversidade de fungos, com ênfase em FMA, em áreas afetadas pelo rejeito de mineração de ferro ao longo de três anos após o rompimento da barragem do Fundão(Universidade Federal de Viçosa, 2020-02-18) Prado, Isabelle Gonçalves de Oliveira; Kasuya, Maria Catarina Megumi; http://lattes.cnpq.br/3640365647553917Os impactos ambientais decorrentes de atividades de mineração são problemas recorrentes que o Brasil vem enfrentando. Em novembro de 2015, com o rompimento da Barragem do Fundão em Bento Rodrigues, Minas Gerais, uma onda de rejeitos da extração de minério de ferro foi lançada no ambiente causando a destruição do patrimônio público e religioso e gerando um impacto ambiental de grande proporção. O rejeito depositado sobre o solo do local passou a constituir o Tecnosolo, sendo suas propriedades e funções d erivadas da atividade humana técnica. Para o restabelecimento das funções ecossistêmicas desenvolvidas pela biota do solo, a revegetação, com a introdução de plantas e a microbiota associada ao sistema radicular das plantas foi implementada. Entre esses microrganismos, os fungos micorrízicos arbusculares (FMA) exercem influência no crescimento, na aclimatação dos vegetais em condições de estresses bióticos e abióticos e possuem um potencial de atuarem no funcionamento e estabilidade dos ecossistemas, ciclagem de nutrientes, processos de recuperação, restauração ambiental e reflorestamento. Dessa forma, a análise da composição microbiana da área impactada torna-se uma estratégia importante a fim de utilizá-la na recuperação das áreas atingidas pelo rejeito de mineração. Este trabalho propôs estudar a diversidade de fungos presente nos solos sob sistemas de revegetação usando gramíneas e leguminosas ao longo de três anos, após o rompimento da barragem do fundão, fazendo uso de técnicas tradicionais e moleculares, a fim de monitorar a biodiversidade fúngica, em especial os FMA. As amostragens foram realizadas em março e setembro de 2016, 2017 e 2018. Foram coletadas amostras dos solos e sistema radicular de cinco áreas ao todo, sendo REC1, REC2 e REC3 áreas afetadas pelo rejeito em processo de recuperação, PASTrec área de pastagem afetada pelo rejeito, PAST e UND áreas de pastagem e de floresta respectivamente, adjacentes às áreas afetadas. Foram realizadas análises químicas dos solos e teor de matéria orgânica. A extração do DNA foi realizada a partir de amostras dos solos. Para análise de fungos totais foi realizado o sequenciamento ITS – Illumina MiSeq. A análise da composição da comunidade de FMA foi realizada por DGGE, porcentagem de colonização micorrízica e análise dos morfotipos pela extração de esporos do solo. Pelos resultados dos dados químicos das amostras de solo, observou-se a separação em dois grupos, aqueles afetados (REC e PASTrec) e não afetados (UND e PAST). Embora tenham se passado três anos, as características químicas dos Tecnosolos não sofreram grandes alterações. Entretanto, para os fungos, observou-se um aumento na diversidade, havendo prevalência de determinados grupos, com predominância de Ascomycota e Basidiomycota, com formação de três agrupamentos, sendo UND, PAST e áreas afetadas pelo rejeito. Houve variação na composição da microbiota em REC ao longo dos anos. Em 2016, REC2 apresentou distribuição distinta da comunidade fúngica e em 2017 e 2018 essa área se aproximou de outras áreas de REC. Avaliando a similaridade de OTUs total entre todas as áreas foi observada maior similaridade de REC com PAST indicando uma aproximação das áreas afetadas com as pastagens. Analisando dados de FMA de REC em relação à UND foi observado um aumento na similaridade em função do tempo. Conclui-se que o processo de revegetação vem produzindo um efeito positivo na diversidade de fungos, incluindo FMA, revelando-se mais sensíveis que os dados químicos. O manejo da área em processo de revegetação e a implementação de outras espécies vegetais, como arbóreas nativas, serão imprescindíveis para que haja progresso de recuperação. Análises periódicas da diversidade fúngica servirão de ferramenta para monitorar se o manejo está sendo adequado. Palavras-chave: Fungos micorrízicos arbusculares. Monitoramento. Análise de cronosequência. Sequenciamento de Nova Geração. Práticas de manejo. Área de mineração.Item Tubulavírus: evolução, taxonomia e interação com seu hospedeiro(Universidade Federal de Viçosa, 2022-02-08) Rezende, Rafael Reis de; Alfenas-Zerbini, Poliane; http://lattes.cnpq.br/1345754571046369Os tubulavírus são vírus filamentosos que infectam procariotos sem causar lise celular. O processo de infecção por esses vírus, em muitos casos, induz modificações no perfil fenotípico do hospedeiro. Alguns tubulavírus que infectam bactérias fitopatogênicas dos gêneros Ralstonia e Xanthomonas geram modificações do perfil fenotípicos, em alguns casos aumento em outros redução da patogenicidade dessas bactérias. A biologia e a aplicação biotecnológica dos tubulavírus têm sido amplamente exploradas, mas estudos sobre a interação com hospedeiros e evolução deste grupo de vírus são escassos. As bactérias do complexo de espécies Ralstonia solanacearum (CERS) são habitantes naturais do solo capazes de infectar e matar plantas. Estas bactérias migram do solo para o xilema através das raízes da planta, onde desenvolvem um denso biofilme que interrompe o fluxo do xilema, causando a morte das plantas. Ralstonia solanacearum inovirus Brazil 1 (RSIBR1) é um tubulavírus que infecta a bactéria Ralstonia solanacearum isolado UB2014, o qual é