Navegando por Autor "Sousa, Cassiana Severiano de"

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Caracterização in silico de genes da biossíntese de lipídeos e utilização de eixos embrionários e nós-cotiledonares na transformação genética de soja
(Universidade Federal de Viçosa, 2012-06-15) Sousa, Cassiana Severiano de; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/2126288732219018; Otoni, Wagner Campos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786133Y6; Fietto, Luciano Gomes; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4763824H8; Soares, Taís Cristina Bastos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4768998Y9
As atividades das enzimas oleoil dessaturase, 1,2-diacilglicerol colinafosfotransferase (CPT) e a lisofosfatidilcolina aciltransferase (LPCAT) regulam a biossíntese de lipídeos em plantas. Dessa forma, um melhor conhecimento dos genes que codificam essas enzimas é importante no processo de melhoramento genético da qualidade do óleo de soja. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar in silico os genes que codificam as enzimas CPT e LPCAT em soja e avaliar a utilização de eixos embrionários e nós-cotiledonares como explantes em protocolos de cultura de tecidos para transformação genética, via RNA de interferência, com cassetes de silenciamento do gene da oleil dessaturase. Análises computacionais mostraram que o genoma da soja apresenta dois genes que codificam a CPT e dois genes que codificam a LPCAT, sendo que um desses genes apresentou um transcrito alternativo. Nas regiões promotoras foram identificados cis-elementos responsáveis pela expressão semente-específica e também de resposta a estresses biótico e abiótico. A análise in silico indica que os genes são expressos em diferentes condições de estresse, em embriões somáticos em diferenciação, em sementes imaturas, em tecidos de raiz e em calos. A análise das sequências aminoacídicas revelou a presença de domínios transmembrana e a busca da localização celular indicou que as enzimas CPT e LPCAT estão localizadas no retículo endoplasmático. Como esses genes se expressam em sementes, eles são possíveis candidatos à manipulação genética visando a melhoria da qualidade do óleo. Dois protocolos de transformação de soja foram avaliados para a possível obtenção de soja com óleo que apresente maior estabilidade oxidativa. Nesse sentido, as variedades comerciais CAC-1 (de ciclo tardio) e CD-201 (de ciclo precoce) foram submetidas à infecção via Agrobacterium tumefaciens da linhagem KYRT1. O protocolo utilizado para os eixos embrionários foi mais rápido, com meios de cultura menos elaborados em relação à composição e um maior número de plantas foi transferido para a casa de vegetação, onde permaneceram até a produção de vagens e sementes. Foi possível realizar todas as etapas, desde a infecção até regeneração e aclimatação das plantas, para as variedades utilizadas, pelos protocolos descritos.
Construção de cassetes de expressão para silenciamento de genes da biossíntese de ácidos graxos em soja via RNA de interferência
(Universidade Federal de Viçosa, 2007-02-28) Sousa, Cassiana Severiano de; Barros, Everaldo Gonçalves de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781285J6; Oliveira, Luiz Orlando de; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781626T2; Moreira, Maurílio Alves; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4796105P2; http://lattes.cnpq.br/2126288732219018; Ribon, Andréa de Oliveira Barros; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727026E6; Lima, Andréia Barcelos Passos; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4766019H4
O óleo de soja é composto em sua maior parte por gordura insaturada, sendo que os ácidos graxos polinsaturados (ácidos linoléico e linolênico), monoinsaturado (ácido oléico) e saturados (ácido palmítico e esteárico) correspondem, em média, a 61%, 25% e 15%, respectivamente. Alterações nas proporções relativas destes ácidos graxos na fração óleo, podem ser obtidas pela modificação genética da expressão de enzimas-chave da biossíntese de ácidos graxos polinsaturados, através de transformação genética de plantas via silenciamento gênico. Dentre essas enzimas, destacam-se as dessaturases, as fosfotransferases e as aciltransferases. Através da modificação da expressão dessas enzimas, é possível a obtenção de linhagens de soja com óleos com menor conteúdo de ácido linolênico, maior conteúdo de ácido oléico e, conseqüentemente, maior estabilidade oxidativa. Os objetivos deste trabalho foram isolar os fragmentos dos genes da oleoil dessaturase, 1,2-diacilglicerol colinafosfotransferase e lisofosfatidilcolina aciltransferase e construir cassetes de expressão para o silenciamento, via RNA de interferência, para esses três genes em sementes de soja. Foi possível isolar os fragmentos dos três genes, subclonar os fragmentos sense e antisense no vetor pKANNIBAL e transferir as construções para o vetor binário pCAMBIA 3301. Foram obtidos quatro cassetes de expressão para silenciamento gênico. Destes, dois foram para o gene da oleoil dessaturase, um para o gene da 1,2-diacilglicerol colinafosfotransferase e o outro para o gene da lisofosfatidilcolina aciltransferase. Para os três genes foram obtidos cassetes de silenciamento dirigidos pelo promotor 35SCaMV, sendo que para a dessaturase também foi obtido o cassete com o promotor do gene da subunidade α da proteína de reserva de soja β-conglicinina.