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Tipo: Artigo
Título: Sensitivity and specificity of indirect ELISA for the detection of antibody titers against BVDV from beef cattle raised in Pará State
Autor(es): Filho, José Dantas Ribeiro
Viana, Rinaldo Batista
Kzam, Aline do Socorro Lima
Monteiro, Bruno Moura
Campello, Cláudio Cabral
Sousa, Eliomar de Moura
Souza, Damazio Campos de
Okuda, Liria Hiromi
Pituco, Edviges Maristela
Abstract: The aims of this study were to establish the prevalence of anti-bovine viral diarrhea virus (BVDV) antibodies (Ab) in beef cattle raised in Pará state, to compare the prevalence of seropositive animals to BVDV using a commercial indirect enzyme-linked immunosorbent assay kit (iELISA) and the virus neutralization (VN) test, and finally, to determine the sensitivity (Se) and specificity (Sp) of the iELISA for the detection of anti-BVDV Ab using VN as a gold standard. A total of 400 serum blood samples from Nelore cows aged at least 24 months from five farms in the Pará state from two mesoregions (Metropolitan Region of Belem and Northeast of Pará) were analyzed. All animals were vaccinated against brucellosis and foot-and-mouth disease. The examination of anti-BVDV Ab with VN was performed in the Laboratory of Bovine Viruses of the Biological Institute of Sao Paulo as described in the Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. For VN, bovine kidney epithelial cells from the Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) strain were used. The determinations of anti-BVDV Ab were performed with the iELISA test at the Laboratory of Immunology and Microbiology of the Federal Rural University of Amazonia according to the manufacturer’s recommendations. The results were classified as follows: (a) correct positive diagnosis, (b) incorrect positive diagnosis, (c) correct negative diagnosis, and (d) incorrect negative diagnosis, according to the results obtained from VN. From the values obtained from VN and iELISA, Se [(a ÷ a + d) × 100], Sp [(c ÷ c + b) × 100], positive predictive value [(a ÷ a + B) × 100], and negative predictive value [(c ÷ c + d) × 100] were calculated for iELISA. The frequencies (%) of seropositive animals were determined and compared both between the different tests (iELISA and VN) and between the different farms (1, 2, 3, 4, and 5). The statistical analysis was performed with a significance level of 5%. The prevalence of seropositive animals was found to be different (P < 0.0001) using VN (39.25% [157/400]) and iELISA (54.50% [218/400]). It was observed that the Se and Sp of the iELISA assay were 98.72% and 74.07%, respectively. Of the total, 25.93% (63/243) of the samples were considered false-positive and 1.27% false-negative (2/157). It was concluded that the BVDV infection is present in beef cattle herds of the state of Para. Based on the speed of execution, ease of handling, and high Se of the iELISA, it is suggested that this assay can be used as a screening test for the detection of anti-BVDV Ab with the aim of eliminating infected animals from large herds of beef cattle.
Para se estabelecer a prevalência de anticorpos (Ac) anti-BVDV em rebanhos bovinos de corte no Estado do Pará e comparar a prevalência de animais soropositivos para o BVDV utilizando-se um kit comercial de ELISA-I (“Enzyme-linked Immunosorbent Assay” indireto) frente ao teste de VN (virusneutralização) e determinar a Se (sensibilidade) e Sp (especificidade) do ELISA-I para detecção de Ac anti-BVDV frente a VN, foram analisadas 400 amostras de soros sanguíneos de vacas Nelore com idade mínima superior a 24 meses, vacinadas contra brucelose e febre aftosa, provenientes de cinco fazendas no estado do Pará, localizadas em duas Mesorregiões (Metropolitana de Belém e do Nordeste Paraense). A pesquisa de Ac anti-BVDV determinados pela VN foi realizada no Laboratório de Viroses de Bovídeos do Instituto Biológico de São Paulo, conforme descrito no Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. Foram utilizadas células epiteliais de rim bovino da linhagem Madin Darby Bovine Kidney – MDBK). Já as determinações dos Ac anti-BVDV pelo ELISA-I foram realizadas no Laboratório de Imunologia e Microbiologia da Universidade Federal Rural da Amazônia, conforme recomendações do fabricante. Os resultados verificados foram classificados como diagnóstico positivo correto (a), diagnóstico positivo incorreto (b), diagnóstico negativo correto (c), diagnóstico negativo incorreto (d), em função dos resultados obtidos na VN. A partir desses valores, calculou-se para o ELISA-I a sensibilidade [(a / a + d) x 100], a especificidade [(c / c + b) x 100], o valor preditivo positivo [(a / a + b) x 100] e o valor preditivo negativo [(c / c + d) x 100]. Foram determinadas as frequências (%) de animais positivos, tanto entre os testes (ELISA-I e VN) como entre as diferentes fazendas (1, 2, 3, 4 e 5). A estatística de inferência foi realizada com nível de significância de 5%. A prevalência de animais soropositivos foi diferente (P<0,0001) entre os teste de VN [39,25% (157/400)] e ELISA-I [54,50% (218/400)]. Observou-se que os valores de Se e Sp do ELISA-I corresponderam a 98,72% e 74,07%, e que 25,93% (63/243) das amostras foram falso-positivas e 1,27% (2/157) falso-negativas. Concluiu-se que a infecção pelo BVDV está presente em rebanhos de corte do estado do Pará. Devido à rapidez, praticidade e alta sensibilidade do ELISA-I, sugere-se que este teste seja utilizado como teste de triagem para a detecção de Ac anti-BVDV, visando identificar os animais infectados de grandes rebanhos de bovinos de corte.
Palavras-chave: Beef cattle
ELISA
Sensibility
Specificity
Viral diarrhea
Virus neutralization
Editor: Semina: Ciências Agrárias
Tipo de Acesso: Open Access
URI: http://dx.doi.org/10.5433/1679-0359.2017v38n5p3049
http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/17635
Data do documento: 14-Ago-2017
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