incapaz de causar morte em plantas de tomates. Para determinar se há relação entre a ausência de patogenicidade da R. solanacearum e a infecção pelo RSIBR1, o isolado Ralstonia pseudosolanacearum GMI1000 agressivo foi infectado com o RSIBR1. Após a infecção o isolado R. pseusosolanacearum perdeu a capacidade de causar em morte de plantas de tomate, porém foi capaz de colonizar as plantas ao longo do tempo. Portanto, este trabalho teve como objetivo ampliar o entendimento da interação tubulavírusRalstonia, bem como estudar a evolução dos tubulavírus e propor um sistema para sua classificação taxonômica. Observamos que a evolução dos tubulavírus é principalmente impulsionada pelos hospedeiros e que a reconstrução filogenética a partir de genomas completos dos tubulavírus pode ser uma ferramenta adequada para a classificação desse grupo de vírus, que permite associar sua história evolutiva com suas características biológicas. Estudo de formação de biofilme in vitro mostrou que a infecção pelo RSIBR1 induz um aumento na produção de biofilme pela bactéria Ralstonia pseudosolanacearum; modula a produção de biofilme em diferentes condições como a disponibilidade ou ausência de glicose e nutrientes; induz a perda da motilidade do tipo swimming, e reduz da motilidade do tipo twitching. Além disso, a infecção pelo RSIBR1 altera a estrutura do biofilme da bactéria R. pseudosolanacearum com estrutura semelhante a tapete para um biofilme com estruturas com estruturas esféricas. Além disso, a infecção por RSIBR1 leva a uma redução na produção das vesículas externas, afeta a quantidade de DNA e proteínas nestas vesículas. For fim, também detectamos que o RSIBR1 expressa dois RNAs pequenos. Em conjuntos, esses fatores podem estar envolvidos na conversão fenotípica das bactérias do CERS. Palavras-chave: Tubulavírus. Complexo de espécie Ralstonia solanacearum. Biofilme. Vesículas extracelulares. Pequenos RNAs regulatórios. Evolução dos tubulavírus. Taxonomia de tubulavírus.Item Micobiota do feijoeiro-comum e pectinases de Colletotrichum lindemuthianum(Universidade Federal de Viçosa, 2020-12-07) Silva, Leandro Lopes da; Queiroz, Marisa Vieira de; http://lattes.cnpq.br/6728877522381020Tanto micro-organismos endofíticos como fitopatogênicos são capazes de colonizar o feijoeiro-comum (Phaseolus vulgaris). Muitos micro-organismos endofíticos são conhecidos por beneficiarem a planta hospedeira. Para identificar esses micro- organismos, um dos métodos utilizados é o sequenciamento de alto rendimento. Alguns micro-organismos também podem prejudicar as plantas hospedeiras, como o fungo fitopatogênico Colletotrichum lindemuthianum. Esse fungo é responsável por causar antracnose no feijoeiro-comum, ocasionando perdas na produtividade dessa cultura. Nos fungos fitopatogênicos, as enzimas que degradam a pectina presente no tecido vegetal são consideradas importantes fatores de virulência. Os principais objetivos desse trabalho foram determinar a micobiota de três variedades de feijoeiro- comum; identificar e analisar genes que codificam pectinases em C. lindemuthianum; inativar por meio da transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens (ATMT) e caracterizar funcionalmente genes que codificam pectinases. Ao analisar a micobiota endofítica do feijoeiro-comum foi observado que a diversidade de fungos variou mais entre os órgãos da planta do que entre as variedades. Foram identificados 283 gêneros, distribuídos entre as variedades. Em cada órgão da planta e na rizosfera foram identificados diferentes números de gêneros. Foi encontrado um maior número de interações positivas nos órgãos da parte aérea em todas as variedades. Para conhecer as pectinases produzidas por C. lindemuthianum, os genes que codificam pectinases foram identificados e analisados. O fungo C. lindemuthianum possui 58 genes que codificam para pelo menos seis tipos de enzimas envolvidas na degradação da pectina. Esses genes apresentam em sua região promotora sítios de ligação para diferentes fatores transcricionais. O número de introns foi variável entre os genes. Quarenta e cinco porcento dos genes são diferencialmente expressos em algum momento na interação com o seu hospedeiro. As pectinases putativas apresentaram sítios para N-glicosilação, presença de peptídeo sinal e diferentes pontos isoelétricos. Foram obtidos de 35 a 56 transformantes para cada gene em condições iguais de transformação. Todos os transformantes analisados apresentaram uma única cópia do cassete de deleção. Foram obtidos dois mutantes para o gene pecCl6 (pectato lisase 6 de C. lindemuthianum). Os mutantes ∆pecCl6 obtidos não apresentaram diferença de morfologia, crescimento, esporulação e patogenicidade em relação ao selvagem. Neste trabalho foi observado que a diversidade de fungos endofíticos pode ser acessada de forma eficiente com o sequenciamento de amplicons ITS e que essa diversidade pode variar entre órgãos vegetais distintos e a rizosfera de uma única variedade de planta. Também foi constatada a presença de maior quantidade e diversidade de genes que codificam pectinases em C. lindemuthianum do que o encontrado em outros fitopatógenos, o que sugere que pelo menos parte destas pectinases devem ser importantes para a patogenicidade do fungo C. lindemuthianum. Além disso, foi demonstrado que o sistema ATMT pode ser utilizado para deleção de genes em C. lindemuthianum. Palavras-chave: Microrganismos endofíticos. Sequenciamento de amplicons ITS. Antracnose. Enzimas pectinolíticas. Transformação de fungo.